【技术实现步骤摘要】
一种提高间充质干细胞外泌体产量的制备方法
本专利技术涉及生物制剂
，具体涉及一种提高间充质干细胞外泌体产量的制备方法。
技术介绍
外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清中，是细胞核内体(也称多囊泡体)与细胞膜融合后释放到细胞外的直径为30-150nm，密度为1.10～1.18g/ml的膜性囊泡。外泌体可以通过向靶细胞运输各种生物活性分子如蛋白质、mRNA和miRNA等方式改变靶细胞的基因调控网络[5]。胎盘间充质干细胞的外泌体(MSCexosomes)可以增强血管再生，对缺血性疾病的治疗有奇异的效果。间充质干细胞的外泌体可以激活VEGF的受体，可加速下肢缺血组织的恢复。miR-320调控内皮生长因子(VEGF),成纤维生长因子(FGF)产生以干预糖尿病血管内皮细胞凋亡。[6]Prakash等[7]报道干细胞外泌体通过miRNA-210-3p刺激VEGF受体基因高表达及激活SRC,AKT,ERK等促血管生成通路，以起到大量分泌VEGF，最终改善微循环。现有间充质干细胞来源的外泌体可以通过收集间充质干细胞上清来获取，主要提取方法有超速离心法、凝胶色谱法、超滤法...
【技术保护点】
1.一种提高间充质干细胞外泌体产量的制备方法，其特征在于：包括间充质干细胞培养和干细胞外泌体提取，其具体步骤如下：步骤一：脐带间充质干细胞培养基配比如下：100ml DMEM/F12培养基+2ml非必须氨基酸+2ml L‑谷氨酰胺+2ug VCAM1试剂；步骤二：从低温容器中取出间充质干细胞(MSC)，迅速置于37℃水浴中连续晃动，1分钟内快速解冻；步骤三：无菌条件下，将完全解冻的细胞悬液转移至含有10ml细胞培养基的离心管中；1500rpm离心5分钟，吸弃离心后上清；步骤四：加入适量的新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数及活率检测；步骤五：根据细胞数量及活率，用培养基调整细胞...
【技术特征摘要】
1.一种提高间充质干细胞外泌体产量的制备方法，其特征在于：包括间充质干细胞培养和干细胞外泌体提取，其具体步骤如下：步骤一：脐带间充质干细胞培养基配比如下：100mlDMEM/F12培养基+2ml非必须氨基酸+2mlL-谷氨酰胺+2ugVCAM1试剂；步骤二：从低温容器中取出间充质干细胞(MSC)，迅速置于37℃水浴中连续晃动，1分钟内快速解冻；步骤三：无菌条件下，将完全解冻的细胞悬液转移至含有10ml细胞培养基的离心管中；1500rpm离心5分钟，吸弃离心后上清；步骤四：加入适量的新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数及活率检测；步骤五：根据细胞数量及活率，用培养基调整细胞接种密度为1.0×105个活细胞/cm2，将细胞悬液加入培养器皿中，轻轻摇晃使细胞均匀分布；...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄晨，罗文峰，唐郁宽，陈汉威，庄炜钊，李伟奇，贺雪平，
申请(专利权)人：广州市番禺区中心医院广州市番禺区人民医院，广州市番禺区心血管疾病研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44
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