识别HLA-A*02/WT1靶点的TCR及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性识别HLA

【技术实现步骤摘要】
识别HLA-A*02/WT1靶点的TCR及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种识别HLA-A*02/WT1靶点的TCR及其应用。

技术介绍

[0002]WT1基因最初被认识于一种儿童肾肿瘤(Wilms
’
tumor)中而被命名为WT1(Cell,1990,60,509)。它位于人染色体11p13，是一个包含锌指结构域的转录因子，能结合到GC富集序列，是很多生长因子基因的转录活化因子或受体(J Med Invest,1999,46,130)。WT1基因与肿瘤的关系研究最初集中于急性白血病(Leukemia,1992,6,405)，随着研究的深入，人们发现除了在大部分血液瘤中高表达，在乳腺癌、肺癌、大肠癌、脑癌、头颈癌、甲状腺癌等一系列实体瘤中，也存在过表达的现象(Exp Cell Res,2001,264,74；Jpn J Clin Oncol,2010,40,377)。后来学者们还发现WT1基因在肿瘤中的功能方面展现出更多的是致癌功能，因此WT1产物成为一个有吸引力的肿瘤相关抗原(Int J Hematol,2001,73,177)。
[0003]鉴于WT1在肿瘤细胞中的广泛表达而在正常组织中的有限表达，WT1成为一个免疫治疗的潜在靶点。多个研究报道，WT1具有良好的免疫源性，能够诱导病人体内产生WT1-特异性Th细胞，释放出抗体。而在MDS或AML病人也有数据证明患者能产生针对WT1的细胞免疫应答(Expert Rev Vaccines,2005,4,503)。一些WT1相关的免疫源性表位随着以WT1为靶点的深入研究相继被报道，包括HLA I和HLA II两类的表位(Immunogenetics,2000,51,99；Blood,2000,95,2198)。随着WT1的免疫源性表位的发现，以WT1为靶点的免疫治疗也先后被开展。
[0004]近来，越来越多的实验证明过继T细胞疗法能在体内有效清除细胞细胞(Nat Immunol,2001,2,957)，尤其是在Rosenberg团队开展第一个针对黑色素瘤的临床试验证明了TCR-T的可行性后(Science,2006,314,126)，截至2019年，在clinicaltrials.gov网站上就已经有超过84个TCR-T免疫治疗临床数据登记记录，预示着TCR-T在肿瘤免疫治疗中有着巨大潜能(Technol Cancer Res Treat,2019,18,1533033819831068)。WT1 TCR-T的安全性和在一些肿瘤中的潜在临床疗效在Tawara(Blood.2017,130,1985)和Greenberg团队开展的I期临床试验中得到证实,在结合骨髓移植之后的临床疗效尤为显著(Sci Transl Med.2013,5,174ra27；Nat Med.2019,25,1064)。
[0005]总之，针对WT1的肿瘤相关靶点，尤其是针对HLA-A*02:01/RMFPNAPYL靶点，TCR-T免疫细胞治疗方法对AML等疾病具有明显疗效，并且没有观察到On Target/Off-Tumor的毒副作用。然而，这些临床研究、试验所使用的TCR，都没有证据显示经过蛋白工程的改造和亲和力优化。故现有技术方案存在表达不稳定、亲和力未经优化的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是为克服现有技术中缺乏有效TCR的缺陷，提供一种识别HLA-A*02/WT1靶点的TCR及其应用。本专利技术TCR具有极高的亲和力，且K
D
值甚至可达1.7μM。
[0007]本专利技术的技术方案之一为：一种TCR，所述的TCR的α链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别包含如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的序列，或者分别包含如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示序列的变体；
[0008]所述变体与突变前的序列相比具有4个、3个或者2个以下突变，并且所述变体至少保留突变前序列的功能。
[0009]较佳地，如SEQ ID NO.3所示序列的第1、2、4、6和7位中的一位或者多位被替换后获得SEQ ID NO.3所示序列的变体。
[0010]更佳地，如SEQ ID NO.3所示序列的第2位和第4位被替换；进一步更佳地，第1位或者第6位被替换；最更佳地，第7位也被替换。
[0011]其中，所述的第1位优选被替换为天冬酰胺、丙氨酸、色氨酸或者缬氨酸；所述的第2位优选被替换为脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或者苏氨酸；所述的第4位优选被替换为缬氨酸或者天冬氨酸；所述的第6位优选被替换为甲硫氨酸、精氨酸或者谷氨酰胺；所述的第7位优选被替换为异亮氨酸；
[0012]在本专利技术一具体实施方案中，如SEQ ID NO.3所示序列的变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.4～18中任一所示。
[0013]在本专利技术一具体实施方案中，如SEQ ID NO.2所示序列的变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.45所示。
