提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，罗汉果组培过程和/或栽培过程中施加茉莉酸甲酯。本发明专利技术能够有效提高罗汉果葫芦二烯醇的产量，具有见效快、成本低、操作简单、方便实施、产品无毒无残留等优点，以满足罗汉果葫芦二烯醇的大规模生产，具有较强的实用性和推广价值。

Method for improving the content of two enol in calabash gourd

The present invention discloses a method for improving the content of two enol in gourd fruit. The invention can effectively improve the yield of two gourd Momordica enol, has the advantages of quick, low cost, simple operation, easy implementation, product non-toxic residue, in order to meet the mass production of Momordica grosvenori gourd two enol, has strong practicability and popularization value.

【技术实现步骤摘要】
提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法
本专利技术涉及植物生物
更具体地说，本专利技术涉及一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法。
技术介绍
罗汉果(Siraitiagrosvenorii)为中国特有的珍贵药用和甜料植物。其果实性凉、味甘，具有清热润肺，利咽开音，滑肠通便和抗癌等功效，活性成分甜苷V为世界上最强的非糖甜味物质之一，是蔗糖甜度的300～400倍，广泛应用于食品、保健品和药品中，是糖尿病人、肥胖者和高血压患者的理想糖替代品。研究发现，葫芦二烯醇是甜苷V生物合成的中间产物，在罗汉果果实发育后期，葫芦二烯醇被完全消耗殆尽转化成甜苷V，然而，葫芦二烯醇只存在占果重不足15％的果肉内，且含量极低，严重制约了罗汉果产业的健康发展。茉莉酸甲酯广泛地存在于植物体中，外源应用能够激发防御植物基因的表达，诱导植物的化学防御，产生与机械损伤和昆虫取食相似的效果。现有技术中未见有茉莉酸甲酯提高罗汉果葫芦二烯醇含量的报道。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其能够有效提高罗汉果葫芦二烯醇的产量，具有见效快、成本低、操作简单、方便实施、产品无毒无残留等优点，以满足罗汉果葫芦二烯醇的大规模生产，具有较强的实用性和推广价值。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，在罗汉果组培过程和/或栽培过程中施加茉莉酸甲酯。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，组培过程中，将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度1300～1500Lux、光照时间8h/d、温度21～25℃条件下培养28～31d，其中，茉莉酸甲酯的添加量为50～400μmol/L。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，栽培过程中，将茉莉酸甲酯配成浓度为50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液，罗汉果授粉20～30d后，每天喷洒茉莉酸甲酯溶液于罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施8～12d。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，包括：步骤一、将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度1300～1500Lux、光照时间8h/d、温度21～25℃条件下培养28～31d，其中，茉莉酸甲酯的添加量为50～400μmol/L；步骤二、将步骤一培养后的组培苗移栽至田间，罗汉果授粉20～30d后，每天喷洒浓度为50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液于罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施8～12d。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为50mmol/L茉莉酸甲酯的乙醇母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯的乙醇母液添加到MS固体培养基中，至茉莉酸甲酯浓度为50～400μmol/L，灭菌并冷却至24～26℃，其中，MS固体培养基包括：MS、1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/L吲哚丁酸、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、以及1.0g/L活性炭。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，MS固体培养基还包括调节剂，调节剂的添加量为5μmol/L，调节剂包括质量比为2:1:0.1的竹醋液、石菖蒲水提物、茶皂素。