一种TEM8抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及属于基因工程抗体技术领域，具体的涉及一种TEM8抗体及其应用。本发明专利技术描述了的特异性结合TEM8的分离的单克隆抗体及其抗原结合部分，包括分离的单克隆抗体及其药物偶联物。本发明专利技术提供的TEM8单克隆抗体，与TEM8重组蛋白和TEM8过表达细胞中的TEM8抗原都具有极强的结合特异性和敏感性，可用于制备治疗TEM8相关性疾病的药物，并可用于进行TEM8相关诊断与检测。在一些实施方式中，所制备的TEM8抗体药物偶联物，可提供疗效更强的用于治疗癌症的药物组合物，具有很好的治疗疾病的作用。

A TEM8 Antibody and Its Application

【技术实现步骤摘要】
一种TEM8抗体及其应用
本专利技术属于基因工程抗体
，具体的涉及一种TEM8抗体及其应用。
技术介绍
肿瘤内皮标记物(TEM8)是肿瘤内皮标记物(tumorendothelialmarkers，TEMs)中的一种，是2000年{BradSt.Croix}等利用基因表达系列分析技术对正常内皮细胞及癌症内皮细胞的基因进行研究中发现的。TEM8由564个氨基酸残基组成的具有完整跨膜螺旋的I型跨膜蛋白，胞外有大约300个氨基酸，包括一个约200个氨基酸组成的vWA结构域和近膜的一个功能未知的Ig样结构域。后来研究确定了TEM8的三个剪接变体V1，V2和V3。该变体分别由564，368和333个氨基酸残基组成。其中V1和V2是具有单个跨膜螺旋的I型整合膜蛋白。由于拼接的差异性，V2与V1在前364个氨基酸序列相同，但V2的最后4个残基是唯一的。V3的胞外部分与V1和V2的胞外部分相同，但其在羧基末端拥有13个独特的残基。{KennethA.Bradley}等人使用cDNA文库进行TEM8表达，确定V2变体为炭疽毒素受体，除V3外，V1也是一种功能炭疽毒素受体。TEM8不仅是功能炭疽毒素受体，而且TEM8胞质结构域可以将细胞外基质分子连接到肌动蛋白细胞骨架从而调整其在胞外的结构，TEM8还可以与胶原蛋白I和胶原蛋白VI等胶原蛋白结合，从而促进内皮细胞的迁移。在研究肿瘤血管形成相关基因的表达时，发现TEM8在人的各种肿瘤血管细胞表面或者肿瘤细胞表面的表达量均有上调。另外TEM8还具有高度保守性，小鼠与人类的TEM8的氨基酸存在98％的同源性，且在小鼠肿瘤血管中也存在TEM8过表达的现象。在敲除TEM8的小鼠模型中发现，小鼠发育性的血管生成未受影响而肿瘤血管生成却受到了明显抑制。起初发现TEM8表达于结肠癌内皮细胞中，而在周围正常组织中表达微乎其微，随后在结肠癌组织的血管中也检测到TEM8蛋白，后来TEM8还被发现在许多不同类型的人类肿瘤(包括膀胱癌、结肠癌、食管癌和肺癌等)的血管内皮细胞中表达增加，而在正常组织的血管中没有表达或表达很少。研究还表明TEM8促进肿瘤血管生成而不参与生理性血管生成。基于早期的机理研究，TEM8开始被应用于抑制肿瘤药物的研发中。研究表明，可溶TEM8-Fc融合蛋白对多种人类异种移植肿瘤具有有效的杀伤活性(Hai-FengDuanetal.JNatlCancerInst2007；99:1551-5)。而针对TEM8的DNA疫苗已经被证明减缓了体内肿瘤的生长。另外，TEM8单克隆抗体一直是TEM8靶点抑制肿瘤药物研究的重点。在TEM8抗体的研究过程中发现无论是市售的TEM8鼠源性抗体还是MiYoungYang等研究出的SB系列的抗体，都不能识别TEM8表达在细胞表面的某些形态，这是由于微丝骨架可以调节细胞膜表面的TEM8结构形态。{AmitChaudhary}等人利用噬菌体展示技术(AmitChaudharyetal.CancerCell21,212–226.2012)，得到了5个独立的Fab片段，分别命名为L1、L2、L3、L5和ID2，这5个抗体均能识别TEM8的各种形态。考虑到Fab在体内半衰期短的问题，于是将L2的Fab片段连接到恒定区段构成完整lgG抗体。在对L2的研究过程中发现L2能够在不对生理血管生成造成影响的情况下抑制肿瘤生长，并且对于包括黑素瘤，结肠癌和肺癌等癌症均有抑制效果，对其他组织并无明显毒性。另外，L2还被开发成CAR-T药物，并在动物模型实验中显示出很强的抑制肿瘤生长的活性。以上的研究表明TEM8可以成为治疗肿瘤的新靶点。虽然对TEM8的研究已经十多年，也取得了一定的研究成果，但是想要将这些成果转化为生产上市的药品还需要经过很多努力。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述
技术介绍
中的技术问题，提供一种能够转化为生产上市的TEM8及其应用。11.本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分与TEM8特异性结合，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包括第一组CDR区、第二组CDR区或第三组CDR区中的一组；其中，所述第一组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:3所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列；其中，所述第二组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:7所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列；其中，所述第三组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:8所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列。本专利技术的有益效果是：本专利技术的特异性结合TEM8的分离单克隆抗体或其抗原展现出下述性质：1.与重组人TEM8蛋白结合；2.与TEM8过表达细胞特异性结合；3.刺激TEM8过表达细胞对抗体的内吞；4.抑制裸小鼠移植瘤的生长。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分还包括第一重链可变区和第一轻链可变区；其中，所述第一重链可变区来自氨基酸序列如SEQIDNO:9的重链可变区或氨基酸序列如SEQIDNO:11的重链可变区或氨基酸序列如SEQIDNO:12的重链可变区中的一种；所述第一轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO:10的轻链可变区。