MLEC基因抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，特别涉及MLEC基因抑制剂及其应用。本发明专利技术发现的与胃癌细胞增殖相关的功能基因，为MLEC基因，位于人类12号染色体的120686869bp至120701864bp之间，该基因可作为胃癌治疗的靶点，本发明专利技术还提供了MLEC基因抑制剂在制备治疗胃癌药物中的用途；本发明专利技术的MLEC基因抑制剂可抑制癌细胞的增殖速率，可制备用于治疗胃癌的药物。

MLEC gene inhibitors and their application

The invention relates to the field of biomedicine, in particular to MLEC gene inhibitor and its application. The functional gene related to the proliferation of gastric cancer cells discovered by the invention is MLEC gene, which is located between 120686869bp and 120701864bp of human chromosome 12. The gene can be used as the target of gastric cancer treatment. The invention also provides the use of MLEC gene inhibitors in the preparation of drugs for treating gastric cancer. The MLEC gene inhibitors of the invention can inhibit the proliferation rate of cancer cells, and can be used in the preparation of drugs for treating gastric cancer Drugs for the treatment of gastric cancer.

【技术实现步骤摘要】
MLEC基因抑制剂及其应用
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及MLEC基因抑制剂及其应用。
技术介绍
人胃癌变是一个涉及多种基因及其产物相互作用的复杂过程。寻求人胃癌发生发展过程的关键基因，将有助于探讨其癌变的内在分子生物学机制，并将对胃癌的预防、诊断和治疗产生重要的意义。人胃癌变关键基因的寻求不仅依赖于对现有已知基因功能研究的不断深化，还依赖于对其相关未知新基因的探索。人类基因组草图表明，人体大约有3-4万个基因。就现有胃癌相关基因的数量来说，对于科研和应用还是不够的，探索更多人胃癌变相关基因以及功能基因仍是我们目前亟需解决的问题，将为我们最终诊断和治疗胃癌提供基础。
技术实现思路
为解决上述
技术介绍
中的不足，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一个目的，提供一种MLEC基因抑制剂，所述抑制剂是以MLEC基因作为靶标制备或筛选得到的对MLEC基因具有抑制效果的分子或制剂。进一步的，所述抑制剂是核酸分子、核酸构建体、慢病毒、抗体或小分子化合物。更进一步的，上述核酸分子为shRNA，所述核酸分子作用的MLEC基因靶序列如SEQIDNO：6、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7任一序列所示，所述shRNA的核苷酸序列如SEQIDNO：8、SEQIDNO：9、SEQIDNO：10、SEQIDNO：11、SEQIDNO：12、SEQIDNO：13任一序列所示。进一步的，上述核酸构建体为含有编码所述核酸分子中shRNA的基因片段，能表达所述的shRNA。r>进一步的，上述核酸构建体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装而成。本专利技术的第二个目的是提供上述MLEC基因抑制剂在制备治疗胃癌药物中的应用。本专利技术使用生物信息学的方法筛出来胃癌新的差异基因，细胞株验证胃癌细胞株中高表达，将基因沉默后证实对胃癌细胞的增殖有较显著影响，是胃癌新的功能基因，并有望成为胃癌治疗新的靶标，该基因为MLEC基因，位于人类12号染色体的120686869bp至120701864bp之间，该基因可作为胃癌治疗的靶点，本专利技术的MLEC基因抑制剂可抑制癌细胞的增殖速率，可制备用于治疗胃癌的药物。附图说明图1为MLEC基因在癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达。图2为载体图谱及信息。图3为慢病毒感染72小时后细胞图片，图中感染图片命名规则：CON空细胞，NC阴性对照，“KD1”、“KD2”和“KD3”为实验分组名，“第1组”为三组重复感染中的第一组，“第2组”为三组重复感染中的第二组，“视野1”和“视野2”为Celigo扫描视野序号，W为明视野，G为绿色荧光视野。