【技术实现步骤摘要】
一种基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法
本专利技术涉及一种检测方法，尤其涉及一种基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法。
技术介绍
乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus，HBV)引起的传染性疾病，其发病率居我国传染病首位，严重危害人类的健康和生命。随着辅助生殖技术的广泛应用，对于合并HBV感染的不孕不育症患者，在实施ART过程中HBV能否经生殖细胞垂直传播给子代已成为被关注的焦点和热点。垂直传播是HBV的主要传播途径之一。狭义的垂直传播是指患者的生殖细胞受病毒感染，在受精时经由精子或卵细胞作为载体将病毒基因带入胚胎进而使子代患病，即存在生殖细胞传播。传统方法一般采用取整个胚胎进行mRNA提取后逆转录再进行测序检测的方法，不但检测范围小，而且操作繁琐，对技术精度要求高。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的就在于提供一种基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法。本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：本专利技术包括以下步骤：1)获取携带HBV病毒的样本胚胎；2)分离单...
【技术保护点】
1.一种基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法，其特征在于：包括以下步骤：1)获取携带HBV病毒的样本胚胎；2)分离单个细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解；3)进行全基因组扩增：对裂解后的细胞样本进行全基因组扩增并纯化、对扩增产物使用蛋白质定量，并对片段长度分布进行检测。4)使用扩增产物DNA，超声打断后构建DNA小片段文库。5)经过末端修复,对DNA片段进行加碱基A和加测序接头；6)对待测样本进行PCR扩增，构建得到最终文库；7)对所述待测样本构建的最终文库后进行上机测序以获得每个DNA片段的碱基序列，并对碱基序列进行分析以获得染色体变异信息，比对测序结...
【技术特征摘要】
1.一种基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法，其特征在于：包括以下步骤：1)获取携带HBV病毒的样本胚胎；2)分离单个细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解；3)进行全基因组扩增：对裂解后的细胞样本进行全基因组扩增并纯化、对扩增产物使用蛋白质定量，并对片段长度分布进行检测。4)使用扩增产物DNA，超声打断后构建DNA小片段文库。5)经过末端修复,对DNA片段进行加碱基A和加测序接头；6)对待测样本进行PCR扩增，构建得到最终文库；7)对所述待测样本构建的最终文库后进行上机测序以获得每个DNA片段的碱基序列，并对碱基序列进行分析以获得染色体变异信息，比对测序结果进行分析，对获得的基因组序列与参考基因组进行比对，从而获得基因组序列在参考基因组上的位置信息以检测子代胚胎中HBV病毒是否能垂直传播。2.根据权利要求1所述的基于PGD的卵裂期胚胎单细胞检测HBV病毒基因组垂直传播方法，其特征在于：在所述步骤3)中，单细胞使用MDA方法或MALBAC方法进行全基因组扩增。3.根据权利要求2...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐永芳，李永刚，马艳萍，李云秀，晏家骢，相立锋，高梦莹，
申请(专利权)人：云南省第一人民医院，
类型：发明
国别省市：云南,53
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。