一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法技术

本发明专利技术提供一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法，用预先温热的完全培养基稀释电穿孔转染后的细胞获得细胞悬液，然后进行细胞孵育、分选接种，再经细胞培养获得单细胞克隆。本发明专利技术在电转原代细胞转移、培养过程中，使用预热的完全培养基，将电转细胞置于培养箱中孵育，有利于载体通过电转微孔进入细胞，再配合在利用流式细胞仪分选单细胞时先在96孔培养板中添加预热的完全培养基，减少细胞微环境变化与分选喷射对细胞的损伤，提高了细胞的存活与增殖率。

A single cell clone culture method based on primary cell electrotransformation

【技术实现步骤摘要】
一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法
本专利技术涉及细胞培养，具体涉及一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法，属于细胞工程

技术介绍
原代细胞是指利用胰蛋白酶或其他技术手段从活体动物或组织中分离、培养获得的细胞，因其生物性状尚未发生大的变化，仍保持原有细胞特性，在一定程度上能模拟体内状态，被广泛应用于蛋白质组学、基因组学、遗传学以及生物医药等领域。来源于同一组织的同一类型细胞，在形态特征上虽然十分相似，但其遗传物质、生理、生化却千差万别，因此构建遗传特性一致的稳定细胞系，在基因功能研究、基因表达调控、突变分析、蛋白生产以及转基因动物培育等领域中的应用越来越广泛。构建稳定细胞系通常采用病毒侵染法和非病毒转染法。病毒侵染法是将携带外源目的片段的病毒，如慢病毒、腺病毒、逆转录病毒，转导入细胞，通过抗性筛选细胞克隆，获得稳定细胞系。非病毒转染法根据转染途径的差异，可分为物理转染、化学转染和生物转染。电穿孔转染又称电转就属于物理转染，它利用高强度电脉冲击穿细胞膜，提高细胞通透性，实现外源分子进入细胞，是目前应用范围最广、频率最高的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法，其特征在于：用预先温热的完全培养基稀释电穿孔转染后的细胞获得细胞悬液，然后进行细胞孵育、分选接种，再经细胞培养获得单细胞克隆。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于原代细胞电转的单细胞克隆培养方法，其特征在于：用预先温热的完全培养基稀释电穿孔转染后的细胞获得细胞悬液，然后进行细胞孵育、分选接种，再经细胞培养获得单细胞克隆。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述预先温热的培养基温度为35-39℃。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述细胞孵育为将细胞悬液放置在二氧化碳培养箱中孵育，孵育条件为35-39℃，5％二氧化碳。


4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述细胞孵育时间为0.5-4h。


5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述分选接种为利用流式细胞仪，将细胞分选接种至含预热完全培养基的96孔培养板中。


6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述96孔培养板所含预热培养基体积为50-200ul/孔；所述利用流式细胞仪分选接种细胞，细胞接种量为1个/孔。


7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细胞培养条件为35-39℃，5％二氧化碳培养箱，培养时间为12-15天。


8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在分选接种之后细胞培养之前，还存在细...

【专利技术属性】
技术研发人员：游小燕，葛良鹏，何琦琳，孙静，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：重庆;50