一种依巴斯汀中有关物质的检测方法技术

本申请公开了一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，其使用高效液相色谱法，并进行梯度洗脱。使用本检测方法，可以有效检测分离依巴斯汀原料药当中的各个成分，且分析时间适宜，操作简便。

A method for the determination of related substances in ebastine

【技术实现步骤摘要】
一种依巴斯汀中有关物质的检测方法
本专利技术涉及药物化学分析领域，具体涉及一种依巴斯汀中有关物质的检测方法。
技术介绍
依巴斯汀（Ebastine），化学名为1-[4-(1,1-二甲基乙基)苯基]-4-[4-(二苯基甲氧基)-1-哌啶基]-1-丁酮，其分子式为C32H39NO2，分子量为469.67，结构式如下所示：。依巴斯汀又名开思亭；艾巴停；司可停，通常状态下为非吸湿性、白色结晶粉末。依巴斯汀是组胺H1受体阻断剂，其抗组胺活性在低浓度时有竞争性，高浓度时是非竞争性的。临床上用于变应性疾病，包括儿童变应性鼻炎、成人的终年鼻炎、季节性鼻炎、枯草热和慢性荨麻疹等。依巴斯汀对H1受体有高度的选择性，无中枢抑制作用。与特非那定相比，依巴斯汀作用强而持久。依巴斯汀对组胺诱发的支气管痉挛具有保护作用，动物实验证实其保护作用是特非那定的4.5倍，阿斯米唑的2.9倍，连续用药不蓄积。其代谢产物Carebestine对组胺诱发的支气管痉挛的保护作用是原药的3倍。依巴斯汀具有拮抗白三烯C4的作用，可抑制白三烯C4诱发的支气管痉挛，有抗胆碱作用。可抑制试验性喘息和鼻过敏。。在依巴斯汀的原料药生产或制剂过程当中，会产生一些杂质，沿用了欧洲药典的编号，目前所知的主要杂质如下表所示：依巴斯汀欧洲药典9.6版中列举了杂质A～杂质H共8个杂质，但根据依巴斯汀的工艺（如下式所示），上述杂质并不是依巴斯汀有关物质研究的所有杂质。对依巴斯汀工艺进行分析：原料对叔丁基-4-氯苯丁酮可能残留；原料对叔丁基-4-氯苯丁酮易发生副反应生成杂质3A和杂质3B；原料对叔丁基-4-氯苯丁酮可能残留有结构类似物4-氯苯丁酮，最后生成依巴斯汀结构类似物杂质I；中间体4-(二苯甲氧基)哌啶可能残留有过度反应产物杂质J。经过上述分析，杂质I、杂质J、杂质3A、杂质3B、对叔丁基-4-氯苯丁酮在依巴斯汀有关物质研究中必不可少。现有的分析技术无法对依巴斯汀及13中杂质进行有效检测分离。在欧洲药典9.0，韩国药典第十版中公开了一种检测方法，其采用乙腈-磷酸-氢氧化钠溶液进行等度洗脱，其pH为5.0，其使用的色谱柱是氰基硅胶柱（4.6×250mm,5μm）。且其分析时间周期长达3个小时，主峰约110分钟出峰，且拖尾严重，测定很不方便，不利于实际推广应用。我国的国家药品标准方法，采用甲醇-醋酸铵缓冲液(pH3.9)为流动相，检测波长为254nm，但该波长下个别杂质无吸收，且杂质无法达到有效分离，不能准确检测杂质。在欧洲药典9.6，英国药典2019版上也公开了一种依巴斯汀原料药的检测方法，其描述的方法采用等度洗脱的方式，存在部分杂质无法有效分离的情况。因此，在现今技术存在上述问题的情况下，需要对依巴斯汀有关物质分析方法进行改进，建立一个快速、有效的检测分离方法，以区分并检测分离出依巴斯汀原料药内的有关物质。
技术实现思路
本申请的主要目的是提供一种依巴斯汀中有关物质的检测方法。我方技术方案是基于在现有技术中存在着不能有效检测分离依巴斯汀原料药中各杂质的问题进行的改进，并摸索优化了相关方案而成的。本申请采用了以下技术方案：一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，所使用的色谱柱为C18色谱柱，流动相分为A和B两相，流动相A由pH值为5.7的磷酸缓冲溶液和甲醇组成，流动相B由乙腈和甲醇所组成，并进行梯度洗脱。优选的，pH值为5.7。优选的，流动相A中磷酸缓冲溶液与甲醇的体积比为25:75，流动相B中乙腈与甲醇的体积比为42:38。优选的，梯度洗脱的程序如下表所示：本申请的另外一种较为优选的方案如下：一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取依巴斯汀原料适量，用溶剂稀释成每1ml中约含2.0～3.0mg的溶液，作为供试品溶液；（2）对照溶液的制备：量取供试品溶液，用稀释液定量稀释制成每1ml含2.0～3.0μg的溶液，作为对照溶液；（3）测定：采用C18反相色谱柱，以加入二乙胺调节pH值为5.7的磷酸缓冲溶液和甲醇为流动相A，磷酸缓冲溶液和甲醇的体积比为25:75，以乙腈和甲醇为流动相B，乙腈和甲醇的体积比为42:38，使用梯度洗脱，梯度洗脱的程序如下所示：取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；进一步的，供试品溶液的浓度为2.5mg/ml。