低表达人PTEN蛋白的LN-229细胞系及其构建方法技术

本发明专利技术涉及一种PTEN低表达的LN‑229细胞系的构建方法。利用慢病毒体系构建PTEN稳定低表达的LN‑229细胞系。转染shPTEN及慢病毒包装质粒到HEK293T细胞中，收集病毒上清，感染LN‑229细胞，通过嘌呤霉素筛选转染后的LN‑229细胞，获得PTEN低表达的LN‑229稳定细胞系，最终经Western Blot技术检测细胞株PTEN的表达量下调80％以上，成功构建PTEN低表达的细胞系，可作为研究PTEN在胶质瘤中的分子作用机制及所参与代谢调控作用的理想细胞系。

LN-229 cell line with low expression of human PTEN protein and its construction method

【技术实现步骤摘要】
低表达人PTEN蛋白的LN-229细胞系及其构建方法
本专利技术是构建一种稳定低表达PTEN蛋白的LN-229细胞株及其构建方法，涉及生物医学领域。
技术介绍
PTEN催化PtdIns(3,4,5)P3去磷酸化。PTEN缺失出现在多种肿瘤中，约75％的胶质瘤中存在PTEN缺失。PTEN缺失的胶质瘤病人普遍存在更短的生存期。因此对于PTEN的研究，对胶质瘤中新的肿瘤标志物及细胞代谢紊乱的标志蛋白的研究具有重要意义，同时也可用于胶质瘤临床早期诊断、预后判断等辅助性治疗。研究PTEN分子机制需要构建PTEN稳定低表达细胞系作为细胞模型，但是目前在胶质瘤中缺少稳定高效低表达PTEN的细胞系模型。低表达细胞系的构建主要依赖于以物理或化学方式将目的shRNA转入细胞内，这类方法存在转染效率低、对细胞有损伤等缺点。本专利技术使用慢病毒感染系统，以携带PTENshRNA的慢病毒感染细胞，实现了PTEN的稳定高效敲除，可作为PTEN分子机制研究中的细胞模型。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种稳定低表达PTEN蛋白的LN-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.低表达人PTEN蛋白的LN-229细胞株，其特征在于：于胶质瘤LN-229细胞中感染含3种不同的敲除片段shRNA中一种或二种以上的质粒获得的细胞株；/n3种不同的敲除片段shRNA为：/nshPTEN片段1(sh1)的序列：/nCCGGAGGCGCTATGTGTATTATTATCTCGAGATAATAATACACATAGCGCCTTTTTTshPTEN片段2(sh2)的序列：/nCCGGACATTATGACACCGCCAAATTCTCGAGAATTTGGCGGTGTCATAATGTTTTTTG/nshPTEN片段3(sh3)的序列：/nCCGGCGTGCAGATAATGACAAGGAAC...

【技术特征摘要】
1.低表达人PTEN蛋白的LN-229细胞株，其特征在于：于胶质瘤LN-229细胞中感染含3种不同的敲除片段shRNA中一种或二种以上的质粒获得的细胞株；
3种不同的敲除片段shRNA为：
shPTEN片段1(sh1)的序列：
CCGGAGGCGCTATGTGTATTATTATCTCGAGATAATAATACACATAGCGCCTTTTTTshPTEN片段2(sh2)的序列：
CCGGACATTATGACACCGCCAAATTCTCGAGAATTTGGCGGTGTCATAATGTTTTTTG
shPTEN片段3(sh3)的序列：
CCGGCGTGCAGATAATGACAAGGAACTCGAGTTCCTTGTCATTATCTGCACGTTTTT。


2.一种权利要求1所述低表达人PTEN蛋白的LN-229稳定细胞株的构建方法，其特征在于：以胶质瘤LN-229细胞作为宿主细胞通过慢...

【专利技术属性】
技术研发人员：朴海龙，王志超，许国旺，路鑫，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21