一种眼部干细胞培养液制造技术

本发明专利技术提供的一种眼部干细胞培养液属于生物技术领域，一种眼部干细胞培养液由低糖型MEM培养基、胎牛血清、非必须氨基酸、血管内皮生长因子、生长激素释放抑制因子和血小板来源增殖因子混合制备而成，该眼部干细胞培养液可以使得眼部干细胞具有较强的增值能力和成纤维分化潜能，有利于眼部细胞的再生。

An eye stem cell culture medium

The eye stem cell culture liquid provided by the invention belongs to the field of biotechnology. The eye stem cell culture liquid is prepared by mixing the low sugar MEM culture medium, fetal bovine serum, non essential amino acids, vascular endothelial growth factor, growth hormone releasing inhibitory factor and platelet-derived proliferating factor. The eye stem cell culture liquid can make the eye stem cells have strong growth Value ability and fibroblast differentiation potential are conducive to the regeneration of eye cells.

【技术实现步骤摘要】
一种眼部干细胞培养液
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种眼部干细胞培养液。
技术介绍
角膜外伤是眼科临床常见疾病，严重时甚至可以致盲。正常的角膜上皮化过程是通过角膜缘上皮基底层干细胞的再生分化完成的。角膜损伤导致角膜上皮缺损，继发的炎症反应会影响干细胞增生和迁移，形成血管翳，加重角膜水肿与瘢痕化，角膜浑浊影响透光，甚至造成角膜溃疡。角膜移植目前仍是临床角膜盲唯一可靠有效的治疗手段。角膜供体一般来源于角膜捐献者，一方面捐献者数量有限，另一方面同种异体角膜移植仍然存在术后免疫反应，甚至出现供体排斥而致手术失败。干细胞再生医学研究的兴起为角膜损伤的修复提供了新的治疗途径，其基本方法是将体外培养扩增的自体正常组织细胞，例如角膜缘干细胞、结膜上皮细胞、口腔黏膜细胞等，吸附于一种生物相容性良好并可被机体降解吸收的生物支架，植入机体角膜部位，在支架材料逐步降解过程中，细胞继续增殖并分泌基质，最终形成相应组织，达到促进角膜上皮再生，修复角膜缺损并重现视力功能的目的。脂肪源性干细胞(adipose-derivedstemcells，ASCs)是存在于脂肪组织中的一群具有多向分化潜能的成体干细胞，在体外能够自我更新、不断增殖，而且可诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞、血管内皮细胞、心肌细胞及神经细胞等多种类型的细胞。因具有来源丰富、易于培养、多向分化等特点，ASCs在组织创伤修复领域具有良好的应用前景和科研价值。而ASCs在体外培养过程中，会分泌多种生物活性因子，通过旁分泌机制，促进组织创伤的修复。因此，ASCs的条件培养液也具有广阔的临床应用前景。眼部整形手术是我国整形外科领域开展最广泛的手术，术中通常会去除部分多余的眼眶脂肪。这种手术切除的眼眶脂肪通常被视为“废物”而丢弃。医学研究认为，在胚胎发育过程中，皮下脂肪与内脏脂肪发生于中胚层。而眼眶脂肪则不同，是与眼周组织(包括角膜、结膜、眼球、眼外肌肉与骨骼)一起从外胚层发育而来的。因此，本专利技术研究人员通过研究发现，眼眶脂肪来源的ASCs在体外培养分化过程中，其分泌的各种细胞因子和生长因子可能会对角膜上皮细胞的生长和修复起到重要作用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种眼部干细胞培养液，该眼部干细胞培养液可以使得眼部干细胞具有较强的增值能力和成纤维分化潜能，有利于眼部细胞的再生，本专利技术的具体方案如下：本专利技术的目的在于提供一种眼部干细胞培养液，其技术点在于：所述的眼部干细胞培养液包括的组分有：低糖型MEM培养基、胎牛血清、非必须氨基酸、血管内皮生长因子、生长激素释放抑制因子和血小板来源增殖因子。在本专利技术的有的实施例中，每1L所述的低糖型MEM培养基包括以下组分含量为：胎牛血清0.8~1.2L非必须氨基酸5~30g血管内皮生长因子0.5~2.5mg生长激素释放抑制因子0.25~0.4mg血小板来源增殖因子0.5~2mg。在本专利技术的有的实施例中，所述的低糖型MEM培养基的制备方法如下：S1配置前准备：配置培养基新制备的milliwater，然后将制备培养基的器皿清洗干净，并用milliwater润洗两次；S2.