使用腺病毒和化学二聚体的选择性细胞寻靶制造技术

本发明专利技术提供了用化学二聚体使腺病毒再靶向细胞的组合物和方法。具体地，本发明专利技术提供了含有核酸的重组腺病毒，所述核酸包含衣壳‑二聚化试剂结合物的缀合物和配体‑二聚化试剂结合物的缀合物。

【技术实现步骤摘要】
使用腺病毒和化学二聚体的选择性细胞寻靶本申请是申请日为2013年3月13日，申请号为201380021787.3，标题为“使用腺病毒和化学二聚体的选择性细胞寻靶”的专利申请的分案申请。关于作为ASCII文本文件提交的“序列表”，表格或计算机程序列表附件序列表记录在文件92159-868148_ST25.TXT中，该文件创建于2013年3月13日，780,854字节，机器格式IBM-PC，MS-Windows操作系统，并且以引用的方式纳入本文。相关申请的交叉引用本申请要求于2012年3月13日提交的美国临时申请No.61/610,416的优先权，所述临时申请为了所有目的全文纳入本文。
技术介绍
癌症是一种使人衰弱的疾病，其每年导致50万以上的死亡。非常需要更有效的、更具选择性的和更安全的癌症疗法。现有的用于这类普遍的、威胁生命的疾病的疗法——例如化学疗法和外科手术，很少能消除所有恶性细胞，并且经常表现出超过治疗益处的有害副作用。一种有可能解决目前癌症治疗的很多弱点的方法是溶瘤腺病毒疗法(Pesonen，S.etal.，MolecularPharmaceutics，.8(1)：p.12-28(2010))。这些病毒被设计为特异性地在癌细胞中复制，而不伤害正常细胞。一种设计改造肿瘤选择性的方式是使腺病毒感染靶向肿瘤细胞上上调的受体，所述受体是例如，EGFR家族成员(ZhangH，BerezovA，WangQ，ZhangG，DrebinJ，MuraliR，etal..ErbBreceptors：fromoncogenestotargetedcancertherapies.JClinInvest.2007；117(8)：2051-8.PMCID：1934579)、CEACAM(LiHJ，EvertsM，PereboevaL，KomarovaS，IdanA，CurielDT，.Adenovirustumortargetingandhepaticuntargetingbyacoxsackie/adenovirusreceptorectodomainanti-carcinoembryonicantigenbispecificadapter.CancerRes.2007；67(11)：5354-61)、EpCAM(HaismaHJ，PinedoHM，RijswijkA，derMeulen-MuilemanI，SosnowskiBA，YingW，etal..Fumor-specificgenetransterviaanadenoviralvectortargetedtothepan-carcinomaantigenEpCAM.GeneTher.1999；6(8)：1469-7)和HLA-A1/MAGE-A1(deVrijJ，UilTG，vandenHengelSK，CramerSJ，Koppers-LalicD，VerweijMC，etal..AdenovirustargetingtoHLA-A1/MAGE-A1-positivetumorcellsbyfusingasingle-chainT-cellreceptorwithminorcapsidproteinIX.GeneTher.2008；15(13)：978-89)。关于腺病毒靶向的各种策略的综述，参见(NoureddiniSC，CurielDT.Genetictargetingstrategiesforadenovirus.MolPharm.2005；2(5)：341-7；NicklinSA，WuE，NemerowGR，BakerAH.Theinfluenceofadenovirusfiberstructureandfunctiononvectordevelopmentforgenetherapy.MolTher.2005；12(3)：384-93)。腺病毒(Ad)是一个自我复制的生物机器。其由包裹在蛋白衣壳中的线性双链36kb的DNA基因组组成。Ad需要人宿主细胞来进行复制。其侵袭并劫持细胞复制机器以进行复制而且一旦组装就诱导溶解性细胞死亡以逃离所述细胞并扩散和侵袭周围细胞(图1)。从来没有系统能近似模拟Ad的自主性(autonomy)和效率，但是，申请人已经开发了新的策略来系统地操纵Ad基因组以形成新的腺病毒。今后，在能够操纵Ad基因组的情况下，申请人可以直面涉及该病毒的难题并重新设计该病毒以使其能发挥肿瘤特异性感染、复制和细胞杀伤的作用。目前，腺病毒载体依赖单个细胞受体进行它们的摄取，这严重限制了它们的治疗潜力。Ad5感染主要通过外部病毒衣壳上的尾丝(fiber)蛋白与人上皮细胞上的柯萨奇腺病毒受体(CAR)之间的相互作用介导。不幸的是，很多癌症细胞不表达CAR，例如间质肿瘤细胞和致命的转移性肿瘤细胞。由于感染细胞的能力限制了病毒的复制/杀伤，因此需要通过非CAR的受体来感染肿瘤细胞的病毒，理想地，所述受体为肿瘤细胞上特异性上调的那些受体。本专利技术通过提供病毒组合物以及通过化学接头(adaptor)将病毒衣壳以化学方法连接至多种细胞受体的方法解决了本领域的这些和其他需求。本文提供了一种新的、可诱导的、遗传编码的化学接头系统，所述系统使感染再靶向多种细胞类型，并且在病毒复制时不会丢失。可使用本文提供的组合物定制溶瘤病毒以在感染过程中靶向不同的细胞受体。
技术实现思路
在一方面，本专利技术提供了编码衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物和配体-二聚化试剂结合物的缀合物的重组核酸。在另一方面，提供了包含本文(包括其实施方案)提供的重组核酸的重组腺病毒。在另一方面，提供了包含衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物的重组腺病毒。在另一方面，提供了包含本文(包括其实施方案)提供的重组腺病毒的细胞。在另一方面，提供了一种形成靶向腺病毒癌细胞的构建体的方法。所述方法包括用本文提供的重组腺病毒感染细胞，从而形成腺病毒感染的细胞。使所述腺病毒感染的细胞表达所述重组核酸，从而形成配体-二聚化试剂结合物的缀合物和包含衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物的重组腺病毒。使所述重组腺病毒和所述配体-二聚化试剂结合物的缀合物与二聚化试剂接触。使所述重组腺病毒和配体-二聚化试剂结合物的缀合物与所述二聚化试剂结合，从而形成所述靶向腺病毒癌细胞的构建体。在另一方面，提供了靶向细胞的方法。所述方法包括使本文(包括其实施方案)提供的重组腺病毒与细胞接触。在另一方面，提供了靶向癌症患者中的癌细胞的方法。所述方法包括将本文提供的重组腺病毒给予癌症患者。使所述重组腺病毒感染癌症患者中的细胞，从而形成腺病毒感染的细胞。使所述腺病毒感染的细胞表达所述重组核酸，从而形成配体-二聚化试剂结合物的缀合物和包含衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物的重组腺病毒。将二聚化试剂给予所述癌症患者。使所述重组腺病毒和所述配体-二聚化试剂结合物的缀合物与所述二聚化试剂结合，从而形成靶向腺病毒癌细胞的构建体。使所述靶向腺病毒癌细胞的构建体与癌细胞结合，从而靶向所述癌症患者中的癌细胞。在另一方面，提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组核酸，其编码衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物和配体-二聚化试剂结合物的缀合物，其中所述衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物包含腺病毒尾丝蛋白和插入至所述腺病毒尾丝蛋白H1环中的FRB蛋白，所述FRB蛋白的长度为90个氨基酸，并且所述配体-二聚化试剂结合物的缀合物包含配体和FKBP蛋白。/n

