一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及到蛋白纯化技术，具体公开了一种无糖基化抗PD‑1单克隆抗体的纯化方法。亲和层析过程中，引入盐成分，能够显著地改善亲和层析性能，降低蛋白浊度。洗涤和洗脱过程引入甘氨酸‑盐酸缓冲液，可有效减少聚体产生，增加蛋白稳定性。在病毒灭活过程中，加入了糖类物质，起到保护作用从而减少聚体形成，使抗体在低pH灭活下聚体增加变缓。本发明专利技术很好的减少了无糖基化抗pd‑1单克隆抗体纯化过程中聚体的形成，保护了蛋白的稳定性。

Purification of a glycosylated anti-PD-1 monoclonal antibody

【技术实现步骤摘要】
一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法
本专利技术属于医药
，涉及到单克隆抗体纯化技术，具体涉及到一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法。
技术介绍
PD-1是一种免疫抑制剂性受体，主要在激活的T细胞及B细胞中，功能是抑制细胞激活，在免疫应答中发挥负调控作用，PD-1的配体PDL-1与PDL-2高表达于肿瘤微环境中，导致肿瘤微环境PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制，无法杀伤肿瘤细胞；同时PD-1的信号传导可以抑制B细胞增殖、分化Ig类型转换，在建立和维护外周自身耐受中起重要作用。抗PD-1单抗是针对PD-1的一种抗体蛋白，该抗体能特异性地与PD-1结合，阻断PDL-1与PD-1相结合部分，恢复T细胞功能，对肿瘤生长具有显著抑制作用，在治疗肿瘤方面具有很好的靶向潜能。针对这一优势，开发研制了一种重组人源化抗PD-1单克隆抗体，其上糖基化修饰被敲除。过去多年的抗体研究都强调糖基化对抗体功能的重要性，但带糖基化的抗体免疫原性和蛋白折叠凳也会存在很多不确定性，增加了工艺开发的难度。目前部分研究者发现无糖基化后的抗体开发比较稳定，均一性提高，且能降低抗体在体内引起的炎症及细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无糖基化抗PD‑1单克隆抗体的纯化方法，包括亲和层析和病毒灭活步骤，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)对细胞培养液上清进行亲和层析：平衡、上样、洗涤、洗脱过程；(2)收集上述洗脱流出液加入糖类物质，搅拌至完全溶解；(3)将步骤(2)所得样品调pH进行低pH病毒灭活。

【技术特征摘要】
1.一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，包括亲和层析和病毒灭活步骤，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)对细胞培养液上清进行亲和层析：平衡、上样、洗涤、洗脱过程；(2)收集上述洗脱流出液加入糖类物质，搅拌至完全溶解；(3)将步骤(2)所得样品调pH进行低pH病毒灭活。2.根据权利要求1所述的一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述平衡过程为缓冲液平衡，所述的缓冲液为pH7.0～7.4含盐的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，步骤(1)中所述洗涤过程包括三步，首先用平衡缓冲液复平衡，然后用pH8.0～8.5含盐的Tris-盐酸缓冲液进行洗涤，再用pH4.5～5.5甘氨酸-盐酸缓冲液进行洗涤。4.根据权利要求1所述的一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，步骤(1)洗脱过程为缓冲液洗脱，所述的缓冲液为pH2.7～3.1甘氨酸-盐酸缓冲液。5.根据权利要求2-3任一项所述的一种无糖基化抗PD-1单克隆抗体的纯化方法，其特征在于，所述的盐为氯化钠、氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，赵丽丽，刘增田，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37