溶解培养基：取终体积分数为5%的milliwater，加入到1L玻璃杯中，将干粉培养基倒入烧杯，水洗包装袋内面两次，倒入培养液中，磁力搅拌助溶；S3.补加试剂：然后加入2~2.5g的NaHCO3和2~2.5g的HEPES完全溶解；S4.加抗生素：加入活性为100U/mL的青霉素和活性为100U/mL链霉素完全溶解；S5.调pH值：加水到1000ml，然后用HCL或者NaOH调节pH到7.2；S6.过滤除菌：采用0.22um滤膜，过滤后分装于小瓶中，备用。在本专利技术的有的实施例中，所述的milliwater为超纯水，所述的超纯水的电阻率为18.2MΩ·cm。在本专利技术的有的实施例中，所述的非必须氨基酸选自谷氨酸、丙氨酸、甘氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸、脯氨酸、丝氨酸和酪氨酸中的一种或者几种混合。在本专利技术的有的实施例中，所述的血管内皮生长因子选自血管内皮生长因子-121、血管内皮生长因子-145、血管内皮生长因子-165、血管内皮生长因子-189和血管内皮生长因子-206中的一种或者几种。与现有技术相比，本专利技术的有益效果：1.本专利技术的一种眼部干细胞培养液，其中胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。2.本专利技术的一种眼部干细胞培养液，其中的血管内皮生长因子是一种高度特异性的促血管内皮细胞生长因子，具有促进血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用。3.本专利技术的一种眼部干细胞培养液，其中的血小板来源增殖因子是是贮存于血小板α颗粒中的一种碱性蛋白质。是低分子量促细胞分裂素。能刺激停滞于G0/G1期的成纤维细胞、神经胶质细胞、平滑肌细胞等多种细胞进入分裂增殖周期。血小板衍生生长因子PDGF于1974年发现的一种刺激结缔组织等组织细胞增长肽类调节因子，因其来源于血小板而得名，正常生理状态下存在于血小板的α颗粒内，当血液凝固时由崩解的血小板释放出来并且被激活，具有刺激特定细胞趋化与促进特定细胞生长的生物活性。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以使本领域的技术人员能够更好的理解本专利技术的优点和特征，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚的界定。本专利技术所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本专利技术的一种眼部干细胞培养液包括的组分有：低糖型MEM培养基、胎牛血清、非必须氨基酸、血管内皮生长因子、生长激素释放抑制因子和血小板来源增殖因子。其中，每1L所述的低糖型MEM培养基包括以下组分含量为：胎牛血清0.8L非必须氨基酸5g血管内皮生长因子0.5mg生长激素释放抑制因子0.4mg血小板来源增殖因子2mg。其中，低糖型MEM培养基的制备方法如下：S1配置前准备：配置培养基新制备的milliwater，然后将制备培养基的器皿清洗干净，并用milliwater润洗两次；S2.溶解培养基：取终体积分数为5%的milliwater，加入到1L玻璃杯中，将干粉培养基倒入烧杯，水洗包装袋内面两次，倒入培养液中，磁力搅拌助溶；S3.补加试剂：然后加入2.5g的NaHCO3和2.5g的HEPES完全溶解；S4.加抗生素：加入活性为100U/mL的青霉素和活性为100U/mL链霉素完全溶解。S5.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种眼部干细胞培养液，其特征在于：所述的眼部干细胞培养液包括的组分有：低糖型MEM培养基、胎牛血清、非必须氨基酸、血管内皮生长因子、生长激素释放抑制因子和血小板来源增殖因子。/n

【技术特征摘要】
1.一种眼部干细胞培养液，其特征在于：所述的眼部干细胞培养液包括的组分有：低糖型MEM培养基、胎牛血清、非必须氨基酸、血管内皮生长因子、生长激素释放抑制因子和血小板来源增殖因子。


2.根据权利要求1所述的一种眼部干细胞培养液，其特征在于：每1L所述的低糖型MEM培养基包括以下组分含量为：
胎牛血清0.8~1.2L
非必须氨基酸5~30g
血管内皮生长因子0.5~2.5mg
生长激素释放抑制因子0.25~0.4mg
血小板来源增殖因子0.5~2mg。


3.根据权利要求1所述的一种眼部干细胞培养液，其特征在于：所述的低糖型MEM培养基的制备方法如下：
S1配置前准备：配置培养基新制备的milliwater，然后将制备培养基的器皿清洗干净，并用milliwater润洗两次；
S2.溶解培养基：取终体积分数为5%的milliwater，加入到1L玻璃杯中，将干粉培养基倒入烧杯，水洗包装袋内面两次，倒入培养液中，磁力搅拌助溶；
S3.补加...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨慧慧，
申请(专利权)人：杨慧慧，
类型：发明
国别省市：安徽;34