进一步，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分还包括第二重链可变区和第二轻链可变区；所述第二重链可变区与所述第一重链可变区和所述第二轻链可变区与所述第一轻链可变区均具有90％～100％的整体序列同一性。采用上述进一步方案的有益效果是，具有90～100％的整体氨基酸序列同一性是指指序列同一性为91％或92％或93％或94％或95％或96％或97％或98％或99％或100％。进一步，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分还包括一条重链和一条轻链，所述重链的氨基酸序列如SEQIDNO：19所示，所述轻链的氨基酸序列如SEQIDNO：18所示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分与TEM8特异性结合，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包括第一组CDR区、第二组CDR区或第三组CDR区中的一组；其中，所述第一组CDR区为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的VH互补决定区1(VH CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的VH互补决定区2(VH CDR2)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示的VH互补决定区3(VH CDR3)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VL互补决定区1(VL CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VL互补决定区2(VL CDR2)序列和氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的VL互补决定区3(VL CDR3)序列；其中，所述第二组CDR区为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的VH互补决定区1(VH CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的VH互补决定区2(VH CDR2)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示的VH互补决定区3(VH CDR3)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VL互补决定区1(VL CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VL互补决定区2(VL CDR2)序列和氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的VL互补决定区3(VL CDR3)序列；其中，所述第三组CDR区为氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的VH互补决定区1(VH CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的VH互补决定区2(VH CDR2)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示的VH互补决定区3(VH CDR3)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示的VL互补决定区1(VL CDR1)序列、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示的VL互补决定区2(VL CDR2)序列和氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示的VL互补决定区3(VL CDR3)序列。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分与TEM8特异性结合，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包括第一组CDR区、第二组CDR区或第三组CDR区中的一组；其中，所述第一组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:3所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列；其中，所述第二组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:7所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列；其中，所述第三组CDR区为氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的VH互补决定区1(VHCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:2所示的VH互补决定区2(VHCDR2)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:8所示的VH互补决定区3(VHCDR3)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:4所示的VL互补决定区1(VLCDR1)序列、氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的VL互补决定区2(VLCDR2)序列和氨基酸序列如SEQIDNO:6所示的VL互补决定区3(VLCDR3)序列。2.根据权利要去1所述的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其特征在于，所述分离的单克隆抗体或其抗原结合部分还包括第一重链可变区和...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏云鹏，庄伟亮，裴丽丽，陆苗苗，
申请(专利权)人：江苏诺迈博生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32