【技术实现步骤摘要】
一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法
本专利技术涉及病毒的快速检测领域，特别是指一种检测苹果茎沟病的RPA引物对、探针及试剂盒和使用方法。
技术介绍
苹果病毒病主要分为潜隐性病毒、非潜隐性病毒和类病毒三大类，其中ACLSV、ASPV、ASGV等潜隐性病毒在侵染树体以后，植株并没有明显的表症，不能及时被种植者发现，不仅容易通过机械传播，而且会不断地降低植株的长势，逐渐降低果实的产量和质量，造成显著的经济损害。APMV被认为是主要侵染我国果树的非潜隐性病毒，近两年有研究表明，造成我国花叶病症状的真正病原是APNMV，并非APMV。主要侵染我国苹果的类病毒包括苹果锈果类病毒，是一类没有衣壳蛋白包被的单链RNA分子，不能通过血清学进行检测。近年来，随着分子病毒学和生物技术的进步，如今主要的检测方法有指示植物法、血清法、聚合酶链式反应、高通量测序技术和等温扩增技术等，目前使用较多的是PCR技术。等温扩增技术，如依赖解旋酶扩增（Helicase-dependentamplification，HDA）、重组酶聚合酶扩增（Recombinasepolymera...
【技术保护点】
1.一种检测苹果茎沟病的RPA引物对和探针，其特征在于：所述RPA引物对序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示，其中SEQ ID NO.2序列的5’端设有生物素标记，探针序列如SEQ ID NO.3所示，探针在5’端用FAM进行荧光标记，30‑31bp之间设有dSpacer无碱基位点，3’端用C3Spacer进行磷酸化修饰。
【技术特征摘要】
1.一种检测苹果茎沟病的RPA引物对和探针，其特征在于：所述RPA引物对序列如SEQIDNO.1、SEQIDNO.2所示，其中SEQIDNO.2序列的5’端设有生物素标记，探针序列如SEQIDNO.3所示，探针在5’端用FAM进行荧光标记，30-31bp之间设有dSpacer无碱基位点，3’端用C3Spacer进行磷酸化修饰。2.利用权利要求1所述的RPA引物对和探针检测苹果茎沟病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的反应体系包括25μL预混液BufferA、10μL预混液BufferB、7.5μL引物及探针预混液BufferC和2.5μL10μM醋酸镁。3.根据权利要求2所述的RPA引物对和探针检测苹果茎沟病的试剂盒，其特征在于：所述25μL预混液BufferA，包括终浓度：4mM的DTT、180mM的乙酸钾、10%的Carbowax20M、400μM的dNTPs、6mM的ATP、100mMpH为8.1的Tris、70mM的磷酸肌酸，混合均匀以备用。4.根据权利要求2所述的RPA引物对和探针检测苹果茎沟病的试剂盒，其特征在于：所述10μL预混液BufferB，包括终浓度175ng·μL-1的BsuDNA聚合酶、500ng·μL-1的肌酸激酶、4μg·μL-1的gp32蛋白、900ng·μL-1的T4uvsX重组酶、200ng·μL-1的T4uvsY重组酶和1μg·μL-1大肠杆菌核酸内切酶Ⅳ，混合均匀以备用。5.根据权利要求2所述的RPA引物对和探针检测苹果茎沟病的试剂盒，其特征在于：所述7.5μL引物及探...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑先波，焦健，冯建灿，韩金蒙，黄松，白团辉，宋春晖，王苗苗，宋尚伟，孔康康，夏炎，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：河南,41
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