抗LAG-3人源化单克隆抗体分子，抗原结合片段及其医药用途制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人LAG‑3抗体、其抗原结合片段及其医药用途。具体地，本发明专利技术涉及包含所述抗人LAG‑3抗体CDR区的鼠源抗体，嵌合抗体、人源化抗体，全人源化抗体，包含所述抗体及其抗原结合片段单独和或联合其它药物，包含PD‑1抗体的联合，激活人T细胞作用，以及其单独和或包含所述抗体、抗原结合片段的药物组合物，特别是和PD‑1抗体组合作为抗癌药物的用途，尤其是和PD‑1抗体药物联合用于肿瘤免疫治疗提高PD‑1抗体疗效，以及治疗PD‑1耐药的肿瘤病人。

Humanized Monoclonal Antibody Molecule Against LAG-3, Antigen Binding Fragment and Its Medical Use

【技术实现步骤摘要】
抗LAG-3人源化单克隆抗体分子，抗原结合片段及其医药用途
本专利技术涉及一种新的抗人LAG-3单克隆抗体，人源化单克隆抗体，抗原结合片段以及其单独或者联合PD-1抗体的用途，包含所述LAG-3抗体的CDR区的鼠源抗体，鼠源抗体可变区和人抗体恒定区的嵌合抗体、人源化抗体，全人源化抗体，以及包含所述抗体及其抗原结合片段激活人T细胞作用，以及其单独或药物组合物，特别是和PD-1抗体组合作为抗癌药物的用途。
技术介绍
肿瘤治疗领域近年取得的重大突破当推肿瘤免疫治疗药物发现并上市。针对免疫检查点细胞程序性死亡受体-1（PD-1）及其受体PD-L1为靶点的抗体药物自2014年起，先后已经有5款药物被批准上市。其中BMS的Opdivo和Merck的Keytruda近期（2018.6,2018.7）分别获批在中国上市。这几款抗体药物2017年销售总额已接近100亿美元大关。遗憾的是PD-1/PD-L1抗体药物只能对部分病人有效，还有大量的病人没有办法从这些药物中获益。此外，开始对PD-1抗体药物治疗有效的病人中，有些病人会产生耐药性。因此探索新的治疗方法，寻找新的肿瘤免疫治疗药物以及药物联合，是巨大的尚未满足病人临床治疗之急需。T细胞是免疫治疗的中心，能否有效地调控T细胞是免疫治疗能否有效的关键因素之一。PD-1抗体药物就是针对T细胞免疫检查点以恢复T细胞的免疫功能而发挥抗肿瘤作用。寻找适合的和PD-1抗体联合的药物，组合方式以更好发挥PD-1抗体疗效，是提高PD-1抗体疗效、克服耐药性的方式之一。在可能的药物组合中，新的免疫检查点抗体和PD-1抗体药物组合是可能的方向之一。事实上，抗PD-1抗体Opdivo和抗CTLA-4（细胞毒性T淋巴细胞相关分子-4）抗体联用已经被批准用于治疗黑色素瘤。最近（2018年ASCO年会）又有新的免疫检查点抗体联合治疗提高PD-1抗体疗效的临床数据公布。围绕着PD-1展开联合治疗，试图提高PD-1抗体免疫治疗疗效，克服耐药性的众多新的免疫检查点靶点中，淋巴细胞活化基因-3(LymphocyteActivationGene3，LAG-3，CD223)是很有希望的新靶点之一。LAG-3是免疫球蛋白超基因家族的一员，其在结构上以及遗传上与CD4有关。类似于CD4，LAG-3己被证明与MHCII类分子进行相互作用。它同CTLA-4和PD-1一样，是T细胞负性共刺激分子(抑制共受体)，是一种独立的负调节分子。LAG-3分子负调节T细胞扩增和控制记忆性T细胞。这种调节功能不是与CD4分子竞争性的结合MHCII类分子。树突状细胞膜表面的LAG-3分子则参与活化DC，还可以通过与T细胞表面的MHCII类分子相互结合促进细胞因子分泌，具有调节树突状细胞的能力，是一种抗原提呈细胞(APC)的活化剂。LAG-3在不同细胞，包括T细胞，B细胞，NK细胞，浆细胞样DC等中表达,在激活T细胞中高表达。高表达的LAG-3和MHCII结合，抑制了T细胞活性，增强肿瘤免疫逃逸和调节T细胞（Treg）进入肿瘤微环境。同时表达LAG-3是记忆T细胞的特征之一。因此，LAG-3抑制剂的研究成为肿瘤免疫治疗的热点。特别是新的抗LAG-3抗体，以及其和PD-1抗体联合，提高PD-1抗体疗效的研究，尤为引起关注。临床数据支持抗LAG-3抗体单独或和PD-1抗体联用具有显著的抑制肿瘤的功效。在多种癌症类型的患者中，如黑色素瘤、结肠癌、乳腺癌等，肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)表达LAG-3，这与癌细胞侵略性的临床特征关联。阻断LAG-3则可以逆转LAG-3对T细胞的抑制作用，恢复CD8+T细胞增值和活性，并减少调节性T细胞数量，还可提高T细胞免疫应答的敏感度。和PD-1抗体的阻断作用协同恢复T细胞免疫功能抑制肿瘤。BMS开发的抗人LAG-3抗体BMS-986016用于癌症治疗，处于临床I/II期，是目前研发进展最快的抗LAG-3抗体。最新的数据（2017.9公布）显示BMS-986016联合PD-1抗体，有效率比PD-1抗体单独疗效提高了3倍（由5%提高到18%）。这些数据表明在PD-1信号抑制的基础上联用T细胞受体其它通路抑制剂，比如抗LAG-3抗体能显著增强PD-1抗体的疗效。