【技术特征摘要】
20120313 US 61/610,4161.一种重组核酸，其编码衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物和配体-二聚化试剂结合物的缀合物，其中所述衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物包含腺病毒尾丝蛋白和插入至所述腺病毒尾丝蛋白H1环中的FRB蛋白，所述FRB蛋白的长度为90个氨基酸，并且所述配体-二聚化试剂结合物的缀合物包含配体和FKBP蛋白。


2.权利要求1的重组核酸，其中所述FRB蛋白由与SEQIDNO：69至少95％相同的核苷酸序列编码。


3.权利要求2的重组核酸，其中所述FRB蛋白由SEQIDNO：69的核苷酸序列编码，或其中所述FRB蛋白是包含mTOR突变T2098L的突变FRB蛋白。


4.权利要求3的重组核酸，其中所述突变FRB蛋白能够结合雷帕霉素类似物。


5.权利要求4的重组核酸，其包含SEQIDNO：110的核苷酸序列。


6.权利要求1的重组核酸，其中所述配体与所述FKBP蛋白可操作地连接。


7.权利要求1的重组核酸，其中所述配体是抗体。


8.权利要求7的重组核酸，其中所述抗体结合癌胚抗原或表皮生长因子受体。


9.权利要求8的重组核酸，其包含SEQIDNO：71或SEQIDNO：72的核苷酸序列。


10.权利要求1的重组核酸，其中所述FKBP蛋白是人FKBP12。


11.一种重组腺病毒，其包含权利要求1-10中之一的重组核酸。


12.一种重组腺病毒，其包含衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物，其中所述衣壳-二聚化试剂结合物的缀合物包含腺病毒尾丝蛋白和插入至所述腺病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·奥谢，S·米亚克斯托纳，C·帕沃斯，
申请(专利权)人：萨克生物研究学院，
类型：发明
国别省市：美国;US