GLUT4基因敲除的sgRNA、A549细胞系及其构建方法技术

本发明专利技术提供了一种GLUT4基因敲除的sgRNA、A549细胞系及其构建方法。本发明专利技术提供的GLUT4基因敲除的sgRNA，在GLUT4基因上的靶序列位于其3号外显子上，靶序列如SEQ ID NO：1所示；本发明专利技术还提供了GLUT4基因敲除的A549细胞系以及构建方法，以表达载体pX458‑GLUT4作为GLUT4基因的打靶载体，转染A549细胞，获得GLUT4基因敲除的单克隆细胞株；本发明专利技术利用CRISPR/Cas9系统从A549细胞中敲除GLUT4基因，从基因和蛋白水平的检测都证实，GLUT4已被成功敲除，为研究GLUT4基因表达缺失对A549细胞葡糖糖摄取及细胞功能上的提供了理想的细胞模型。

GLUT4 gene knockout sgRNA and A549 cell lines and their construction methods

【技术实现步骤摘要】
GLUT4基因敲除的sgRNA、A549细胞系及其构建方法
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及GLUT4基因敲除的sgRNA、A549细胞系及其构建方法及其应用。
技术介绍
A549细胞是一种人肺腺癌上皮细胞系。它在形态、结构及代谢产物组成上与二型肺泡细胞极为相似，后者是一类与直径约9微米的球形肺泡细胞，主要功能为合成和分泌一些脂蛋白类活性物质，降低肺泡气液界面的表面张力，从而增加肺泡稳定性，防止水肿。因此，A549细胞已被用作研究二型肺泡细胞反应的模型。另一方面，它作为非小细胞肺癌中的一种，在肺癌研究中具有一定的意义。众所周知，癌细胞拥有着不受控的无限增殖及持续的侵袭与迁移的能力，而这些过程势必需要其发生倍比于正常细胞的能量代谢及糖代谢。GLUT4是一种膜蛋白，分子量约45-55KD，基本结果有12个跨膜片段(M1-M12)组成。人类与大鼠GLUT4约有95％以上的核苷酸序列是相同的。GLUT4仅存在于胰岛素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪细胞中。在没有胰岛素刺激时主要位于细胞内的贮存囊泡内。当胰岛素与受体结合后，激发一系列级联效应，导致富含GLUT4的囊泡向细胞外膜移动，囊泡膜与细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种GLUT4基因敲除的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA基于CRISPR/CAS9系统，且所述sgRNA在GLUT4基因上的靶序列位于其3号外显子上，靶序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种GLUT4基因敲除的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA基于CRISPR/CAS9系统，且所述sgRNA在GLUT4基因上的靶序列位于其3号外显子上，靶序列如SEQIDNO：1所示。2.一种包含权利要求1所述的sgRNA的表达载体。3.如权利要求2所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为pX458-GLUT4。4.如权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体pX458-GLUT4的构建方法为：在GLUT4基因的3号外显子上的靶序列的5’端加上BbsI的酶切位点caccg，构成序列SEQIDNO：2，并人工合成其互补序列SEQIDNO：3，将互补序列SEQIDNO.2和SEQIDNO：3所形成的双链DNA，与经过BbsI酶切的pX458载体连接，从而制得表达载体pX458-GLUT4。5.权利要求3所述的表达载体在制备GLUT4基因敲除的A549细胞系中的应用。6.一种GLUT4基因敲除的A549细胞系。7.一种权利要求6所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵平，刘佳，张颖，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42