The invention discloses a method for preparing neutrophil microbubbles, which comprises the following steps: adding stimulant to the neutrophil culture medium, standing for 30-45min, ultraviolet radiation for 15-30min; adding folic acid, centrifuging for 2-3H and collecting the neutrophil microbubbles; before centrifuging, the solution temperature is always kept at 15-18 \u2103; the stimulant is calcium chloride, folic acid and glucose A mixture of procyanidins. The method of the invention can quickly stimulate the neutrophils to produce micro vesicles of uniform size, at the same time, it can maintain the normal growth state of the cells and prevent excessive damage to the cells. By adopting the method of the invention, the diameter difference of the obtained neutrophil microbubbles is not more than 200nm, the size is uniform, and there is a complete envelope.
【技术实现步骤摘要】
一种制备中性粒细胞微囊泡的方法
本专利技术涉及一种制备中性粒细胞微囊泡的方法,属于生物
技术介绍
微囊泡(MV)是最早在血液系统被发现的一种细胞膜来源的囊泡结构,直径通常在100-1000nm之间(亦有学者认为其直径在20~1000nm之间)。研究发现多种细胞均可产生微囊泡,例如上皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞和肿瘤细胞等。中性粒细胞是机体抵御微生物的第一道屏障,在天然免疫系统中起着重要的作用,其释放的微囊泡含有与母细胞相似的蛋白和脂质成分,也可能含有母细胞胞浆的细胞器和其他遗传信息,因此,中性粒细胞微囊泡可能参与细胞之间的信息传递,参与炎症反应、免疫反应等。有研究显示,中性粒细胞在关节炎的治疗方面具有一定作用,除此之外,对于中性粒细胞微囊泡的研究相对较少,特别是对于微囊泡直径与其生物学功能之间的关系,尚未发现相关的研究报道。为了对微囊泡直径与其生物学功能之间的关系进行深入研究,研究者首先需要解决的问题是如何获得直径大小均一的中性粒细胞微囊泡。
技术实现思路
鉴于现有技术的不足,本专利技术提供一种制备中性粒细胞微囊泡的方法。本专利技术技术方案如下:一种制备中性粒细胞微囊泡的方法,包括以下步骤:S1:将刺激剂加入至中性粒细胞培养液中,静置30~45min,紫外线辐射15~30min;刺激剂的用量优选为0.5~1.0g/L中性粒细胞培养液。S2:加入叶酸,2~3h后离心收集中性粒细胞微囊泡;其中,离心前,始终保持溶液温度15~18℃;所述刺激剂为 ...
【技术保护点】
1.一种制备中性粒细胞微囊泡的方法,其特征在于,包括以下步骤:/nS1:将刺激剂加入至中性粒细胞培养液中,静置30~45min,紫外线辐射15~30min;/nS2:加入叶酸,2~3h后离心收集中性粒细胞微囊泡;/n其中,离心前,始终保持溶液温度15~18℃;/n所述刺激剂为氯化钙、叶酸、葡萄糖和原花青素的混合物。/n
【技术特征摘要】
1.一种制备中性粒细胞微囊泡的方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:将刺激剂加入至中性粒细胞培养液中,静置30~45min,紫外线辐射15~30min;
S2:加入叶酸,2~3h后离心收集中性粒细胞微囊泡;
其中,离心前,始终保持溶液温度15~18℃;
所述刺激剂为氯化钙、叶酸、葡萄糖和原花青素的混合物。
2.根据权利要求1所述的制备中性粒细胞微囊泡的方法,其特征在于,所述刺激剂的用量为0.5~1.0g/L中性粒细胞培养液。
3.根据权利要求1所述的制备中性粒细胞微囊泡的方法,其特征在于,步骤S2中叶酸的加入量为33~38mg/L。
4.根据权利要求1所述的制备中性粒细胞微囊泡的方法,其特征在于,刺激剂中,氯化钙、叶酸、葡萄糖和原花青素的质量比为1:(0.1~0.2):(20~28):(0.1~0.2)。
5.根据权利要求1所述的制备中性粒细...
【专利技术属性】
技术研发人员:战跃福,吴烨华,王毅翔,鲁宏,郭子义,陈建强,关莹,
申请(专利权)人:海南省妇幼保健院,
类型:发明
国别省市:海南;46
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