一种超声辅助提取、酸解灵芝多糖及单糖组成检测方法技术

本发明专利技术属于多糖提取及检测技术领域，具体涉及一种超声辅助提取、酸解灵芝多糖及单糖组成检测方法。本发明专利技术提供了一种超声辅助提取、酸解灵芝多糖的方法，具有速度快、效率高等显著优势，结合UPLC‑CAD法可以实现灵芝多糖单糖组成的快速分析测定。对灵芝多糖酸解产物的单糖组成及含量进行分析比较，结果表明：灵芝多糖的完全水解产物中木糖的含量最高，其次为阿拉伯糖，而鼠李糖、半乳糖、岩藻糖含量接近，葡萄糖和甘露糖的含量较低，研究结果为评价灵芝药材质量及指导进一步开发利用提供了数据支持和技术参考。

A method of ultrasonic assisted extraction, acidolysis of Ganoderma lucidum polysaccharide and monosaccharide composition detection

【技术实现步骤摘要】
一种超声辅助提取、酸解灵芝多糖及单糖组成检测方法
本专利技术属于多糖提取及单糖组成检测
，具体涉及一种超声辅助提取和酸解灵芝多糖及通过超高液相色谱-电雾式检测器测定灵芝多糖中单糖组成的检测方法。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。灵芝多糖(GanodermaLucidumpolysaccharides)是灵芝菌丝的次生代谢产物，是灵芝的主要功效成分，具有降血脂、降血糖、抗氧化、清除自由基、抗衰老、抗肿瘤、提高免疫力等作用。多糖是由单糖通过糖苷键结合而成，准确测定多糖的单糖组成以及各单糖的含量，对于多糖的质量控制具有重要意义。水解是多糖组成测定的关键步骤，不同糖苷键对水解的敏感性不同，解聚单糖的难易程度也不同，多糖的水解效率将会直接影响其单糖组成测定的准确性。近年来，研究者们对多糖的降解方法进行了大量研究，主要包括酸水解、碱水解、酶解以及电磁辐射等。其中，酸水解法反应速率快，水解产物发生结构变化的机率较小，所以在多糖的单糖组成分析中应用较广。但同时也发现，传统的高温酸水解方式用于多糖的水解，时间长、能耗大、效率较低。超声提取技术是利用超声波产生的强烈的空化效应和机械振动加速药物有效成分进入溶剂，促进提取的进行，增加有效成分的溶出率，提高药材的利用率，节约能源并且避免了高温对提取成分的影响，具有省时、节能、提取率高等优点，已经广泛的应用于天然产物中有效成分的提取，但在多糖水解方面的应用鲜有报道。超高效液相色谱技术(UltraPerformanceLiquidChromatography，UPLC)是近年来推出的一种采用亚2微米填料色谱柱的超高效液相色谱系统，具有高分离度、高效率、节省溶剂等优势。电喷雾式检测器(CAD)是近年来在市场上被逐步推广的一款高灵敏度、通用型检测器，其检测信号不依赖于被检测物质的化学结构，对不同结构的化合物有一致的响应，已逐渐用于糖类、脂质类、固醇类和皂苷类等样品的检测，可以耐受进行梯度洗脱溶剂，与蒸发光散射检测器(EvaporativeLightScatteringDetector，ELSD)相比灵敏度较高。
技术实现思路
本专利技术提供了一种超声辅助酸解(UltrasonicAssistedAcidHydrolysis，UAH)-UPLC-CAD法测定灵芝多糖单糖组成的方法，并对6批赤芝多糖的单糖组成和含量进行测定，以期为药食两用真菌多糖的单糖组成研究提供方法和数据参考。基于上述研究成果，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术第一方面，提供一种灵芝多糖提取方法，所述提取方法包括超声辅助提取获取提取液，通过加入醇溶液对提取液进行沉淀从而获取粗多糖，通过酸解粗多糖获得灵芝多糖中单糖的组成。优选的，所述超声辅助提取的步骤如下：将灵芝子实体粉末置于去离子水中加热超声提取，离心获取上清部分即为提取液。进一步优选的，所述灵芝为赤芝。进一步优选的，所述粉末与去离子的加入比例为1.8～2.2g：28～32mL。进一步优选的，所述加热温度为88～92℃。进一步优选的，所述超声提取时间为28～32min。进一步优选的，所述离心参数为4800～5200r/min，10min。优选的，所述醇溶液为乙醇溶液，具体的，为93～97％乙醇(v/v)；使提取液中乙醇浓度为80％。优选的，向提取液中加入醇液后将提取液置于3～5℃静置10～14h后离心，获取沉淀物，即为粗多糖。进一步优选的，将所述沉淀物置于水浴锅中干燥，之后采用热水复溶，离心后定容。优选的，所述酸解采用三氟乙酸(TFA)溶液进行处理。