【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药检测，特别涉及一种抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法。
技术介绍
1、胸腺基质淋巴细胞生成素tslp(thymic stromal lymphopoietin)是一种针对促炎性刺激(例如肺内过敏原、病毒及其他病原体)产生的上皮细胞因子，其主要由非造血细胞如成纤维细胞、上皮细胞和不同类型的基质或基质样细胞产生，它主要影响骨髓细胞、诱导单核细胞释放t细胞虏获趋化因子和增强髓样(cd11c+)树突状细胞成熟，具有增强胸腺细胞增生的作用。tslp驱动下游t2细胞因子的释放，包括il-4、il-5和il-13，导致炎症和哮喘症状。tslp也能激活参与非t2驱动炎症的多种类型细胞。因此，tslp在炎症级联反应的早期上游活动已被确定为在广泛哮喘患者群体中的一个潜在靶点，抗tslp单克隆抗体能够特异性地结合人tslp并阻断其与受体复合物的相互作用，由此可能阻止由tslp靶向的免疫细胞释放促炎性细胞因子，从而防止哮喘发作并改善哮喘控制。
2、抗体类产品在生产及存储过程中会产生聚集、降解及修饰，从而导致产品产生变体。等电点改变和空间电荷分布差异所导致的异质性为电荷异质性，如氧化脱酰胺、糖基化、c末端赖氨酸截除、n末端焦谷氨酸环化、二硫键修饰、序列变异等，这些异质性产生的异构体会直接影响抗体药物的生物学活性、药代动力学、免疫原性以及结构稳定性等，对药物在临床使用时的有效性、安全性和保质期都会有潜在影响，所以在抗tslp单克隆抗体研发过程中，需要通过纯化工艺的不断优化，降低电荷异构体含量，进而得到高质量的抗tsl
3、单克隆抗体中电荷异质性的检测是基于单克隆抗体所带电荷的差异进行的分离检测，通常情况下，与主峰(main peak)相比，等电点低于主峰的，被称为酸性异构体(acidic variants)，等电点高于主峰的，被称为碱性异构体(basic variants)。常用的检测方式有等电聚焦凝胶电泳(ief)、阳离子交换色谱(cex)、阴离子交换色谱、毛细管等电聚焦(cief)，以及成像毛细管等电聚焦(icief)等。其中，ief由于分离度低，手工操作要求高，逐渐被仪器方法所取代；在仪器方法中，cief和icief均需要专门的设备，成本相对较高，并且不能对电荷异构体进行收集，在电荷异构体组分鉴定中不具有优势；而阴阳离子色谱法采用的是用途极为广泛、普及度极高的高效液相色谱仪，但是针对该方法并没有专门针对本专利技术提供的抗tslp单克隆抗体的电荷异质性检测，而为了能够保证单克隆抗体产品质量的前提下，满足抗tslp单克隆抗体的批量生产，急需提供一种专门用于抗tslp单克隆抗体电荷异质性检测，且能够快速实现电荷异质体分离并能够准确计算电荷异质体含量的方法。
技术实现思路
1、为了指导纯化过程中对本专利技术提供的抗tslp单克隆抗体的收集，优化纯化条件，保证抗tslp单克隆抗体在生产工艺过程中的产品质量，本专利技术公开了一种针对抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法。
2、本专利技术具体技术方案如下：
3、本专利技术提供了一种抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，所述方法包括以下步骤：
4、s1、取抗tslp单克隆抗体作为检测样品；
5、s2、将所述检测样品配制成分析样品混合液；
6、s3、通过设置高效液相色谱仪的检测条件，并对所述分析样品混合液进行分离并分析后获得色谱图；
7、s4、基于所述色谱图，确定所述抗tslp单克隆抗体中电荷异质体的含量；
8、所述抗tslp单克隆抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括3个分别用hcdr1、hcdr2和hcdr3表示的重链互补决定区，所述轻链可变区包括3个分别用lcdr1、lcdr2和lcdr3表示的轻链互补决定区，所述重链互补决定区hcdr1的氨基酸序列如seq id no:1所示，所述重链互补决定区hcdr2的氨基酸序列如seq id no:2所示，所述重链互补决定区hcdr3的氨基酸序列如seq id no:3所示，所述轻链互补决定区lcdr1的氨基酸序列如seq id no:4所示，所述轻链互补决定区lcdr2的氨基酸序列如seq id no:5所示，所述轻链互补决定区lcdr3的氨基酸序列如seq id no:6所示。
9、本专利技术提供的检测方法专门用于检测抗tslp单克隆抗体电荷异质性，主要是通过设置高效液相色谱仪的检测条件，较为准确、方便、快捷的分离抗tslp单克隆抗体产品中的异构体和蛋白，分离度较高，且能够收集电荷异构体组分用于质谱表征，该方法耐用性强，能够适用于不同批次的抗tslp单克隆抗体产品的快速检测分离速度快，出峰时间显著缩短，提高了检测效率，精密度高，分离效果好，实用性强。
10、本专利技术提供的抗tslp的单克隆抗体能够用于治疗免疫性疾病或癌症，免疫性疾病包括但不限于哮喘、慢性阻塞性肺病、慢性嗜酸性粒细胞性肺炎、特发性肺纤维化、过敏性皮炎；哮喘包括但不限于重度哮喘、嗜酸细胞性或非嗜酸细胞性哮喘和低嗜酸细胞哮喘；癌症包括但不限于胰腺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、前列腺癌、肾癌、结直肠癌或乳腺癌。
11、进一步的，所述抗tslp单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述重链可变区包含如seqid no:17所示的氨基酸序列，所述轻链可变区包含如seq id no:18所示的氨基酸序列。
12、进一步的，所述鼠源抗体分子还包括选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的重链恒定区和鼠ck型的轻链恒定区；其中，所述igg1型的重链恒定区氨基酸序列如seqid no:26所示，所述igg2a型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:27所示，所述igg2b型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:28所示，所述igg3型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:29所示；所述鼠ck型的轻链恒定区氨基酸序列如seq id no:25所示。
13、进一步的，所述抗tslp单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：
14、ha-ⅰ：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:34所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:35所示；
