一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法，所述方法步骤如下：1)生产细胞复苏，细胞增殖培养；2)扩增培养；3)加入细胞生长液，细胞使用胰酶进行消化，平行培养；4)细胞表面清洗；5)利用胰酶对于即将接种轮状病毒进行活化；6)将活化的轮状病毒接种到生产细胞，添加培养基培养；7)收获病毒液，离心，取上清液；8)超滤浓缩；9)层析，离子交换；10)甲醛灭活；11)添加氢氧化铝佐剂配制疫苗。

【技术实现步骤摘要】
一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法
本专利技术涉及疫苗的制备，特别涉及轮状病毒各血清型，利用生物反应器，大规模生产疫苗的方法，更具体地说，本专利技术涉及采用针对轮状病毒特性的生物反应器病毒培养方法、纯化方法，进而制备单价或多价灭活疫苗的方法，病毒具有较好的交叉保护原性。技术背景轮状病毒(Rotavirus，简称RV)属呼肠弧病毒科(Reoviridae)，轮状病毒属。病毒体的核心为双股RNA，由11个不连续的RNA节段组成。与RV抗原有关的主要结构蛋白有VP4、VP6、VP7。根据内壳结构蛋白VP6抗原性的不同，目前将RV分为A-G七个群。其中最常见的是A群。A群也是主要引起婴幼儿腹泻的主要病原之一。轮状病毒的外壳结构蛋白VP4、VP7具有抗原活性，刺激机体产生中和抗体。VP7为糖蛋白或G蛋白，依其抗原性不同区分的血清型称为G型，至少有14个G血清型；VP4为蛋白酶敏感蛋白或P蛋白，按其抗原性区分的血清型称为P型，至少有21个P血清型。轮状病毒感染主要是通过粪-口途径传播，也可以通过空气-飞沫等呼吸道传播，婴幼儿饮用或食用被轮状病毒感染的婴幼儿无论其是否有明显的症状均是主要的传染源，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)生产细胞复苏，在方瓶、转瓶进行细胞增殖培养；2)将传代的生产细胞从转瓶中消化后，接至生物反应器中，利用微载体进行扩增培养；3)转接之前，将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，将反应器调置合适参数运转；3)细胞使用胰酶进行消化，进行逐级放大方式，如10L～40L～70L～150L，或采用10L～40L～70L逐级放大，之后平行3～4个70L进行平行培养；4)接种病毒前对于微载体细胞用无血清培养基通过灌流方式进行细胞表面清洗；5)利用一定浓度的胰酶对于即将接种轮状病毒进行活化；6)将活化的轮状病毒接种到清洗后的生产细胞，孵育...

【技术特征摘要】
1.一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)生产细胞复苏，在方瓶、转瓶进行细胞增殖培养；2)将传代的生产细胞从转瓶中消化后，接至生物反应器中，利用微载体进行扩增培养；3)转接之前，将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，将反应器调置合适参数运转；3)细胞使用胰酶进行消化，进行逐级放大方式，如10L～40L～70L～150L，或采用10L～40L～70L逐级放大，之后平行3～4个70L进行平行培养；4)接种病毒前对于微载体细胞用无血清培养基通过灌流方式进行细胞表面清洗；5)利用一定浓度的胰酶对于即将接种轮状病毒进行活化；6)将活化的轮状病毒接种到清洗后的生产细胞，孵育吸附后，添加培养基培养；7)培养3-5d，收获病毒液，反复冻融三次，离心去处微载体，取上清液；8)对上清液进行超滤浓缩；9)利用Core700填料进行层析，之后利用QFF进行离子交换，以达到去除杂蛋白的纯化效果；10)将层析收获液经一定比例甲醛灭活4-6天后，除去甲醛；11)添加氢氧化铝佐剂配制疫苗。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：病毒的接种量为0.001～0.1MOI。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：病毒活化方法是5～20μg/ml0.25％胰蛋白酶，37℃水浴，0.5～1小时，活化后接种轮状病毒并吸附1～2小时，吸附液所需0.25％胰蛋白酶浓度是5～20μg/ml，病毒维持液所需0.25％胰蛋白酶浓度是10～40μg/ml，由于轮状病毒的特性，在反应器微载体接种病毒的过程中的活化、...

【专利技术属性】
技术研发人员：张立杰，宋菲菲，马莹，麻宏贺，王凤伟，
申请(专利权)人：北京智飞绿竹生物制药有限公司，重庆智飞生物制品股份有限公司，安徽智飞龙科马生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11