The invention discloses a nucleic acid constant temperature amplification detection kit for Toxoplasma gondii and its application method, the kit includes DNA extraction reagent, constant temperature amplification reaction solution, positive control and negative control; the detection kit of the invention has high specificity and sensitivity; the whole part of the nucleic acid amplification reaction is constant at the same temperature, the constant temperature amplification only takes 35min, the detection result of the nucleic acid test strip takes 1-2min, and the whole The whole detection process from receiving the samples to obtaining the results only needs about 1H, and the whole reaction process only needs a constant temperature instrument, which is especially suitable for the rapid detection and elimination of Toxoplasma gondii in the field.
【技术实现步骤摘要】
一种弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒及应用方法(一)
本专利技术涉及一种针对弓形虫核酸的恒温扩增快速检测方法,适合对弓形虫核酸的定性检测。(二)
技术介绍
先天性弓形虫病是一种在人类优生优育中受到极大关注的寄生虫病,其病原体刚地弓形虫(Toxoplasmagondii,Tox)经母体胎盘传播,从而感染胎儿。在母体早孕期间可导致流产、早产、死产、畸形和无脑儿、脑积水、小头畸形等;在妊娠中、晚期,婴儿多呈隐性感染,出生后可出现精神运动障碍、脑钙化灶、视网膜脉络膜炎等先天性弓形虫病症候群。2005年,全国第2次寄生虫调查显示,孕妇感染率为6.25%-32.9%。我国每年约有5.5-9万名新生儿受弓形虫侵害,对母婴健康造成极大的危害,严重影响出生人口素质,给优生优育工作带来极大障碍。目前,Tox已被列为全球感染性致畸TORCH综合征的重要病因。妊娠期Tox感染产前诊断直接关系到胎儿的处置,能在孕前和孕早期发现宫内感染是预防先天性弓形虫病发生的重要措施。如在孕前或孕早期检测,及时采取相应措施,可减少63%的先天性弓形虫感染。虽然Tox抗体检测是我国优生优育5项检测中的项目之一,但目前病原学、免疫学、分子生物学等实验室检测方法对弓形虫病的早期诊断仍存在许多不足,不能满足优生优育中准确、快速、简便的检测需求。因此,建立一种核酸快速检测方法对弓形虫病的防治至关重要,使临床医师能及早、准确地诊断孕前与孕期的Tox感染,对于指导临床用药、防止宫内感染、控制畸形胎儿出生,实现人群的优生优育具有十分重要意义。交叉引物恒温扩增技术(CrossingPrimingAmplificatio ...
【技术保护点】
1.一种弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒,其特征在于所述试剂盒包括:(1)DNA提取试剂;(2)PCR恒温扩增反应液;所述PCR恒温扩增反应液包括引物和探针;所述引物为外围引物和扩增交叉引物;所述探针为正向5′端Biotin标记探针和反向5′端FAM标记探针;所述外围引物为正向外围引物和反向外围引物,其核苷酸序列如下:正向外围引物为:5′‑CGACATCGCATTCAAGGGA‑3′;反向外围引物为:5′‑GTGGCTTTTCTGGAGGTACA‑3′;所述探针的核苷酸序列为:正向5′端Biotin标记探针:5′‑Biotin‑TCTCTTGTCTCGAATACACGAAC‑3′;反向5′端FAM标记探针:5′‑FAM‑TGCCAGAAGAAGGGTACGT‑3′;所述扩增交叉引物为扩增正向引物和扩增反向引物,其核苷酸序列分别为:扩增正向引物:5′‑CTTCAGCCGTCTTGTGGGGG‑AGAGATCCAGCAGATCTCGT‑3′;扩增反向引物:5′‑TTGTGCTGCCTCCTCTCATGG‑CAGCGGGAAATACAGCTCTT‑3′;(3)阳性对照:含有弓形虫B1基因的DNA ...
【技术特征摘要】
2019.04.29 CN 20191035493291.一种弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒,其特征在于所述试剂盒包括:(1)DNA提取试剂;(2)PCR恒温扩增反应液;所述PCR恒温扩增反应液包括引物和探针;所述引物为外围引物和扩增交叉引物;所述探针为正向5′端Biotin标记探针和反向5′端FAM标记探针;所述外围引物为正向外围引物和反向外围引物,其核苷酸序列如下:正向外围引物为:5′-CGACATCGCATTCAAGGGA-3′;反向外围引物为:5′-GTGGCTTTTCTGGAGGTACA-3′;所述探针的核苷酸序列为:正向5′端Biotin标记探针:5′-Biotin-TCTCTTGTCTCGAATACACGAAC-3′;反向5′端FAM标记探针:5′-FAM-TGCCAGAAGAAGGGTACGT-3′;所述扩增交叉引物为扩增正向引物和扩增反向引物,其核苷酸序列分别为:扩增正向引物:5′-CTTCAGCCGTCTTGTGGGGG-AGAGATCCAGCAGATCTCGT-3′;扩增反向引物:5′-TTGTGCTGCCTCCTCTCATGG-CAGCGGGAAATACAGCTCTT-3′;(3)阳性对照:含有弓形虫B1基因的DNA质粒;(4)阴性对照:无菌双蒸水。2.如权利要求1所述弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒,其特征在于所述阳性对照为含有长度为210bp弓形虫B1基因的片段。3.如权利要求2所述弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒,其特征在于所述弓形虫B1基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1所示。4.如权利要求1所述弓形虫核酸恒温扩增检测试剂盒,其特征在于所述阳性对照按如下步骤制备:以包含扩增区域的弓形虫B1基因为模板,通过两条外围引物进行PCR扩增获得目的基因;利用PCR纯...
【专利技术属性】
技术研发人员:阮卫,张玲玲,徐昌平,姚立农,陆巧绎,
申请(专利权)人:浙江省疾病预防控制中心,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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