针对细胞内抗原的单域抗体制造技术

本发明专利技术提供了在不使用外源靶向序列或化学组合物的情况下治疗病症或疾病的组合物和方法。本发明专利技术涉及针对导致病症或疾病的细胞内组分的单域抗体(sdAb)，包含所述sdAb的蛋白质和多肽。本发明专利技术还包括编码sdAb的核酸、蛋白质和多肽、和包含sdAb的组合物。本发明专利技术包括所述组合物、sdAb和编码sdAb的核酸在预防、治疗或诊断目的上的应用。

【技术实现步骤摘要】
针对细胞内抗原的单域抗体本申请是分案申请，其原申请的国际申请号为PCT/US2015/057223，国际申请日为2015年10月23日，中国国家申请号为201580056968.9，进入中国国家阶段的进入日为2017年04月20日，专利技术名称为“针对细胞内抗原的单域抗体”。相关申请的交叉引用本国际专利申请要求于2014年10月23日提交的美国临时专利申请62/067,908号，于2015年4月16日提交的美国临时专利申请62/148,656号，于2015年7月2日提交的美国临时专利申请62/188,353号，及于2015年8月27日提交的美国临时专利申请62/210,795号的权益，将其内容通过引用整体并入本文。序列表本申请与电子格式的序列表一起提交。该序列表以题为“Sequence_Listing_STP25.txt”的文件提供，其在2015年9月30日创建，最后修改时间为2015年10月22日，大小为83,000字节。将电子格式的序列表的信息以其整体通过引用并入本文。
技术介绍
单域抗体(sdAb)作为单抗原结合蛋白或作为较大蛋白质或多肽中的抗原结合域的应用与应用常规抗体或抗体片段相比提供了许多显著的优点。sdAb的优点包括：仅需要单个域就可以高亲和性和高选择性结合抗原；sdAb可以从单个基因表达且不需要翻译后修饰；sdAb对热、pH、蛋白酶和其他变性剂或条件是高度稳定的；sdAb的制备成本低；并且sdAb可以接近常规抗体不可及的靶标和表位。有许多疾病或病症，诸如癌症，是由诸如核苷酸和蛋白质等异常细胞内或跨膜组分引起的。可利用异常组分的消除来预防或治疗疾病或病症。有许多可用于治疗的药物化合物，但是这些化合物可能无效、不可递送或对未受影响的细胞有毒性。其他治疗包括使用含有外源靶向序列的治疗性蛋白质或试剂，这样治疗剂可被细胞膜中的受体识别，使得治疗剂能够穿过细胞膜并进入细胞。一旦治疗剂在细胞内，治疗剂可以与靶标组分相互作用以治疗疾病。然而，外源靶向序列的应用可限制治疗剂所靶向的细胞类型，并且增加了制造治疗剂的成本。由于前述原因，需要不依赖于外源靶向序列或化学组合物来进入细胞的治疗或预防疾病的组合物和方法，并且其在身体内仅有效靶向受影响的细胞。本专利技术涉及单域抗体(sdAb)，包含该sdAb的蛋白质和多肽。sdAb针对引起病症或疾病的细胞内组分。本专利技术还包括编码sdAb、蛋白质和多肽的核酸、和包含sdAb的组合物。本专利技术包括组合物、sdAb、蛋白质或多肽在预防、治疗或诊断目的上的应用。本专利技术还包括针对本专利技术的sdAb的单克隆抗体的应用。
技术实现思路
本专利技术的一个实施方式是针对细胞内组分的单域抗体(sdAb)。所述细胞内组分可以例如是蛋白质、核酸、脂质、糖、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6、TNF-α、和KRAS。在另一个实施方式中，本专利技术涉及抗STAT3sdAb。可选地，该抗STAT3sdAb包含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。在另一个实施方式中，本专利技术涉及包含编码抗STATsdAb的氨基酸序列的分离的多肽，例如，SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示的多肽。在另一个实施方式中，本专利技术涉及宿主细胞，所述宿主细胞表达sdAb的氨基酸序列，例如，SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。本专利技术的一个实施方式是包含sdAb或多肽，和药学上可接受的载体的药物组合物。可选地，所述sdAb包括含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示氨基酸序列的抗STAT3sdAb，且所述多肽包括含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示氨基酸序列的分离的多肽。本专利技术另一个实施方式是诊断受试者中由STAT3介导的病症的方法，所述方法包括以下步骤：a)使生物样品与sdAb或多肽接触；b)测定所述生物样品中STAT3的量；和c)将步骤(b)中测定的量与标准品比较，其量的差异指示所述病症的存在。本专利技术的另一个实施方式是预防或治疗由STAT3介导的疾病或病症，或者预防所述疾病的复发，或者用于治疗癌症，或者由异常细胞增殖引起的疾病的方法，其包括对有需要的受试者施用抗STAT3sdAb或多肽。可选地，所述sdAb包括含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示氨基酸序列的抗STAT3sdAb，且所述多肽包括含SEQIDNO:3或SEQIDNO:4所示氨基酸序列的分离的多肽。本专利技术的一个实施方式是抗TNF-αsdAb。可选地，所述抗TNF-αsdAb包括SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。本专利技术还包括含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示氨基酸序列的分离的多肽。本专利技术的另一个实施方式是表达SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示氨基酸序列的宿主细胞。在另一个实施方式中，本专利技术还是含sdAb或多肽、和药学上可接受的载体的药物组合物。可选地，所述sdAb包括含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示氨基酸序列的抗TNF-αsdAb，且所述多肽包括含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示氨基酸序列的分离的多肽。本专利技术的另一个实施方式是诊断受试者中由TNF-α介导的病症的方法，所述方法包括以下步骤：a)使生物样品与sdAb或多肽接触；b)测定所述生物样品中TNF-α的量；和c)将步骤(b)中测定的量与标准品比较，其量的差异指示所述病症的存在。在一个实施方式中，本专利技术描述了预防或治疗由TNF-α介导的疾病或病症，或者所述疾病或病症的复发，或者用于治疗癌症或由异常细胞增殖引起的疾病的方法，其包括对有需要的哺乳动物施用抗TNF-αsdAb、或多肽。可选地，所述抗TNF-αsdAb包括SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示的氨基酸序列，且所述多肽包括分离的多肽，所述分离的多肽包含SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。本专利技术的一个实施方式是抗KRASsdAb。可选地，所述抗KRASsdAb包括SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。一方面，本专利技术包括分离的多肽，其中，所述分离的多肽包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。另一方面，本专利技术包括表达SEQIDNO:2所示氨基酸序列的宿主细胞。本专利技术的另一个实施方式是一种药物组合物，其包括sdAb或多肽，和药学上可接受的载体。可选地，所述sdAb包括含SEQIDNO:2所示氨基酸序列的抗KRASsdAb，且所述多肽包括含SEQIDNO:2所示氨基酸序列的分离的多肽。本专利技术的另一个实施方式是诊断受试者中由KRAS介导的病症的方法，所述方法包括以下步骤：a)使生物样品与sdAb或多肽接触；b)测定所述生物样品中KRAS的量；和c)将步骤(b)中测定的量与标准品比较，其量的差异指示所述病症的存在。可选地，所述sdAb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗KRAS的单域抗体(sdAb)，其中，所述抗KRAS的单域抗体包括抗KRAS(G12D)的单域抗体，所述抗KRAS(G12D)的单域抗体包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
20141023 US 62/067,908;20150416 US 62/148,656;20151.一种抗KRAS的单域抗体(sdAb)，其中，所述抗KRAS的单域抗体包括抗KRAS(G12D)的单域抗体，所述抗KRAS(G12D)的单域抗体包含SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。