图4为CCK-8检测MLEC基因慢病毒对胃癌细胞增殖的影响。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明，但不应理解为本专利技术的限制。如未特殊说明，下述实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。本专利技术从TCGA胃腺癌数据(TCGA-STAD)RNA-seq的表达数据中选取癌症组数据与癌旁组数据作为研究对象，数据来源及分组见表1，利用Ballgown对两组数据进行比较，得到显著性p值，q值和基因间的差异倍数(Fold-change)，进行差异基因筛选，筛选条件为P<0.05，q<0.05，且Foldchange>2，最终成功筛选出与胃癌细胞增殖相关的功能基因MLEC，且该基因迄今为止尚未在胃癌领域得到进一步的研究和开发。本专利技术的与胃癌细胞增殖相关的功能基因为MLEC基因，位于人类12号染色体的120686869bp至120701864bp之间。实施例1MLEC基因在癌细胞系和正常胃黏膜上皮细胞中的表达针对MLEC基因进行引物设计，以GAPDH为内参，通过q-PCR检测MLEC在正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃腺癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、及人胃癌细胞MGC-803中的表达。表1基因信息内参基因和目的基因引物由吉凯基因设计和合成，引物设计如下：表3内参基因引物信息表4目的基因引物序列实验步骤1.总RNA抽提(使用上海普飞公司Trizol试剂盒抽提，说明书链接：http：//www.pufei.com/product/info/31055)(1)收取样品，Trizol裂解。细胞样品：收集细胞(6孔板80％细胞密度)，2000rpm离心5min，去上清，细胞沉淀中加入1mLTrizol，充分混匀后室温静置5min，然后转移至新的1.5mLEP管中；组织样品：将待研磨的组织样品从液氮或者-80℃冰箱中取出，无菌刀片于干冰上将组织样品切割成约3mmx3mmx3mm大小，置于装有1mLTrizol裂解液的1.5mLEP管中。将超细匀浆机工作头浸入Trizol裂解液中5-10s灭活RNA酶后，组织研磨；研磨后4℃，5000rpm3min离心，弃沉淀，吸取上清移至新的1.5mLEP管中。(2)每管加入200μL氯仿，用手上下颠倒EP管15s，室温静置10min。(3)4℃、12800rpm，离心15min。(4)吸取上层液体移至新的1.5mLEP管，加入等体积预冷的异丙醇，混匀后4℃静置10min。(5)4℃、12800rpm离心12min后，弃上清。(6)加入1mL、75％乙醇(用DEPC水新鲜配制)，洗涤沉淀。(7)4℃、11800rpm离心5min，弃去大部分上清。(8)4℃、11800rpm再次离心5min，弃去上清，室温干燥。(9)待RNA沉淀基本透明时，加入RNase-free水(加入体积视RNA沉淀量而定)至完全溶解，Nanodrop2000/2000C分光光度计分析测定所抽提RNA的浓度及质量。2.反转录获得cDNA(使用PromegaM-MLV试剂盒，protocol链接http：//cn.promega.com/resources/protocols/product-information-sheets/g/mmlv-reverse-transcriptase-protocol/)(1)每1nmol引物加入RNase-freewater200μL，涡旋振荡充分溶解，然后瞬时离心，配成终浓度为5μM弓物储存液。(2)RT引物取5μM的RT引物储存液1μL，加入79μL的RNase-freewater，配制成62.5nM的RT引物工作液(如果需要配制多种RT引物混合工作液，取各种5μM的RT引物工作液各1μL，最后加RNase-freewater至80μL即可)。(3)PCR引物：按照5μM的浓度使用。反转录：(1)将2μL反转录引物(0.5μg/μL)和2.0ugTotalRNA加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.MLEC基因抑制剂，其特征在于，所述抑制剂是以MLEC基因作为靶标制备或筛选得到的对MLEC基因具有抑制效果的分子或制剂。/n

【技术特征摘要】
1.MLEC基因抑制剂，其特征在于，所述抑制剂是以MLEC基因作为靶标制备或筛选得到的对MLEC基因具有抑制效果的分子或制剂。


2.如权利要求1所述的MLEC基因抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为核酸分子、核酸构建体、慢病毒、抗体或小分子化合物。


3.如权利要求2所述MLEC基因抑制剂，其特征在于，所述核酸分子为shRNA，所述核酸分子作用的MLEC基因靶序列如SEQIDNO：6、SEQIDNO：6、SEQIDNO：7任一序列，所述shRNA的核苷酸序列如SEQIDNO：8、SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳淑芬，
申请(专利权)人：内蒙古科技大学包头医学院，
类型：发明
国别省市：内蒙;15