一种串联多肽及其在抗结核分枝杆菌的免疫保护中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种串联多肽及其在抗结核分枝杆菌的免疫保护中的应用。串联多肽含有氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的多肽甲、氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示的多肽乙和氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示的多肽丙。实验证明，BCG初免后用串联多肽加强免疫能够诱导人源化C57BL/6小鼠肝脏和肺脏中结核分枝杆菌的菌落数显著降低，其免疫保护效率优于BCG单独免疫组；在野生型C57BL/6小鼠的肝脏和肺脏中结核分枝杆菌的菌落数无显著差异。由此可见，该串联多肽可以抑制结核分枝杆菌在人源化动物体内的增殖；据此可以制备结核分枝杆菌疫苗。本发明专利技术具有重要的应用价值。

A tandem peptide and its application in immunoprotection against Mycobacterium tuberculosis

【技术实现步骤摘要】
一种串联多肽及其在抗结核分枝杆菌的免疫保护中的应用
本专利技术属于免疫学领域，具体涉及一种串联多肽及其在抗结核分枝杆菌的免疫保护中的应用。
技术介绍
疫苗接种是消除结核(Tuberculosis，TB)感染最好的手段，但目前仍缺乏有效的疫苗。最早的预防结核病的疫苗是BCG疫苗，但是大量研究表明，BCG虽然对儿童重症结核病(如粟粒型结核和结核性脑膜炎)具有预防作用，但其保护效应随着年龄增加而递减，且BCG对结核菌感染过的人群则基本无效。相对于BCG疫苗，亚单位疫苗由于只使用某些具有诱导机体产生保护性免疫应答的蛋白抗原而非全菌抗原，其免疫后副作用明显减轻，而且其制备也相对于传统疫苗更加的安全、高效。但是随着研究的深入，人们发现亚单位疫苗也存在不足之处，比如需多次接种、需要佐剂帮助、免疫保护效果有限等。外源性物质进入机体后，通常会被机体的免疫系统识别并产生免疫应答以清除外来物或病原体。传统的亚单位疫苗正是将病原体全菌蛋白或某个/多个蛋白抗原接种，进而诱导机体产生特异性免疫应答来对抗病原体感染。但是，免疫细胞的表面受体通常仅能识别抗原肽分子上的某些特定氨基酸即表位(Epitope)或抗原决定簇(Antigenicdeterminant)。结核分枝杆菌是一种胞内寄生菌，抗胞内菌的保护性免疫主要依赖T细胞介导的特异性细胞免疫应答。T细胞表位疫苗不仅能够被体内更多的MHC分子识别并高效递呈，而且能弥补病原体某个优势表位变异而引起的免疫失效等问题。正是因为这些独特的优势，T细胞表位疫苗逐渐被越来越多的学者关注，成为疫苗研究领域里的热点之一。因此，设计并研究新型、高效的结核分枝杆菌T细胞表位疫苗对预防和治疗结核病具有至关重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种结核分枝杆菌疫苗。本专利技术首先保护一种串联多肽，可为a1)或a2)：a1)含有多肽甲、多肽乙和多肽丙的串联多肽；多肽甲的氨基酸序列可如SEQIDNO：2所示；多肽乙的氨基酸序列可如SEQIDNO：3所示；多肽丙的氨基酸序列可如SEQIDNO：4所示；a2)将a1)的N端和/或C端连接标签得到的带标签的串联多肽。所述a2)中，标签可为His标签(氨基酸序列为HHHHHH)、Poly-Arg标签(氨基酸序列为RRRRR)、FLAG标签(氨基酸序列为DYKDDDDK)、c-myc标签(氨基酸序列为EQKLISEEDL)或Strep-tagII标签(氨基酸序列为WSHPQFEK)。上述任一所述串联多肽可为b1)-b6)中任一种：b1)氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的串联多肽ACP；b2)氨基酸序列如SEQIDNO：5所示的串联多肽APC；b3)氨基酸序列如SEQIDNO：6所示的串联多肽CAP；b4)氨基酸序列如SEQIDNO：7所示的串联多肽CPA；b5)氨基酸序列如SEQIDNO：8所示的串联多肽PAC；b6)氨基酸序列如SEQIDNO：9所示的串联多肽PCA。本专利技术还保护编码上述任一所述串联多肽的核酸分子。本专利技术还保护上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子的应用，可为c1)或c2)或c3)：c1)制备结核分枝杆菌疫苗；c2)抑制结核分枝杆菌增殖；c3)制备用于预防和/或治疗结核病的产品。本专利技术还保护上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子联合卡介苗的应用，可为c1)或c2)或c3)：c1)制备结核分枝杆菌疫苗；c2)抑制结核分枝杆菌增殖；c3)制备用于预防和/或治疗结核病的产品。本专利技术还保护所述多肽甲、所述多肽乙或所述多肽丙。本专利技术还保护所述多肽甲、所述多肽乙和所述多肽丙中的任两个或任一个的应用，可为c1)或c2)或c3)：c1)制备结核分枝杆菌疫苗；c2)抑制结核分枝杆菌增殖；c3)制备用于预防和/或治疗结核病的产品。