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【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.编码多重单向导RNA(sgRNA)的核酸,其从5’至3’包含:
2.权利要求1所述的核酸,其还包含位于第二核酸分子3’处的第三核酸分子,其中第三核酸正向编码第一切割位点和第三修饰的sgRNA,
3.权利要求1所述的核酸,其还包含位于第一核酸分子5’处的第三核酸分子,其中第三核酸反向编码第一切割位点和第三修饰的sgRNA,
4.权利要求2所述的核酸,其还包含位于第一核酸分子5’处的第四核酸分子,其中第四核酸分子反向编码第二切割位点和第四修饰的sgRNA,
5.权利要求1至4中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgRNA中的一个或更多个包含SEQ ID NO:17、18或19。
6.权利要求2至4中任一项所述的核酸,其中所述第一切割位点、所述第二切割位点或这两者编码自切割RNA。
7.权利要求6所述的核酸,其中所述自切割RNA是前体转运RNA(前体tRNA)或自切割核酶。
8.权利要求7所述的核酸,其中所述第一切割位点编码前体tRNA,所述第二切割位点编码来自不同生物体的前体t
9.权利要求1至8中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgRNA中的一个或更多个包含与EEF1α2、Fst、Pdx1、klotho、utrophin、interleukin 10、Six2、OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、MyoD、Mef2b或Pax7的启动子区域内的序列互补的靶向序列。
10.权利要求1至9中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgRNA中的一个或更多个包含与SEQ ID NO:10-15或42-48中的任何一个具有至少90%序列同一性的序列,包含SEQ ID NO:10-15或42-48中的任何一个,或者由SEQ ID NO:10-15或42-48中的任何一个组成。
11.权利要求1至10中任一项所述的核酸,其中所述第一修饰的sgRNA序列:
12.权利要求1至11中任一项所述的核酸,其中所述第二修饰的sgRNA序列
13.权利要求2至12中任一项所述的核酸,其中所述第三修饰的sgRNA序列
14.权利要求3至13中任一项所述的核酸,其中所述第四修饰的sgRNA序列
15.权利要求1至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
16.权利要求2至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
17.权利要求3至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
18.权利要求4至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
19.权利要求1至18中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgRNA中的一个或更多个是dgRNA。
20.编码多重crisper RNA(crRNA)的核酸,其从5’至3’包含:
21.权利要求20所述的核酸,其还包含第二启动子,第二启动子可操作地连接到编码第三crRNA或单向导RNA(sgRNA)的第三核酸分子。
22.权利要求21所述的核酸,其中
23.权利要求20至22中任一项所述的核酸,其中所述第一或第二切割位点编码前体转运RNA(前体tRNA)或自切割核酶。
24.权利要求23所述的核酸,其中所述第一切割位点编码前体tRNA,所述第二切割位点编码自切割核酶。
25.权利要求20至24中任一项所述的核酸,其中所述修饰的tracrRNA
26.权利要求20至25中任一项所述的核酸,其中所述第一crRNA、第二crRNA、第三crRNA或sgRNA包含与EEF1α2、Fst、Pdx1、klotho、utrophin、interleukin 10、Six2、OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC、MyoD、Mef2b或Pax7的启动子区域内的序列互补的靶向序列。
27.权利要求20至26中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二或第三crRNA:
28.权利要求20至27中任一项所述的核酸,其中所述sgRNA
29.权利要求20至28中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
30.权利要求20至29中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
31.权利要求20至30中任一项所述的核酸,其中所述sgRNA是死亡向导RNA(dgRNA)。
32.RNA分子,其由权利要求1-31中任一项所述的核酸分子编码。
33.病毒载体,其包含权利要求1-31中任一项所述的核酸。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.编码多重单向导rna(sgrna)的核酸,其从5’至3’包含:
2.权利要求1所述的核酸,其还包含位于第二核酸分子3’处的第三核酸分子,其中第三核酸正向编码第一切割位点和第三修饰的sgrna,
3.权利要求1所述的核酸,其还包含位于第一核酸分子5’处的第三核酸分子,其中第三核酸反向编码第一切割位点和第三修饰的sgrna,
4.权利要求2所述的核酸,其还包含位于第一核酸分子5’处的第四核酸分子,其中第四核酸分子反向编码第二切割位点和第四修饰的sgrna,
5.权利要求1至4中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgrna中的一个或更多个包含seq id no:17、18或19。
6.权利要求2至4中任一项所述的核酸,其中所述第一切割位点、所述第二切割位点或这两者编码自切割rna。
7.权利要求6所述的核酸,其中所述自切割rna是前体转运rna(前体trna)或自切割核酶。
8.权利要求7所述的核酸,其中所述第一切割位点编码前体trna,所述第二切割位点编码来自不同生物体的前体trna。
9.权利要求1至8中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgrna中的一个或更多个包含与eef1α2、fst、pdx1、klotho、utrophin、interleukin 10、six2、oct4、sox2、klf4、c-myc、myod、mef2b或pax7的启动子区域内的序列互补的靶向序列。
10.权利要求1至9中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgrna中的一个或更多个包含与seq id no:10-15或42-48中的任何一个具有至少90%序列同一性的序列,包含seq id no:10-15或42-48中的任何一个,或者由seq id no:10-15或42-48中的任何一个组成。
11.权利要求1至10中任一项所述的核酸,其中所述第一修饰的sgrna序列:
12.权利要求1至11中任一项所述的核酸,其中所述第二修饰的sgrna序列
13.权利要求2至12中任一项所述的核酸,其中所述第三修饰的sgrna序列
14.权利要求3至13中任一项所述的核酸,其中所述第四修饰的sgrna序列
15.权利要求1至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
16.权利要求2至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
17.权利要求3至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
18.权利要求4至14中任一项所述的核酸,其中所述核酸分子
19.权利要求1至18中任一项所述的核酸,其中所述第一、第二、第三或第四修饰的sgrna中的一个...
【专利技术属性】
技术研发人员:J·C·伊兹皮苏亚贝尔蒙特,王超,廖信凱,P·雷迪,
申请(专利权)人:萨克生物研究学院,
类型:发明
国别省市:
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