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，组培过程包括两阶段，第一阶段培养15d，每隔3～5d更换一次MS固体培养基，被更换的MS固体培养基加热至熔化为液态混合物，将海绵浸泡在液态混合物中充分吸收，然后覆盖在更换的MS固体培养基上方，直至下次更换培养基时移除并更换；第二阶段培养15d，每隔5～7d更换一次MS固体培养基，每次更换后的第2d对接种有组培苗的MS固体培养基进行雾化处理，雾化剂为质量分数为1％的酪蛋白溶液。优选的是，所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，茉莉酸甲酯溶液中添加有促进剂，促进剂的添加量为5μmol/L，促进剂包括质量比为1:1:5的芹菜素、复合维生素B以及皂角米蛋白，皂角米蛋白的制备方法为：将皂角米溶解于碱液中，震荡、离心、分离，上清液即得皂角米蛋白。本专利技术至少包括以下有益效果：第一、本专利技术通过在组培和/或栽培过程施加茉莉酸甲酯，能够诱导罗汉果葫芦二烯醇代谢关键酶(如葫芦二烯醇合酶等)基因的高表达，从而在短期内快速提高罗汉果葫芦二烯醇的含量；组培过程或栽培过程优选茉莉酸甲酯的施加浓度和施用时间，将组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，或将茉莉酸甲酯溶液喷洒于授粉20～30d后的罗汉果表面，促进苗木中葫芦二烯醇的积累，可以最大限度地提高药用植物活性成分的含量；第二、本专利技术通过在MS固体培养基中加入由竹醋液、石菖蒲水提物、茶皂素复配的调节剂，辅助促进对葫芦二烯醇合酶防御蛋白的活性水平，实现次生物质的积累，石菖蒲水提物还具有抗真菌作用，茶皂素提高调节剂在罗汉果组培苗的附着力，竹醋液促进罗汉果组培苗生长，浓度配比避免茶皂素沉淀；第三、两阶段分别不同时间间隔更换培养基，补充罗汉果生长不同阶段因消耗而所需的营养物质，第一阶段浸泡海绵避免使用过的培养基营养物质浪费，同时覆盖在上方具有保水作用、营养物质下沉吸收，第二阶段利用酪蛋白溶液雾化处理，避免组培苗叶片表面营养物质的流失，促进根部对培养基中茉莉酸甲酯的吸收；第四、栽培阶段喷洒由芹菜素、复合维生素B以及皂角米蛋白复配的促进剂，促进对茉莉酸甲酯的吸收，芹菜素抑制生物酶的渗出，复合维生素B促进氨基酸的代谢，皂角米蛋白含有丰富必需氨基酸优于小麦、玉米蛋白，还具有一定驱虫作用。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。<实施例1>步骤一、用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为200mmol/L茉莉酸甲酯的乙醇母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯的乙醇母液添加到MS固体培养基中，至茉莉酸甲酯的添加量为200μmol/L，灭菌并冷却至24～26℃，其中，MS固体培养基包括：MS、1.5mg/L6-苄氨基腺嘌呤、0.3mg/L吲哚丁酸、3.5g/L琼脂、30g/L蔗糖、以及1.0g/L活性炭；步骤二、将罗汉果组培苗接种在步骤一得到的含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度1300～1500Lux、光照时间8h/d、温度21～25℃条件下培养30d，然后将组培苗移栽至田间进行常规田间培本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，在罗汉果组培过程和/或栽培过程中施加茉莉酸甲酯。

【技术特征摘要】
1.一种提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，在罗汉果组培过程和/或栽培过程中施加茉莉酸甲酯。2.如权利要求1所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，组培过程中，将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度1300～1500Lux、光照时间8h/d、温度21～25℃条件下培养28～31d，其中，茉莉酸甲酯的添加量为50～400μmol/L。3.如权利要求1所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，栽培过程中，将茉莉酸甲酯配成浓度为50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液，罗汉果授粉20～30d后，每天喷洒茉莉酸甲酯溶液于罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施8～12d。4.如权利要求1所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，包括：步骤一、将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的MS固体培养基中，置于相对湿度60～66％、光照强度1300～1500Lux、光照时间8h/d、温度21～25℃条件下培养28～31d，其中，茉莉酸甲酯的添加量为50～400μmol/L；步骤二、将步骤一培养后的组培苗移栽至田间，罗汉果授粉20～30d后，每天喷洒浓度为50～400μmol/L的茉莉酸甲酯溶液于罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施8～12d。5.如权利要求2或4所述的提高罗汉果中葫芦二烯醇含量的方法，其特征在于，用体积分数为2％的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成浓度为50mmol/L茉莉酸甲酯的乙醇母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦荣昌，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西,45