轮状病毒疫苗组合物及其制备方法技术

本申请涉及轮状病毒疫苗组合物及其制备方法。本发明专利技术提供了包括轮状病毒抗原、稳定剂和缓冲液的轮状病毒疫苗组合物。本发明专利技术中的缓冲液被预混合在轮状病毒疫苗组合物中以中和胃部的高度酸性pH，而无需在疫苗施用前单独施用抗酸剂。具有本发明专利技术的缓冲液的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。

Composition of rotavirus vaccine and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
轮状病毒疫苗组合物及其制备方法本申请是申请日为2013年4月23日，申请号为201380033018.5，专利技术名称为“轮状病毒疫苗组合物及其制备方法”的申请的分案申请。
本专利技术涉及新型轮状病毒疫苗组合物以及用于制备该新型轮状病毒疫苗组合物的方法。更具体地，本专利技术涉及包括轮状病毒抗原、稳定剂和新型缓冲液的新型轮状病毒疫苗组合物。缓冲液被预混合在本专利技术的轮状病毒疫苗组合物中。本专利技术的疫苗组合物是用于口服施用的稳定的液体轮状病毒疫苗制剂。
技术介绍
在全世界，轮状病毒是严重的脱水性腹泻的最常见原因。每年，五十多万小于5岁的儿童死于轮状病毒腹泻。这些轮状病毒相关的死亡多于80％发生在撒哈拉以南的非洲和南亚的发展中国家。此外，轮状病毒引起发展中国家和发达国家中全部腹泻住院治疗的25–50％，并且门诊卫生医疗每年接纳两千三百万幼儿。几乎每个孩子在5岁之前便已感染了轮状病毒。由于轮状病毒疾病的巨大全球负担，针对这种病原体的疫苗的开发在过去三十年就已经是优先事项。市购可得的两种活的、口服施用的轮状病毒疫苗是(MerckandCo.有限公司，PA,USA和SanofiPasteurMSDSNC,Lyon,France)和(GSKBiologicals,Rixensart,Belgium)。在2009年4月和10月，WHO的战略咨询专家组(SAGE)查阅了来自非洲和亚洲的不同人群的另外的效力数据，以及在美国许可后(post-licensure)的研究，并将疫苗接种推荐推广到世界所有地区。轮状病毒衣壳由三个同心蛋白层组成。由VP7和VP4组成的外层在病毒进入宿主细胞期间丢失。通过用胰蛋白酶(其将VP4裂解为VP8*和VP5*两段，VP8*和VP5*)处理并通过用胰蛋白酶补充培养基的组织培养，轮状病毒野外分离株(fieldisolate)可被调适(adapted)为高滴度生长。已知蛋白酶抑制剂减弱轮状病毒的体外和体内复制。当与三层颗粒(TLP)缔合时，胰蛋白酶失活并且不能接近蛋白酶抑制剂，诸如抑肽酶。当外层被钙螯合剂溶解时，释放VP5*、VP8*和VP7，并且缔合的胰蛋白酶被活化，允许裂解病毒衣壳蛋白，以及其他外源蛋白。表明，胰蛋白酶抑制剂的加入显著降低细胞中病毒mRNA和病毒蛋白的合成，并且发挥主要的抑制效应，如果在病毒进入细胞时存在胰蛋白酶抑制剂的话。这指示轮状病毒颗粒摄入胰蛋白酶可增强其感染性。通过用胰蛋白酶处理来增强感染性。胰蛋白酶通过允许病毒的非传染性部分裸露在受感染的细胞中而将该部分转化为传染性病毒。发现胰蛋白酶裂解牛轮状病毒的88,000道尔顿的结构多肽，生成67,000道尔顿和20,000道尔顿的裂解产物。用胰蛋白酶(猪起源)活化轮状病毒被认可，并在感染后也进行培养基中胰蛋白酶的添加以获得最佳产量。然而，胰蛋白酶的来源是猪源的，即来自猪。已表明来自猪来源的胰蛋白酶可能包含不期望的其他污染性病毒如猪圆环病毒1和2。当猪源胰蛋白酶用于培养轮状病毒时，还可发现痕量的其他风险性污染物如多氯联苯(PCB)。因此，在可能的程度上从轮状病毒培养的生物工艺中避免动物来源的胰蛋白酶是重要的。另外，由于猪相关的产品还是某些宗教信仰特别是世界上伊斯兰地区的障碍，因此绝对不含猪来源物的疫苗将更为有益和有用的。工艺开发研究被启动以引入重组胰蛋白酶的使用来克服疫苗制剂中PCB和其他动物来源产物的风险，重组胰蛋白酶的使用是该生物工艺中的新型步骤的。重组胰蛋白酶不含动物组分(ACF)、活性极为特异、不含污染性糜蛋白酶、不含动物来源的外来物质，并且对人类消耗是安全的。最早在1998-99年，惠氏(Wyeth)拥有在市场上推出商业轮状病毒疫苗的特权。惠氏Rotashield的组合物包括在恒河猴胎二倍体细胞系中培养的两性霉素B的培养基中的活的人-猴重配体四价轮状病毒抗原、蔗糖、谷氨酸单钠、磷酸氢二钾、焦磷酸钾、胎牛血清、硫酸新霉素。然而，由于疫苗施用后与肠套叠相关的问题，以及相关的不良反应，惠氏从市场上撤回了其商业轮状病毒疫苗制剂。目前的疫苗，包括包含单价人血清型–P1A[8]G1(Rotarix)的一种疫苗和包含五种人-牛重配体–G1、G2、G3、G4和P1A[8](RotaTeq)的另一种疫苗已在临床试验中表现出普通的效力和安全性。尽管对于与轮状病毒疫苗相关的肠套叠已取得了相当大的进展，然而主要的悬而未决的问题仍有待解决。已观察到并证明了，当在发展中国家测试可得的轮状病毒疫苗时，通常产生欠佳的效力，这导致了关于任何未来活的口服轮状病毒疫苗在这些环境中可能的效力的担忧。(BreseeJS,GlassRI,IvanoffB,GentschJ.Currentstatusandfutureprioritiesforrotavirusvaccinedevelopment,evaluationandimplementationindevelopingcountries.Vaccine1999；17:2207-22)。在高收入国家，极少儿童死于轮状病毒，反之，全球每年因轮状病毒感染死亡的大部分儿童来自低收入国家。不管是什么疫苗接种计划，不像高收入国家，对轮状病毒疫苗的研究在低收入国家显示中等效力。多种因素的组合，包括受限的医疗保健(水化治疗)享用、差的基础设施、较高的疫苗运输成本、施用疫苗的方式的特殊性特点、血清型覆盖的特异性、连同较大的营养不良普遍性，可能造成轮状病毒疫苗在发展中国家的这些中等的结果。目前在该领域的研究需要在低收入国家进一步研究轮状病毒疫苗并找出改进疫苗性能的新方法。最重要的是，需要提高轮状病毒疫苗制剂的稳定性以克服感兴趣的这些低收入国家中的昂贵且长期的运输以及存储设施。尽管，针对轮状病毒感染的轮状病毒疫苗的领域中可用的在先专利提供了用于轮状病毒疫苗制剂的稳定性的实验数据，然而对本领域现状的实践意义反映了在自疫苗生产日期的第一年之后的主要的稳定性障碍。因此，需要证明轮状病毒疫苗制剂储存至少24个月的有效的稳定性研究以确保全世界疫苗接种计划遍及其中针对轮状病毒的斗争可被认为仍处于其初级阶段的最不发达国家或其他低收入国家。轮状病毒是在pH2.0下具有小于12分钟的半衰期的酸不稳定性病毒。其在这样的酸性pH下迅速失活。轮状病毒疫苗被期望通过口服途径对婴儿施用，其中轮状病毒疫苗中的抗原最可能被胃部的胃酸失活。因此，为了防止病毒被胃酸灭活，需要在口服轮状病毒疫苗接种之前施用抗酸剂或缓冲液或与口服轮状病毒疫苗接种组合施用抗酸剂或缓冲液。拥有美国专利号6616931的默克，首先进入轮状病毒疫苗领域。美国6616931要求保护包含以下的轮状病毒疫苗组合物：包含轮状病毒毒株(1X105至1000X105pfu/ml)的液体轮状病毒疫苗制剂，选自由以下组成的组的糖：蔗糖、乳糖[1％至70％w/v]、甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、岩藻糖、海藻糖、聚天冬氨酸、或N-乙酰神经氨酸、肌醇六磷酸盐(植酸)、和唾液酸，选自由以下组成的组的磷酸盐[0.01M至2M]：单磷酸盐、多磷酸盐、磷酸化的糖，以及选自由以下组成的组的羧酸盐[0.05M至2M]：琥珀酸盐(0.05M)、柠檬酸盐(0.07M)、延胡索酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、乳酸盐、重组人血清白蛋白(0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种液体疫苗制剂，所述液体疫苗制剂包括：i.轮状病毒抗原；ii.组合缓冲液体系；iii.糖的组合；vi.重组人血清白蛋白；v.部分水解的乳白蛋白水解物。

