【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】产生腺相关病毒的哺乳动物细胞专利
本公开涉及一种哺乳动物细胞，其包含至少四个不同的重组靶位点(RTS)，含E1A、E1B或其组合的腺病毒(Ad)基因，和与该Ad基因操作性连接的启动子，其中所述RTS、Ad基因和启动子是染色体整合型的。本公开还涉及使用所述细胞产生重组腺相关病毒(rAAV)生产细胞的方法，以及在无活辅助病毒的情况下使用rAAV生产细胞生产、包装和纯化rAAV的方法。
技术介绍
在临床开发中正积极地使用重组腺相关病毒(rAAV)，以获得基因治疗产品的长期高效递送。用于生产rAAV的基于杆状病毒的平台通常需要原材料，这些原材料具有可变性，并且生成耗时很长。可扩展性(scalibility)差可能会限制HEK293中的三重转染和瞬时表达。现有的基于可扩展HeLa细胞的生产细胞系方法需要野生型(wt)腺病毒5(Ad5)作为辅助病毒，而出于安全方面的考虑，最终产品中辅助病毒的清除至关重要。当构建产生rAAV的细胞系时，感兴趣的基因和辅助性辅助基因可瞬时表达或整合到宿主染色体中。用于修饰细胞基因组的常规DNA转导途径可能会...
【技术保护点】
1.一种哺乳动物细胞，其包含(i)至少四个不同的重组靶位点(RTS)，(ii)含E1A、E1B或其组合的腺病毒(Ad)基因，和(iii)与Ad基因操作性连接的启动子，其中所述RTS、Ad基因和启动子是染色体整合型的。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170217 US 62/460,4571.一种哺乳动物细胞，其包含(i)至少四个不同的重组靶位点(RTS)，(ii)含E1A、E1B或其组合的腺病毒(Ad)基因，和(iii)与Ad基因操作性连接的启动子，其中所述RTS、Ad基因和启动子是染色体整合型的。
2.如权利要求1所述的细胞，其中，所述细胞是小鼠细胞，人细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，CHO-K1细胞，CHO-DXB11细胞，CHO-DG44细胞，包括所有变体的CHOK1SVTM细胞，包括所有变体的CHOK1SVGS-KOTM(谷氨酰胺合成酶敲除型)细胞，包括贴壁和悬浮适应型变体的HEK293细胞，HeLa细胞或HT1080细胞。
3.如权利要求1-2中任一项所述的细胞，其中，所述细胞包含四个RTS。
4.如权利要求1-2中任一项所述的细胞，其中，所述细胞包含六个RTS。
5.如权利要求1-4中任一项所述的细胞，其中，至少一个RTS选自下组：SEQIDNO.:1-30。
6.如权利要求1-5中任一项所述的细胞，其中，至少一个RTS、所述Ad基因和所述启动子整合在单一染色体基因座处。
7.如权利要求6所述的细胞，其中，所述染色体基因座是X染色体上MID1的第一内含子，NL2，NL1，Fer1L4，ROSA26，HGPRT，DHFR，COSMC，LDHa，MGAT1，GRIK1，或增强的表达和稳定性区。
8.如权利要求1-7中任一项所述的细胞，其还包含位点特异性重组酶基因。
9.如权利要求8所述的细胞，其中，所述位点特异性重组酶基因是染色体整合型的。
10.如权利要求1-9中任一项所述的细胞，其还包含第二Ad基因，其中所述第二Ad基因是染色体整合型的。
11.如权利要求10所述的细胞，其中，所述第二Ad基因包含E1A、E1B、E2A、E4、VA、MIR342或其组合。
12.如权利要求11所述的细胞，其中，所述第二Ad基因来自腺病毒5型。
13.如权利要求10-12中任一项所述的细胞，其中，所述第二Ad基因位于两个RTS之间。
14.如权利要求1-13中任一项所述的细胞，其还包含腺相关病毒(AAV)基因，其中，所述AAV基因是染色体整合型的。
15.如权利要求14所述的细胞，其中，所述AAV基因包含Rep、Cap或其组合。