进一步的，其中液相色谱的分析条件为以下（ⅰ）至（ⅵ）中的一项或者多项：（ⅰ）色谱柱的规格为4.6*150mm，5μm，（ⅱ）色谱柱的型号为Shim-packCLC-ODS(M)C18，（ⅲ）色谱柱温度为40±5℃，（ⅳ）流动相比例的变换范围：±2%，（ⅴ）流速为0.8～1.2ml/min，（ⅵ）进样量为10～30μl，（ⅶ）检测波长为210nm或252nm。本申请还包括了此检测方法在药物杂质检测分离当中的应用。由于采用以上技术方案，本申请的有益效果在于：1.在我方申请的条件下，依巴斯汀原料药中的有关物质比现有技术多，对于原料的分析更加全面且均能有效检测分离，而且检测分析的周期较之前短，节约了检测的时间。2.操作简便，适于实际应用和推广。附图说明图1是我方实施例1的依巴斯汀样品在210nm波长下的检测色谱图；图2是我方实施例1的依巴斯汀样品在252nm波长下的检测色谱图；图3是我方实施例2的依巴斯汀样品在流速为0.8ml/min在210nm波长下的检测色谱图；图4是我方实施例2的依巴斯汀样品在流速为0.8ml/min在252nm波长下的检测色谱图；图5是我方实施例2的依巴斯汀样品在流速为1.2ml/min在210nm波长下的检测色谱图；图6是我方实施例2的依巴斯汀样品在流速为1.2ml/min在252nm波长下的检测色谱图；图7是我方实施例3的依巴斯汀样品在柱温为35℃下在210nm波长下的检测色谱图；图8是我方实施例3的依巴斯汀样品在柱温为35℃下在252nm波长下的检测色谱图；图9是我方实施例3的依巴斯汀样品在柱温为45℃下在210nm波长下的检测色谱图；图10是我方实施例3的依巴斯汀样品在柱温为45℃下在252nm波长下的检测色谱图；图11是对比实施例1的色谱条件下依巴斯汀样品的检测色谱图；图12是对比实施例2的色谱条件下依巴斯汀样品的检测色谱图。具体实施方式下面通过具体实施例和附图对本申请作进一步详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。实施例1一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，包括以下步骤：（1）供试品溶液的制备：取依巴斯汀原料适量，用溶剂稀释成每1ml中约含2.5mg的溶液，作为供试品溶液；（2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，其特征在于，所使用的色谱柱为C18色谱柱，流动相分为A和B两相，流动相A由pH值为5.6～5.8的磷酸缓冲溶液和甲醇组成，流动相B由乙腈和甲醇所组成，并进行梯度洗脱。/n

【技术特征摘要】
1.一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，其特征在于，所使用的色谱柱为C18色谱柱，流动相分为A和B两相，流动相A由pH值为5.6～5.8的磷酸缓冲溶液和甲醇组成，流动相B由乙腈和甲醇所组成，并进行梯度洗脱。


2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述pH值为5.7。


3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸缓冲溶液与甲醇的体积比为25:75。


4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相B中乙腈与甲醇的体积比为42:38。


5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下表所示：









时间（min）
A
B


0
30%
70%


20
15%
85%


30
15%
85%


35
30%
70%


45
30%
70%






。


6.一种依巴斯汀中有关物质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取依巴斯汀原料适量，稀释成每1ml中约含2.0～3.0mg的溶液，作为供试品溶液；
（2）对照溶液的制备：量取供试品溶液，用稀释液定量稀释制成每1ml含2.0～3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卉，谭稳，肖稳定，
申请(专利权)人：湖南九典制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43