一种抗IL-17RA单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗体工程技术领域，具体提供了一种抗IL‑17RA单克隆抗体，单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区。本发明专利技术提供的抗IL‑17RA单克隆抗体具有较强的亲和力和良好的生物活性，能够与IL‑17RA抗原特异性结合，阻断IL‑17A与IL‑17RA的结合，拮抗和阻断IL‑17/IL‑17R信号通路，是具有巨大潜力的自身免疫性疾病治疗药物，有效缓解自身免疫性疾病的症状，阻止疾病的进展，自身免疫性疾病包括但不局限于下列：银屑病、类风湿性关节炎、强直性脊柱炎或硬皮病等。

A monoclonal antibody against il-17ra and its application

【技术实现步骤摘要】
一种抗IL-17RA单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及抗体工程
，特别涉及一种抗IL-17RA单克隆抗体及其应用。
技术介绍
自身免疫性疾病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。许多疾病相继被列为自身免疫性疾病，例如银屑病、类风湿关节炎、强直性脊柱炎、硬皮病等。其中，银屑病(Psoriasis)又称牛皮癣，其特点是皮肤出现大小不等、境界清楚的红斑鳞屑性斑块，上覆大量干燥的银白色鳞屑。银屑病皮肤的组织学特征是表皮角质化细胞过度增殖、血管增生以及树突状细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、T细胞浸润，银屑病的发病机制涉及复杂的炎症反应和免疫系统。我国患病率约0.47％，据此推算，我国目前约有600多万银屑病患者。银屑病一旦发病，常常罹患终生，反复发作，大多数患者表现为复发与缓解交替出现的过程。类风湿关节炎(Rheumatoidarthritis，RA)是一种以慢性侵蚀性关节炎为特征的全身性自身免疫病，主要病变特点为滑膜炎，以及由此造成的关节软骨和骨质破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。全世界的发病率约为0.5～1.0％，我国发病率在0.3～0.4％，通常女性发病率是男性的3倍。强直性脊柱炎(AnkylosingSpondylitis,AS)是以骶髂关节和脊柱附着点、中轴骨骼炎症为主要症状，并以椎间盘纤维环及其附近结缔组织纤维化和骨化及关节强直为病变特点的慢性炎性疾病，属风湿病范畴，病因不明。多与感染、遗传因素、环境因素(如长期处于冷、潮、湿环境)等相关。随着生物抗体药物的不断深入研究，发现白细胞介素-17(IL-17)是由辅助性T细胞17(Th17细胞)分泌的特征性细胞因子，其可以促进机体局部产生趋化因子、募集中性粒细胞、促进细胞增殖分化；但是，其还可与受体结合产生瀑布样炎症效应，造成组织损伤，其已被证实与多种自身免疫性疾病的发病过程密切相关。拮抗和阻断IL-17/IL-17R信号通路是具有巨大潜力的自身免疫性疾病治疗靶点，有望有效缓解自身免疫性疾病的症状，阻止疾病的进展。IL-17受体(IL-17R)家族由5个成员组成，分别为IL-17RA、IL-17RB、IL-17RC、IL-17RD和IL-17RE，所有成员都是Ⅰ型单次跨膜糖蛋白，具有保守结构基序，包括一个胞外的类纤维结合素Ⅲ结构域和一个胞内的结构域。人IL-17RA基因位于P22染色体上，人IL-17RA蛋白全长866个氨基酸，同时具有多个二硫键和糖基化位点，两个修饰位点，还含有胞外区，跨膜区和胞内区。IL-17RA是IL-17A的受体，也是IL-17F的受体，IL-17RA结合IL-17A的亲和力高于IL-17F。IL-17RA的激活会减少CXCL1、CXCL8/IL-8和IL-6等炎症因子的表达。IL-17RA表达广泛，尤其在造血组织中表达水平较高。IL-17RA包含两个独特的结构域，即靠近SEF1R的toll/白细胞介素1受体样环状结构域和C末端结构域，IL-17RA可以引起多种分子的产生和释放，如细胞因子(IL-6，G-CSF，GM-CSF)、趋化因子(CCL2、CCL7、CCL20、CXCL1、CXCL5)、抗微生物肽(β防御素-2、S100A7、S100A8、S100A9)、黏蛋白(黏蛋白5B和黏蛋白5AC)及基质金属蛋白酶(MMP1、MMP3、MMP9、MMP12和MMP13)等，也可与多个IL-17家族成员结合发挥生物学作用。目前，Brodalumab是安进/阿斯利康开发的一种选择性地结合人IL-17RA的单克隆抗体药物，在2016年-2017年间陆续获得日本PMDA、美国FDA和欧洲EMA批准上市。国内还没有相同靶点的药物上市，为满足国内市场的需求，急需研发亲和力更高、药效更优的抗IL-17RA单克隆抗体，来填补国内市场的空白。
技术实现思路
为了能够满足国内市场的需求，本专利技术利用噬菌体抗体库展示技术和高通量筛选的方法，筛选出亲和力更高，活性更好的抗IL-17RA单克隆抗体及其应用。本专利技术具体技术方案如下：本专利技术提供了一种抗IL-17RA单克隆抗体，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10；所述轻链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQIDNO:11、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13。进一步的，本专利技术提供的所述单克隆抗体选自以下任意一种：(mAb-1)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:1，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(mAb-2)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(mAb-3)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:3，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(mAb-4)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:4，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(mAb-5)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:5，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；(mAb-6)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:6，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12；(mAb-7)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12；(mAb-8)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:8，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13；(mAb-9)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:9，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13；(mAb-10)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:10，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13；(mAb-11)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13。进一步的，所述单克隆抗体还包括重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区为人的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4中的一种，所述轻链恒定区为人的Cκ；优选的，所述重链恒定区为人的IgG1。进一步的，所述单克隆抗体为全长抗体或抗体片段，所述抗体片段包括Fab、F(ab)2、Fv或ScFv中的一种或几种组合。本专利技术还提供了一种多肽或蛋白，所述多肽或所述蛋白包含所述的抗IL-17RA单克隆抗体。本专利技术还提供了一种多核苷酸序列或组合，所述多核苷酸序列或组合编码所述的抗IL-17RA单克隆抗体的氨基酸序列。本专利技术还提供了一种重组DNA表达载体，所述重组DNA表达载体包含所述的多核苷酸序列或组合。本专利技术还提供了一种转染重组DNA表达载体的宿主细胞，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗IL-17RA单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQID NO:9或SEQ ID NO:10；所述轻链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗IL-17RA单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6、SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10；所述轻链可变区的氨基酸序列选自以下序列中的一种：SEQIDNO:11、SEQIDNO:12或SEQIDNO:13。


2.如权利要求1所述的抗IL-17RA单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体选自以下任意一种：
(mAb-1)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:1，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(mAb-2)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(mAb-3)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:3，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(mAb-4)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:4，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(mAb-5)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:5，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:11；
(mAb-6)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:6，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12；
(mAb-7)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:12；
(mAb-8)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:8，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13；
(mAb-9)所述重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:9，所述轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:13；
(mAb-10)所述重链可变区的氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：白义，李晓敏，张稳，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11