可以预见抗LAG-3抗体，特别是联合PD-1抗体，将在肿瘤的免疫治疗方面发挥重要作用，为巨大的未满足的肿瘤患者临床需求提供新的治疗选择。本领域已有的抗LAG-3抗体类型有限，需要更好的抗LAG-3抗体，人源化抗体，包括结合活性更好，结合特点差异化，和PD-1联合更好的激活T细胞的抗LAG-3抗体，以期能在临床上看到更好的临床药效或者满足更多的不同病人的临床需求。本专利技术通过大量的优化创新筛选，得到优选抗人LAG-3的抗体，包括具有共同特点的一类至少两个抗体，这类抗体轻、重链同源性高，且具有共同的结合活性好的特点。本专利技术提供了一类结合人LAG-3的鼠源抗体，人源化抗体等。它们和人LAG-3结合活性更好，和非人灵长类LAG-3结合具有不同于人LAG-3的结合特点或位点，单独或联合PD-1抗体均显示很好的激活人T细胞活性功能，和PD-1抗体联合提高PD-1抗体激活T细胞活性。本专利技术抗体这些特点为其单独或者联合PD-1抗体在临床上提高PD-1抗体疗效，克服PD-1抗体治疗产生的耐药性等提供了更好的选择和可能。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中，针对LAG-3抗体临床治疗可选择的抗体数量少，提供一种结合活性更好，结合特性不同的抗人LAG-3抗体，这类抗体单独或者联合PD-1抗体激活人T细胞活性好，为肿瘤治疗提供了不同的选择和更好的药效。还可通过联合PD-1抗体，提高PD-1抗体单独的疗效，克服PD-1抗体产生的耐药性等。专利技术人通过用LAG-3抗原免疫小鼠，优化免疫方法，创造性地建立抗原位点特异筛选方法，包括设立不同的ELISA筛选，针对LAG-3不同的胞外区域，包括完整的LAG-3胞外区（ECD），和部分胞外区域1、2(Domain1and2,简称D12)，ECD以及D12的单体和二聚体形式的抗原ELISA筛选，得到一类至少两株分泌抗人LAG-3单克隆抗体的杂交瘤克隆。从中提取了抗体序列，所得两株抗体序列高度同源，结合活性相似。创造性地人源化方法对所发现的鼠源抗LAG-3抗体进行人源化设计，包括在众多的可能影响活性的氨基酸位点上，设计不同回复突变组合，进行高效筛选，得到了一类人源化抗人LAG-3抗体，其结合活性好，和非人灵长类LAG-3不同的结合特性，反应了该抗体不同的结合位点特点，单独或者和PD-1抗体联合能有效地激活人T细胞，提高单独PD-1抗体激活人T细胞的活性。本专利技术所述新的抗人LAG-3抗体这些特点使其单独和联合PD-1抗体可能提高PD-1抗体临床疗效，克服PD-1抗体临床治疗耐受等。本专利技术主要通过以下技术手段解决上述技术问题：本专利技术提供一种能和人淋巴细胞活化基因-3(hLAG-3)蛋白特异结合的抗体分子或其结合片段，其包含至少1个选自以下抗体互补性决定区（CDR）序列或其突变序列：对于轻链可变区(VL)：SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24所示的VLCDR1氨基酸序列；SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够和人LAG‑3 (hLAG‑3)蛋白特异性结合的抗体分子或其结合片段，其包含轻链可变区(VL)和/或重链可变区(VH)，在所述VL和/或VH中，所述LAG‑3抗体分子或其结合片段相应地包含至少1个选自以下抗体互补性决定区（CDR）序列或其突变序列：对于轻链可变区(VL)：SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 24所示的VLCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 25所示的VLCDR2氨基酸序列；SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 26所示的VLCDR3氨基酸序列；对于重链可变区(VH)：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21或SEQ ID NO: 27所示的VHCDR1氨基酸序列；SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 22或SEQ ID NO: 28所示的VHCDR2氨基酸序列；SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 29或SEQ ID NO: 30所示的VHCDR3氨基酸序列。...

【技术特征摘要】
