CD123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开一种CD123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒，其氨基酸序列包括依次组成的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4区，其中，所述FR1、FR2、FR3、FR4区为框架区氨基酸序列，所述CDR1、CDR2、CDR3为可变区氨基酸序列；其中，所述FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4区的氨基酸序列如表1所示。本发明专利技术技术方案通过结合基因工程的方法得到一种特异性结合CD123蛋白的单域抗体，该抗体特异性结合CD123蛋白的特异性结合能力高，且亲和力高。

CD123 single domain antibody, nucleotide sequence, expression vector and kit

【技术实现步骤摘要】
CD123单域抗体、核苷酸序列、表达载体及试剂盒
本专利技术涉及基因工程和抗体药物
，特别涉及一种CD123单域抗体、核苷酸酸序列、表达载体及试剂盒。
技术介绍
CD123是白细胞介素3受体(interleukin-3receptor,IL-3R)α链，能特异识别白细胞介素3(Interleukin-3,IL-3)，并与IL-3结合。IL-3主要由受到抗原刺激而被活化的辅助T细胞产生，其可促进细胞的生长和增值。它与肿瘤、过敏性炎症、自身免疫性疾病的发生有关。CD123在大多数AML患者原始白血病细胞中表达。而且AMLLSCS高表达CD123，正常造血干细胞不表达或者弱表达。除了在AML中表达，CD123在慢性粒细胞白血病，骨髓增生异常综合症及肥大细胞增多症，B-细胞急性淋巴细胞白血病中也有所表达。目前关于CD123单抗药物研究，早期临床研究中缓解率差异较大，说明靶向CD123的抗体药物尚需要通过优化抗体结合力等增强抗肿瘤活性。相关技术中，能实现CD123普通抗体的分子量较大，与抗原结合的结合力偏低，不易改造且稳定性差。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种氨基酸序列，旨在至少解决上述CD123抗体中存在的至少一个技术问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种CD123单域抗体，其氨基酸序列包括依次组成的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4区，其中，所述FR1、FR2、FR3、FR4区为框架区氨基酸序列，所述CDR1、CDR2、CDR3为可变区氨基酸序列；其中，所述FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4区的氨基酸序列如表1所示。表1：进一步地，所述氨基酸序列如表2所示。表2本专利技术还提供一种核苷酸序列，所述核苷酸序列为以下序列之一：(1)如SEQIDNO：1～3所示的核苷酸序列：SEQIDNO：1：GAGGTACAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTATGGATTCGCCTTCAGTAGCTACGACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCCCGAGTGGGTCTCACGGATTAATTTTAATGGTATCATGACAAGATATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCCGTTATTACTGTGTGAAAGGGTATCTAAATAGTGATAGTTCCTTGTCTAAAAATGACAACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA；SEQIDNO：2：CAGGTACAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGCGACTCTCCTGCGCAGCCTCTGGAAGTAGCGTCAGTCTCAATGCCATGGGCTGGTCGCGCGTGCAACCAGGAAGTACGCGCGACTTCGTCGCACGGATTGCTGCCGATGGTAGCA...CTCACTATGCAGACTCCGTGGAGGGCCGGTTCACCATCTCCGGGGACGCCGCCGGGAACACGGTGTATCTACTAATGGATTCGCTGAAACCCGAAGACACGGCCGTCTATTACTGTTT...TGCGTGGCTGGGTACGGACACGTACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA；SEQIDNO：3：GAGGTACAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTATGGATTCGCCTTCAGTAACTACGACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCCCGAGTGGGTCTCACGAATTAATTTTAATGGTATTATGACAAGATATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCCGTTATTACTGTGTGAAAGGGTATCTAAATAGTGATAGTTCCTTGTCTAAAAATGACAACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA；(2)SEQIDNO：1～3所示的核苷酸序列添加、取代、缺失或插入一个或若干个核苷酸序列；(3)与(1)和/或(2)中的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；(4)由于遗传密码子的简并性区别于(1)、(2)、(3)中的核苷酸序列的核苷酸序列。本专利技术还提供一种表达载体，包括如上所述的核苷酸。本专利技术还提供一种试剂盒，包括如上所述的CD123单域抗体，或者如上所述的核苷酸序列。本专利技术技术方案通过结合基因工程的方法得到一种特异性结合CD123蛋白的单域抗体，该抗体特异性结合CD123蛋白的活性高，表达量高，生产成本低，易于改造。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例中第一轮PCR单域抗体基因电泳图；图2为图1中第二轮PCR单域抗体基因电泳图；图3至图5为本专利技术实施例中CD123蛋白表达纯化图；图6至图8为本专利技术实施例中CD123单域抗体与CD123抗原结合活性图；图9至图10为本专利技术实施例中CD123单域抗体与HL-60细胞结合图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例及其附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。且下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法、检测方法等。本专利技术提出了一种CD123单域抗体、核苷酸酸序列、表达载体及试剂盒。下述内容将针对所述CD123单域抗体及其筛选过程作详细介绍。实施例1抗CD123抗原特异性的抗体库构建需要说明的是，本实施例中选用的CD123抗原采购自北京义翘神州。QIAGEN试剂盒为北京雅安达生物技术有限公司的QIAampRNABloodMiniKit(50)，货号52304。cDNA合成试剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CD123单域抗体，其特征在于，其氨基酸序列包括依次组成的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4区，其中，所述FR1、FR2、FR3、FR4区为框架区氨基酸序列，所述CDR1、CDR2、CDR3为可变区氨基酸序列；其中，所述FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4区的氨基酸序列如表1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种CD123单域抗体，其特征在于，其氨基酸序列包括依次组成的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4区，其中，所述FR1、FR2、FR3、FR4区为框架区氨基酸序列，所述CDR1、CDR2、CDR3为可变区氨基酸序列；其中，所述FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4区的氨基酸序列如表1所示。


2.一种核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列编码如权利要求1所述的CD123单域抗体。


3.如权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列为以下序列之一：
(1)如SEQIDNO：1～3所示所示的核苷酸序列：
SEQIDNO：1：GAGGTACAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTATGGATTCGCCTTCAGTAGCTACGACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGAAAGGGGCCCGAGTGGGTCTCACGGATTAATTTTAATGGTATCATGACAAGATATGCCGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAACCTGAGGACACGGCCCGTTATTACTGTGTGAAAGGGTATCTAAATAGTGATAGTTCCTTGTCTAAAAATGACAACTGGGGCCAGGGGACCCAGGTCACCGTCTCCTCA；
SEQIDNO：2：CAGGTACAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGGCTTGGTGCAGCCTGGGGGGTCTCTGCGACTCTCCTGCGCAGCCTCTGGAAGTAGCGTCAGTCTCAATGCCATGGGCTGGTCGCGCGTGCAACCAGGAAGTACGCGCGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：栗红建，李莹莹，张继帅，包朝乐萌，宋宗培，蔡清华，丁怡瑾，曾卉，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44