16.如权利要求16所述的细胞，其中，所述AAV基因来自腺相关病毒2型。
17.如权利要求14-16中任一项所述的细胞，其中，所述AAV基因位于两个RTS之间。
18.如权利要求1-17中任一项所述的细胞，其还包含AAV载体盒，其中所述AAV载体盒是染色体整合型的。
19.如权利要求18所述的细胞，其中，所述AAV载体盒包含报告基因，选择基因，治疗上感兴趣的基因或其组合。
20.如权利要求18-19中任一项所述的细胞，其中，所述AAV载体盒位于两个RTS之间。
21.如权利要求1-20中任一项所述的细胞，其中，所述细胞基本上不含辅助病毒。
22.一种哺乳动物细胞，其包含(i)至少四个不同的重组靶位点(RTS)，(ii)腺病毒(Ad)基因E2A、E4、VA、MIR342或其组合，和(iii)与Ad基因操作性连接的启动子，其中所述RTS、Ad基因和启动子是染色体整合型的。
23.如权利要求22所述的细胞，其中，所述细胞是小鼠细胞，人细胞，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，CHO-K1细胞，CHO-DXB11细胞，CHO-DG44细胞，包括所有变体的CHOK1SVTM细胞，包括所有变体的CHOK1SVGS-KOTM(谷氨酰胺合成酶敲除型)细胞，包括贴壁和悬浮适应型变体的HEK293细胞，HeLa细胞或HT1080细胞。
24.如权利要求22-23中任一项所述的细胞，其中，所述细胞包含四个RTS。
25.如权利要求22-23中任一项所述的细胞，其中，所述细胞包含六个RTS。
26.如权利要求22-25中任一项所述的细胞，其中，至少一个RTS选自下组：SEQIDNO.:1-30。
27.如权利要求22-26中任一项所述的细胞，其中，所述RTS、所述Ad基因和所述启动子整合在单一染色体基因座处。
28.如权利要求27所述的细胞，其中，所述染色体基因座是X染色体上MID1的第一内含子，NL2，NL1，Fer1L4，ROSA26，HGPRT，DHFR，COSMC，LDHa，MGAT1，GRIK1，或增强的表达和稳定性区。
29.如权利要求22-27中任一项所述的细胞，其还包含位点特异性重组酶基因。
30.如权利要求29所述的细胞，其中，所述位点特异性重组酶基因是染色体整合型的。
31.如权利要求22-30中任一项所述的细胞，其还包含第二Ad基因，其中所述第二Ad基因是染色体整合型的。
32.如权利要求31所述的细胞，其中，所述第二Ad基因包含E1A、E1B、E2A、E4、VA、MIR342或其组合。
33.如权利要求32所述的细胞，其中，所述第二Ad基因来自腺病毒5型。
34.如权利要求31-33中任一项所述的细胞，其中，所述第二Ad基因位于两个RTS之间。
35.如权利要求22-34中任一项所述的细胞，其还包含腺相关病毒(AAV)基因，其中，所述AAV基因是染色体整合型的。
36.如权利要求35所述的细胞，其中，所述AAV基因包含Rep、Cap或其组合。
37.如权利要求36所述的细胞，其中，所述AAV基因来自腺相关病毒2型。
38.如权利要求35-37中任一项所述的细胞，其中，所述AAV基因位于两个RTS之间。
39.如权利要求22-38中任一项所述的细胞，其还包含AAV载体盒，其中所述AAV载体盒是染色体整合型的。
40.如权利要求39所述的细胞，其中，所述AAV载体盒包含报告基因，选择基因，治疗上感兴趣的基因或其组合。
41.如权利要求39-40中任一项所述的细胞，其中，所述AAV载体盒位于两个RTS之间。
42.如权利要求20-41中任一项所述的细胞，其中，所述细胞基本上不含辅助病毒。
43.一种哺乳动物细胞，其包含(i)至少四个不同...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·福瑞，R·J·杨，A·塞思，
申请(专利权)人：隆萨有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。