优选的，所述酸解粗多糖的方法如下：向粗多糖溶液中加入三氟乙酸溶液置于超声中在65～75℃下酸解0.8～1.2h。进一步优选的，所述酸解产物采用甲醇洗涤、氮气吹干。本专利技术第二方面，提供一种灵芝多糖的检测方法，所述检测方法包括超高液相色谱(UPLC)及电雾式检测器(CAD)对多糖中的单糖进行检测，所述超高效液相采用Amide色谱柱。优选的，所述流动相：流动相A-0.8％甲酸水溶液，流动相B-乙腈。优选的，所述超高液相色谱采用梯度洗脱，梯度洗脱方式如下：0～6min，85％B；6～8min，85％B～72％B；8～12min，72％B；12～15min，72％B～50％B。优选的，所述流速为0.3～0.5mL·min-1。优选的，所述CAD检测参数如下：气体源为N2，压力61.2Psi，Filter5.0sec，雾化器温度35℃。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的超声辅助酸解方法具有简便、高效的特点，相比现有技术中将灵芝发酵后分离发酵物的方法更加简便易行；另外，本专利技术研究表明，三氟乙酸用于灵芝多糖的水解效果更为彻底，能够将七种单糖成分尽数检出，且易于除去，用于灵芝多糖提取具有良好的技术效果。本专利技术还提供了一种超高液相色谱分离检测多糖单体的方法，对于上述七种单体成分具有良好的检测效果，定量限最低达到0.02μg/mL。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为实施例1中酸种类(A)及浓度(B)对水解程度的影响柱状图；图2为实施例1中超声功率(A)、温度(B)和时间(C)对水解程度的影响柱状图；图3为对照品(A)和样品(B)的UPLC-CAD色谱图；其中，1,2为鼠李糖，3,5为岩藻糖，4,6为木糖，7为阿拉伯糖，8为甘露糖，9,11为葡萄糖，10,12为半乳糖。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。正如
技术介绍
所介绍的，针对现有技术中存在的不足，本专利技术提出了一种超声辅助酸解灵芝多糖及超高液相色谱-电雾式检测器测定灵芝多糖的方法。为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本专利技术的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本专利技术的技术方案。实施例11材料与方法1.1材料对照品D-(+)-葡萄糖(LOT：S08J6G1)、L-鼠李糖(LOT：SJ0715GA13)、D-半乳糖(LOT：AJ0603LA14)、D-甘露糖(LOT：A16O6L4546)、D-阿拉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述提取方法包括超声辅助提取获取提取液，通过加入醇溶液对提取液进行沉淀从而获取粗多糖，通过超声辅助酸解灵芝多糖获得灵芝多糖的单糖组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述提取方法包括超声辅助提取获取提取液，通过加入醇溶液对提取液进行沉淀从而获取粗多糖，通过超声辅助酸解灵芝多糖获得灵芝多糖的单糖组成。


2.如权利要求1所述灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述超声辅助提取的步骤如下：将灵芝子实体粉末置于去离子水中加热超声提取，离心获取上清部分即为提取液。


3.如权利要求2所述灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述粉末与去离子的加入比例为1.8～2.2g：28～32mL。


4.如权利要求2所述灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述加热温度为88～92℃；或所述超声提取时间为28～32min；或所述离心参数为4800～5200r/min，10min。


5.如权利要求1所述灵芝多糖提取方法，其特征在于，所述醇溶液为乙醇溶液，具体的，为93～97％乙醇(v/v)；使提取液中乙醇浓度为80％。


6.如权利要求1所述灵芝多糖提取方法，其特征在于，向提取液中加入醇液后将提取液置于3～5℃静置10～14h后离心，获取沉淀物，即为粗多糖；优选的，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵恒强，王晓，赵志国，张敏敏，刘倩，闫慧娇，李丽丽，
申请(专利权)人：山东省分析测试中心，
类型：发明
国别省市：山东;37