[0014]本专利技术中所述TCR的β链可变区的CDR1、CDR2和CDR3优选分别包含如SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示的序列，或者分别包含如SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示序列的变体；所述变体与突变前的序列相比具有2个以下突变，并且所述变体至少保留突变前序列的功能。
[0015]较佳地，所述TCR的α链和/或β链还包含框架区；所述α链的框架区优选来源于种系TRAV39，所述β链的框架区优选来源于种系TRBV7-9。
[0016]更佳地，所述的述α链的FR1～4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.23～26或其变体所示，和/或，所述β链的FR1～4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.23～26或其变体所示；其中，所述α链的FR1变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.38所示，所述α链的FR3变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.39所示，所述α链的FR4变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.40所示；所述β链的FR1变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.41所示，所述β链的FR2变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.42所示，所述β链的FR3变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.43所示，所述β链的FR4变体的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.44所示。
[0017]在本专利技术一具体实施方案中，所述的TCR为scTCR，所述scTCR中TCRα可变区与TCRβ可变区之间通过接头连接；所述接头的氨基酸序列优选如序列表中SEQ ID NO.22所示。
[0018]如上所述的TCR的TCRα链和/或TCRβ链较佳地还包括恒定区，所述TCRα链的恒定区优选来源于种系TRAC；和/或所述TCRβ链的恒定区优选来源于种系TRBC2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TCR，其特征在于，所述的TCR的α链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别包含如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的序列，或者分别包含如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示序列的变体；所述变体与突变前的序列相比具有4个、3个或者2个以下突变，并且所述变体至少保留突变前序列的功能。2.如权利要求1所述的TCR，其特征在于，如SEQ ID NO.3所示序列的第1、2、4、6和7位中的一位或者多位被替换后获得SEQ ID NO.3所示序列的变体；较佳地，如SEQ ID NO.3所示序列的第2位和第4位被替换；更佳地，第1位或者第6位被替换；进一步更佳地，第7位也被替换。3.如权利要求2所述的TCR，其特征在于，所述的第1位被替换为天冬酰胺、丙氨酸、色氨酸或者缬氨酸；所述的第2位被替换为脯氨酸、丙氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸或者苏氨酸；所述的第4位被替换为缬氨酸或者天冬氨酸；所述的第6位被替换为甲硫氨酸、精氨酸或者谷氨酰胺；所述的第7位被替换为异亮氨酸；较佳地，如SEQ ID NO.3所示序列的变体的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO.4～18中任一所示；如SEQ ID NO.2所示序列的变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.45所示。4.如权利要求1～3任一项所述的TCR，其特征在于，所述TCR的β链可变区的CDR1、CDR2和CDR3分别包含如SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示的序列，或者分别包含如SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示序列的变体；所述变体与突变前的序列相比具有2个以下突变，并且所述变体至少保留突变前序列的功能。5.如权利要求1～4任一项所述的TCR，其特征在于，所述TCR的α链和/或β链还包含框架区；所述α链的框架区优选来源于种系TRAV39，所述β链的框架区优选来源于种系TRBV7-9；较佳地，所述α链的FR1～4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.23～26或其变体所示，和/或，所述β链的FR1～4的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.23～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴显辉，陈亮，陈安安，包朝乐萌，卢菲，栗红建，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：