一种分离的LAG-3结合蛋白及其应用制造技术

本申请涉及一种分离的LAG‑3结合蛋白及其用途，其能够以约1×10

【技术实现步骤摘要】
一种分离的LAG-3结合蛋白及其应用
本申请涉及生物医药领域，具体的涉及一种分离的LAG-3结合蛋白及其应用。
技术介绍
淋巴细胞活化基因-3(LAG-3，CD223)是一种I型跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族，在活化的CD4+和CD8+T细胞、B细胞、NK细胞、浆细胞样树突状细胞和调节性T细胞的表面上表达。LAG-3能与II类主要组织相容性复合物(MHCII)结合，向表达LAG-3的细胞递送负面信号并下调抗原依赖性的CD4+和CD8T+细胞应答。LAG-3具有负向调节T细胞的增殖、产生细胞因子和裂解靶细胞的能力。此外，靶向LAG-3及一种或多种其他抗原的制剂也被用于治疗多种疾病。然而，许多单独施用时有活性的抗体在被制备为双功能或多功能分子后，活性减弱甚至消失。因此，本领域亟需开发新的LAG-3结合蛋白，特别是适合用于制备双功能或多功能分子的LAG-3结合蛋白。
技术实现思路
本申请提供了一种分离的LAG-3结合蛋白，其能以1x10-9M或更低的KD值结合人LAG-3蛋白，阻断LAG-3蛋白与Daudi细胞的结合，刺激免疫细胞分泌IL-2，抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。本申请的LAG-3结合蛋白还适合被用于制备双特异性或多特异性的抗原结合蛋白。一方面，本申请提供了一种分离的LAG-3结合蛋白，其包含抗体轻链可变区VL和抗体重链可变区VH，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述LCDR1包含SEQIDNO：25所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQIDNO：26所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQIDNO：27所示的氨基酸序列，所述HCDR1包含SEQIDNO：31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQIDNO：29所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQIDNO：30所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：1)能够以1x10-9M或更低的KD值结合人LAG-3蛋白，其中所述KD值通过Biacore方法测定；2)以20nM或更高的EC50值结合食蟹猴LAG-3蛋白；3)基本上不结合小鼠LAG-3蛋白；4)能够阻断LAG-3蛋白与Daudi细胞的结合；5)能够刺激免疫细胞分泌IL-2，所述IL-2的分泌在ELISA测定中测得；6)能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白包括抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述抗原结合片段包括Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VL包括框架区L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR1的C末端与所述LCDR1的N末端直接或间接相连，且所述L-FR1包含SEQIDNO：66所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR1包含SEQIDNO：41、56中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR2位于所述LCDR1与所述LCDR2之间，且所述L-FR2包含SEQIDNO：67所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR2包含SEQIDNO：42、57-58中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR3位于所述LCDR2与所述LCDR3之间，且所述L-FR3包含SEQIDNO：68所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR3包含SEQIDNO：43、59-64中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR4的N末端与所述LCDR3的C末端相连，且所述L-FR4包含SEQIDNO：69所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述L-FR4包含SEQIDNO：44、65中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VL包含SEQIDNO：91所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VL包含SEQIDNO：7、80-86中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VH包括框架区H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR1的C末端与所述HCDR1的N末端直接或间接相连，且所述H-FR1包含SEQIDNO：70所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR1包含SEQIDNO：45、49中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR2位于所述HCDR1与所述HCDR2之间，且所述H-FR2包含SEQIDNO：71所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR2包含SEQIDNO：46、50-51中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR3位于所述HCDR2与所述HCDR3之间，且所述H-FR3包含SEQIDNO：72所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR3包含SEQIDNO：47、52-54中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR4的N末端与所述HCDR3的C末端相连，且所述H-FR4包含SEQIDNO：73所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述H-FR4包含SEQIDNO：48、55中任一项所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VH包含SEQIDNO：92所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述的分离的LAG-3结合蛋白中，所述VH包含SEQIDNO：8、87-90中任一项所示的氨基酸序列。另一方面，本申请提供了分离的一种或多种核酸分子，其编码本申请所述的分离的LAG-3结合蛋白。另一方面，本申请提供了一种载体，其包含根据本申请所述的核酸分子。另一方面，本申请提供了一种细胞，其包含根据本申请所述的核酸分子或根据本申请所述的载体。另一方面，本申请提供了一种制备本申请所述的分离的LAG-3结合蛋白的方法，所述方法包括在使得本申请所述的分离的LAG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的LAG-3结合蛋白，其包含抗体轻链可变区VL和抗体重链可变区VH，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述LCDR1包含SEQ ID NO：25所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQID NO：27所示的氨基酸序列，所述HCDR1包含SEQ ID NO：31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQ ID NO：29所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQ ID NO：30所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.分离的LAG-3结合蛋白，其包含抗体轻链可变区VL和抗体重链可变区VH，所述VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，所述VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中所述LCDR1包含SEQIDNO：25所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含SEQIDNO：26所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含SEQIDNO：27所示的氨基酸序列，所述HCDR1包含SEQIDNO：31所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含SEQIDNO：29所示的氨基酸序列，且所述HCDR3包含SEQIDNO：30所示的氨基酸序列。


2.根据权利要求1所述的分离的LAG-3结合蛋白，其具有下述性质中的一种或多种：
1)能够以1x10-9M或更低的KD值结合人LAG-3蛋白，其中所述KD值通过Biacore方法测定；
2)以20nM或更高的EC50值结合食蟹猴LAG-3蛋白；
3)基本上不结合小鼠LAG-3蛋白；
4)能够阻断LAG-3蛋白与Daudi细胞的结合；
5)能够刺激免疫细胞分泌IL2，所述IL2的分泌在ELISA测定中测得；
6)能够抑制肿瘤生长和/或肿瘤细胞增殖。


3.根据权利要求1-2中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白，其中所述VL包含SEQIDNO：91所示的氨基酸序列。


4.根据权利要求3所述的分离的LAG-3结合蛋白，其中所述VL包含SEQIDNO：7、80-86中任一项所示的氨基酸序列。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白，其中所述VH包含SEQIDNO：92所示的氨基酸序列。


6.根据权利要求5所述的分离的LAG-3结合蛋白，其中所述VH包含SEQIDNO：8、87-90中任一项所示的氨基酸序列。


7.分离的一种或多种核酸分子，其编码权利要求1-6中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白。


8.载体，其包含根据权利要求7所述的核酸分子。


9.细胞，其包含根据权利要求7所述的核酸分子或根据权利要求8所述的载体。


10.制备权利要求1-6中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白的方法，所述方法包括在使得权利要求1-6中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白表达的条件下，培养根据权利要求9所述的细胞。


11.药物组合物，其包含权利要求1-6中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白、权利要求7所述的核酸分子、权利要求8所述的载体和/或权利要求9所述的细胞，以及任选地药学上可接受的佐剂。


12.权利要求1-6中任一项所述的分离的LAG-3结合蛋白、权利要求7所述的核酸分子、权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳建，
申请(专利权)人：上海健信生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31