【技术实现步骤摘要】
一种检测羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒及其应用
本专利技术属于酶联免疫吸附检测领域，涉及一种羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
包虫病是由棘球绦虫的幼虫寄生于人或动物体内引起的人兽共患病，我国将其列为二类动物疫病，OIE将其列为B类动物疾病。棘球蚴可寄生在宿主体内的任何器官，压迫周围组织造成萎缩和功能障碍，蚴囊破裂还会引起继发性感染或休克，甚至死亡。目前已确认的棘球属绦虫有5种，其中由细粒棘球绦引起的囊型包虫病集中在我国西北畜牧大省，以绵羊、牛、猪感染尤为严重，对公共卫生安全和畜牧业生产造成威胁。目前诊断包虫病的“金标准”是剖检法，该法对可疑病灶或包囊有时无法鉴定。我国相关的农业行业标准包括间接血球凝集实验、酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应。间接血凝试验是以细胞为载体与抗原抗体特异性结合，准确性高，耗时少，易受环境影响，临床使用性差；聚合酶链式反应特异性好、灵敏度、重复性好，但对实验室硬件条件要求较高，基层兽医实验室难以推广。酶联免疫吸附法是近年来检测包虫病较为常用的免疫学方法之...
【技术保护点】
1.羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒，包括细粒棘球蚴鸡尾酒抗原预包被酶标板、阳性对照液、阴性对照液、酶标记物浓缩液、酶标记物稀释液、样本稀释液、底物A液、底物B液、终止液、洗涤液、血清稀释板；所述细粒棘球蚴鸡尾酒抗原是由EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原组成。/n
【技术特征摘要】
1.羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒，包括细粒棘球蚴鸡尾酒抗原预包被酶标板、阳性对照液、阴性对照液、酶标记物浓缩液、酶标记物稀释液、样本稀释液、底物A液、底物B液、终止液、洗涤液、血清稀释板；所述细粒棘球蚴鸡尾酒抗原是由EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原组成。
2.权利要求1所诉羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒，酶标板材质为96孔固相酶标板NUNC-468667。
3.权利要求1所述的羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒，细粒棘球蚴鸡尾酒抗原中表达的EPC1重组抗原、EgAgB1重组抗原、EgAgB2重组抗原和EgAgB4重组抗原的浓度比为2:1:2:1。
4.权利要求1所诉羊包虫病ELISA抗体检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
1）细粒棘球蚴鸡尾酒抗原的制备：以细粒棘球蚴cDNA文库为模版，针对EPC1、EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4基因序列设计特异性引物，通过PCR扩增目的片段并克隆至表达载体pET28a，将成功构建的重组表达质粒pET28a-EPC-1、pET28a-EgAgB1、pET28a-EgAgB2和pET28a-EgAgB4转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达，经亲和层析和分子筛层析高度纯化后得到EPC1重组蛋白、EgAgB1重组蛋白、EgAgB2重组蛋白和EgAgB4重组蛋白；
2）细粒棘球蚴鸡尾酒抗原预包被酶标板的制备：将鸡尾酒抗原用碳酸盐缓冲液稀释成浓度为5μg/mL的抗原包被液，每孔100μL，2-8℃包被16h后洗板；然后每孔加入200μL封闭液，37℃、湿度30-40%封闭2h，37℃、湿度30-40%恒温干燥2h；所述细粒棘球蚴鸡尾酒抗原中由EPC1重组抗原、EgA...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘河冰，温凯，杨柳，李蓉蓉，马立才，
申请(专利权)人：北京维德维康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。