1.一种能够和人LAG-3(hLAG-3)蛋白特异性结合的抗体分子或其结合片段，其包含轻链可变区(VL)和/或重链可变区(VH)，在所述VL和/或VH中，所述LAG-3抗体分子或其结合片段相应地包含至少1个选自以下抗体互补性决定区（CDR）序列或其突变序列：对于轻链可变区(VL)：SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:23或SEQIDNO:24所示的VLCDR1氨基酸序列；SEQIDNO:11或SEQIDNO:25所示的VLCDR2氨基酸序列；SEQIDNO:12或SEQIDNO:26所示的VLCDR3氨基酸序列；对于重链可变区(VH)：SEQIDNO:13、SEQIDNO:14、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:21或SEQIDNO:27所示的VHCDR1氨基酸序列；SEQIDNO:15、SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:22或SEQIDNO:28所示的VHCDR2氨基酸序列；SEQIDNO:17、SEQIDNO:29或SEQIDNO:30所示的VHCDR3氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的LAG-3抗体分子或其结合片段，其包含轻链可变区(VL)，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VL包含SEQIDNO:23所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:25所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:26所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VL包含SEQIDNO:24所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:25所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:26所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和/或其包含重链可变区(VH)，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:19所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:19所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:20所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:22所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:21所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:22所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:27所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:28所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:29所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或所述VH包含SEQIDNO:27所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:28所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:30所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列。3.根据权利要求1或2所述的LAG-3抗体分子或其结合片段，其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:15所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:13所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:19所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:9所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:12所示的VLCDR3氨基酸序列或其突变序列；和包含VH，所述VH包含SEQIDNO:14所示的VHCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:19所示的VHCDR2氨基酸序列或其突变序列和SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列或其突变序列；或其包含VL，所述VL包含SEQIDNO:10所示的VLCDR1氨基酸序列或其突变序列、SEQIDNO:11所示的VLCDR2氨基酸序列或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳建，
申请(专利权)人：上海健信生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31