【技术特征摘要】
2012.04.23 IN 667/CHE/20121.一种液体疫苗制剂，所述液体疫苗制剂包括：i.轮状病毒抗原；ii.组合缓冲液体系；iii.糖的组合；vi.重组人血清白蛋白；v.部分水解的乳白蛋白水解物。2.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。3.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度以0.01M至0.05M之间的范围存在。4.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.01M至2M之间的浓度范围存在。5.如权利要求3所述的疫苗制剂，其中所述柠檬酸盐的浓度是0.03M。6.如权利要求4所述的疫苗制剂，其中所述碳酸氢盐的浓度以0.3M的浓度存在。7.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液体系。8.如权利要求7所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.01M至0.5M之间的范围存在。9.如权利要求8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.1M的浓度存在。10.如权利要求8所述的疫苗制剂，其中所述碳酸盐-碳酸氢盐以0.2M的浓度存在。11.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是碱式碳酸镁缓冲液体系。12.如权利要求11所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁缓冲液体系以0.01M至0.5M之间的浓度范围存在。13.如权利要求12所述的疫苗制剂，其中所述碱式碳酸镁以0.1M的浓度存在。14.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是包含乙酸铵、碳酸氢铵和正磷酸氢二铵的混合的缓冲液体系。15.如权利要求14所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.01M至2M之间的浓度范围存在。16.如权利要求15所述的疫苗制剂，其中所述混合的缓冲液以0.5M的浓度存在。17.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述组合缓冲液体系是柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液体系，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里什纳·莫汉·瓦德雷夫，萨伊·德瓦拉居鲁·普拉萨德，
申请(专利权)人：巴拉特生物技术国际有限公司，
类型：发明
国别省市：印度,IN