2.一种抗TNF-α的单域抗体(sdAb)，其中，所述抗TNF-α的单域抗体包含SEQIDNO:45所示的氨基酸序列。


3.一种抗STAT3的单域抗体(sdAb)，其中，所述抗STAT3的单域抗体包含SEQIDNO:4所示的氨基酸序列。


4.如权利要求1至3中任一项所述的单域抗体，其中，所述单域抗体作为药物应用。


5.如权利要求4所述应用的单域抗体，其中，受试者是哺乳动物，优选人类。


6.如权利要求4或5所述应用的单域抗体，其中，所述单域抗体与一种或多种化合物组合施用，优选其中所述一种或多种化合物是转录抑制剂。


7.如权利要求4至6中任一项所述应用的单域抗体，其中，所述药物用于静脉内施用、肌内施用、口服施用、直肠施用、肠内施用、胃肠外施用、眼内施用、皮下施用、透皮施用、作为滴眼剂施用、作为鼻喷雾剂施用、通过吸入或雾化施用、局部施用，以及作为可植入药物施用。


8.一种分离的多肽，所述分离的多肽包含如下所示的氨基酸序列：
(i)SEQIDNO:4；
(ii)SEQIDNO:45；或
(iii)SEQIDNO:2。


9.一种测量来自受试者的样品中的权利要求1至3中任一项所述单域抗体的水平的方法，所述方法包括以下步骤：
a)...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·辛格，
申请(专利权)人：辛格生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US