本专利技术还保护一种抗结核分枝杆菌制剂，其可含有上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子。所述抗结核分枝杆菌制剂具体可由上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子组成。所述抗结核分枝杆菌制剂还可含有卡介苗。所述抗结核分枝杆菌制剂具体可由“上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子”和卡介苗组成。本专利技术还保护一种用于预防和/或治疗结核病的产品，其可含有上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子。所述用于预防和/或治疗结核病的产品具体可由上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子组成。所述用于预防和/或治疗结核病的产品还可含有卡介苗。所述用于预防和/或治疗结核病的产品具体可由“上述任一所述串联多肽或编码上述任一所述串联多肽的核酸分子”和卡介苗组成。所述产品具体可为结核分枝杆菌疫苗。上述任一所述结核病具体可为肺结核。上述任一所述结核病具体可为肝结核。上述任一所述结核分枝杆菌疫苗具体可为人结核分枝杆菌疫苗。上述任一所述抑制结核分枝杆菌增殖具体可为抑制结核分枝杆菌在人源化动物体内或人体内的增殖。所述人源化动物具体可为人源化小鼠。所述人源化小鼠具体可为HLA-A11/DR1转基因C57BL/6小鼠(曾扬.人MHC转基因小鼠模型建立及其应用基础研究.中国人民解放军军事医学科学院.2016)。上述任一所述结核分枝杆菌具体可为结核分枝杆菌标准株H37Rv。结核分枝杆菌标准株H37Rv记载于如下文献中：YanL，XiaoyanZ，LiX，etal.ImmunogenicityandTherapeuticEffectsofpVAX1-rv1419DNAfromMycobacteriumtuberculosis[J].CurrentGeneTherapy，2016，16(4)：249-255.在本专利技术的一个实施例中，将6-7周龄、体重为16-18g的人源化小鼠(即HLA-A11/DR1转基因C57BL/6小鼠)随机分为ACP组、PBS组、BCG组和BCG+ACP组，ACP组用串联多肽ACP免疫，PBS组用PBS缓冲液免疫，BCG组用卡介苗免疫，BCG+ACP组用BCG初免后再用串联多肽ACP加强免疫；之后，用结核分枝杆菌进行攻毒，统计小鼠肝脏和肺脏中结核分枝杆菌的数量。结果表明，人源化小鼠肝脏中，串联多肽ACP的免疫保护性占BCG免疫保护性的比例为32.5％，卡介苗和串联多肽ACP联合的免疫保护性占BCG免疫保护性的比例为94.5％；人源化小鼠肺脏中，串联多肽ACP的免疫保护性占BCG免疫保护性的比例为66.2％，卡介苗和串联多肽ACP联合的免疫保护性占BCG免疫保护性的比例为103.4％。肺脏是结核分枝杆菌最主要的靶器官，因此可以认为串联多肽ACP的免疫保护性可达到BCG免疫保护性的66.2％以上，卡介苗和串联多肽ACP联合的免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种串联多肽，为a1)或a2)：/na1)含有多肽甲、多肽乙和多肽丙的串联多肽；/n多肽甲的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；/n多肽乙的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；/n多肽丙的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；/na2)将a1)的N端和/或C端连接标签得到的带标签的串联多肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种串联多肽，为a1)或a2)：
a1)含有多肽甲、多肽乙和多肽丙的串联多肽；
多肽甲的氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；
多肽乙的氨基酸序列如SEQIDNO：3所示；
多肽丙的氨基酸序列如SEQIDNO：4所示；
a2)将a1)的N端和/或C端连接标签得到的带标签的串联多肽。


2.如权利要求1所述串联多肽，其特征在于：所述串联多肽为b1)-b6)中任一种：
b1)氨基酸序列如SEQIDNO：1所示的串联多肽ACP；
b2)氨基酸序列如SEQIDNO：5所示的串联多肽APC；
b3)氨基酸序列如SEQIDNO：6所示的串联多肽CAP；
b4)氨基酸序列如SEQIDNO：7所示的串联多肽CPA；
b5)氨基酸序列如SEQIDNO：8所示的串联多肽PAC；
b6)氨基酸序列如SEQIDNO：9所示的串联多肽PCA。


3.编码权利要求1或2所述串联多肽的核酸分子。


4.“权利要求1或2所述串联多肽”或权利要求3所述核酸分子的应用，为c1)或c2)或c3)：
c1)制备结核分枝杆菌疫苗；

【专利技术属性】
技术研发人员：龚文平，吴雪琼，梁艳，王兰，王杰，薛勇，米洁，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第八医学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11