15、ha-ⅱ：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:34所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:36所示；
16、ha-ⅲ：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:37所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:38所示；
17、ha-ⅳ：所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:37所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:36所示。
18、进一步的，所述人源化抗体分子本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述抗TSLP单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:17所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No:18所示。
3.如权利要求2所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述鼠源抗体分子还包括选自鼠的IgG1型、IgG2a型、IgG2b型或IgG3型的重链恒定区和鼠Ck型的轻链恒定区；其中，所述IgG1型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:26所示，所述IgG2a型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:27所示，所述IgG2b型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:28所示，所述IgG3型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:29所示；所述鼠Ck型的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:25所示。
4.如权利要求2所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述抗TSLP单克隆
5.如权利要求4所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述人源化抗体分子还包括人源抗体恒定区，所述人源抗体恒定区包括选自人的IgG1型、IgG2型或IgG4型的重链恒定区和人Ck型的轻链恒定区，所述IgG1型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:30所示，所述IgG2型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:31所示，所述IgG4型的重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:32所示，所述人Ck型的轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID No:33所示。
6.如权利要求1所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，步骤S3中，所述检测条件包括：采用弱阳离子色谱柱，设置梯度洗脱条件，并通过第一流动相和第二流动相进行梯度洗脱，所述第一流动相为磷酸盐缓冲液，所述第二流动相为磷酸盐缓冲液和氯化钠溶液的混合物。
7.如权利要求6所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述弱阳离子色谱柱为PropacWCX-10色谱柱。
8.如权利要求6所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述第一流动相和所述第二流动相的流速为0.5-1.2ml/min；所述弱阳离子色谱柱的柱温为20℃-60℃。
9.如权利要求8所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述第一流动相的pH值为5.5-6.5，所述第一流动相为浓度为10-20mM的磷酸盐缓冲液；所述第二流动相的pH值为5.2-5.8，所述第二流动相为浓度为10-20mM的磷酸盐缓冲液和浓度为0.2-1.0M的氯化钠溶液的混合物；
10.如权利要求1所述的抗TSLP单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件设置如下：
...【技术特征摘要】
1.一种抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述抗tslp单克隆抗体为鼠源抗体分子，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no:17所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no:18所示。
3.如权利要求2所述的抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述鼠源抗体分子还包括选自鼠的igg1型、igg2a型、igg2b型或igg3型的重链恒定区和鼠ck型的轻链恒定区；其中，所述igg1型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:26所示，所述igg2a型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:27所示，所述igg2b型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:28所示，所述igg3型的重链恒定区氨基酸序列如seq id no:29所示；所述鼠ck型的轻链恒定区氨基酸序列如seq id no:25所示。
4.如权利要求2所述的抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述抗tslp单克隆抗体为人源化抗体分子，所述人源化抗体分子选自以下任意一种：
5.如权利要求4所述的抗tslp单克隆抗体电荷异质性的检测方法，其特征在于，所述人源化抗体分子还包括人源抗体恒定区，所述人源抗体恒定区包括选自人的igg1型、igg2型或igg4型的重链恒定区和人ck型的轻链恒定区，所述igg1型的重链恒...
【专利技术属性】
技术研发人员：白义，宋萌萌，张利萍，
申请(专利权)人：北京东方百泰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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