一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法技术
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胚胎工程
，尤其涉及一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法。
技术介绍
在胚胎学研究中，常用到siRNA，siRNA是siRISC的主要成员，用于特定目标mRNA的沉默。但在试验过程中常遇到目的基因沉默失败或者沉默不完全的现象，致使降低基因的表达不明显。究其原因，主要是由于在胚胎注射时，注射方法存在弊端，不能使注射的成功率达到100％，从而影响siRNA沉默目的基因的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法。一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法，包括以下步骤；S1：将受精6h之后的卵母细胞移出，转入含有透明质酸酶的脱卵丘液中，静置1min；S2：将卵母细胞转移至显微镜下，脱去卵母细胞中的颗粒细胞，将去除颗粒细胞的卵母细胞用卵母细胞洗涤液清洗3次；S3：用注射针吸取20pl目标液体，并在显微镜下将注射针的针头刺入卵母细胞中，抽吸卵母细胞，使卵母细胞的细胞膜破坏，卵母细胞的细胞膜破坏完成后再快速注入目标液体，注射成功的标志是显微镜下可以观察到胚胎内容物扩张，即完成一个卵母细胞的注射。优选的，所述脱卵丘液中透明质酸酶的含量为0.1％。优选的，所述脱去卵母细胞中颗粒细胞的方法采用移液器吹打法。优选的，所述卵母细胞洗涤液清洗为0.1％PVA-DPBS。优选的，所述目标液体为siRNA混合物。优选的，所述注射成功的标志是显微镜下可以观察到胚胎内容物扩张。本专利技术提供的胚胎显微注射的方法，能够有效避免传统显微注射方法对卵母细胞注射失败现象发生，...
【技术保护点】
一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法，其特征在于，包括以下步骤；S1：将受精6h之后的卵母细胞移出，转入含有透明质酸酶的脱卵丘液中，静置1min；S2：将卵母细胞转移至显微镜下，脱去卵母细胞中的颗粒细胞，将去除颗粒细胞的卵母细胞用卵母细胞洗涤液清洗3次；S3：用注射针吸取20pl目标液体，并在显微镜下将注射针的针头刺入卵母细胞中，抽吸卵母细胞，使卵母细胞的细胞膜破坏，卵母细胞的细胞膜破坏完成后再快速注入目标液体，即完成一个卵母细胞的注射。
【技术特征摘要】
1.一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法，其特征在于，包括以下步骤；S1：将受精6h之后的卵母细胞移出，转入含有透明质酸酶的脱卵丘液中，静置1min；S2：将卵母细胞转移至显微镜下，脱去卵母细胞中的颗粒细胞，将去除颗粒细胞的卵母细胞用卵母细胞洗涤液清洗3次；S3：用注射针吸取20pl目标液体，并在显微镜下将注射针的针头刺入卵母细胞中，抽吸卵母细胞，使卵母细胞的细胞膜破坏，卵母细胞的细胞膜破坏完成后再快速注入目标液体，即完成一个卵母细胞的注射。2.根据权利要求1所述的一种胚胎显微注射siRNA完全沉默目的基因的方法，其特征在于，所述脱卵丘液中...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭镇华，吕蕾，赛福，杨云春，付博，刘自广，汪亮，彭福刚，
申请(专利权)人：黑龙江省农业科学院畜牧研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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