用于猪的组合疫苗制造技术

本发明专利技术涉及猪用组合疫苗，其包含来自2型猪圆环病毒(PCV2)的非复制抗原和活的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的组合疫苗，所述组合疫苗配制成水包油乳液，并且具有角鲨烷和维生素E乙酸酯佐剂。发现这种组合疫苗在免疫学上对所有病原体：PCV2和PRRSV都有效。

Combined vaccine for pigs

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于猪的组合疫苗本专利技术涉及兽医疫苗学的领域，即用于猪的组合疫苗。具体地，本专利技术涉及组合疫苗，其包含来自2型猪圆环病毒的非复制抗原和活猪繁殖与呼吸综合征病毒。本专利技术还涉及包括所述组合疫苗的试剂盒，以及组合疫苗的方法和用途。当代集约化养猪业严重依赖兽医医疗产品来保持动物健康，并允许经济运作。除了优化饲料和农场管理系统之外，还定期使用各种治疗方法：药物(例如激素或抗生素)，以及针对细菌或病毒病原体的疫苗接种。从幼年开始影响猪的一些最突出的疾病由细菌引起：如猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae)和胞内劳森氏菌(Lawsoniaintracellularis)；并且由病毒引起，如2型猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒。猪肺炎支原体(Mhyo)是引起在全世界发生的猪慢性呼吸道疾病，(猪)地方流行性肺炎的主要原因。特别是年轻的仔猪易于受到这种高度传染性疾病的影响。这种细菌相对小，缺少细胞壁，并且属于柔膜菌纲(Mollicute)。这些细菌在宿主细胞上或宿主细胞中以寄生生活方式存活。源于Mhyo的肺部疾病大部分是免疫介导的病理，导致实变肺炎(consolidatedpneumonia)。细菌定植并损伤肺纤毛上皮，导致纤毛活性丧失。根据圈养条件以及环境压力，此疾病的问题最大的后果是，使得易受其它细菌和病毒病原体对猪呼吸系统的不同继发性感染。这产生了所谓的：猪呼吸道疾病综合征(PRDC)，显示出严重的肺部病变。除了动物的不适之外，由于生长速率和饲料转化率的表现降低以及兽医护理和抗生素使用的成本，地方流行性肺炎和PRDC对养猪业造成重大的经济损失。胞内劳森氏菌(劳森氏菌)引起增生性肠病，也称为回肠炎，这是全世界断奶后猪的常见肠道疾病。特征性病变是回肠肠隐窝中的未成熟肠细胞的增殖，这种细胞含有致病细菌。从肠细胞中清除细菌导致相关增殖性病变的消退。通过在肠细胞中，但也在肠巨噬细胞中的1.5-2.5µm长的弧菌状细菌的可视化，可以证实组织学病变为劳森氏菌阳性的。可以在临床或亚临床病例中通过PCR检测细菌。临床病例经常存在于生长-育成(grower-finisher)阶段。劳森氏菌属细菌在1995年首次描述(McOrist等人，Int.J.Syst.Bact.,vol.45,p.820-825)。它们是来自脱硫弧菌(Desulfovibrionaceae)科的专性细胞内和非运动性革兰氏阴性杆菌。2型猪圆环病毒(PCV2)与在幼猪中观察到的断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)有关。临床症状和病理学发表于1996年，且包括进行性消瘦，呼吸困难，呼吸急促，和偶发的黄疸(icterus)和黄疸病(jaundice)。因为与作为PK-15细胞的天然污染物的已知PCV不同，新的病原体被称为PCV2。PCV2是圆环病毒属(Circovirus)的非常小的无包膜病毒。它包含具有两个主要基因的环状单链DNA基因组。ORF2基因编码约233个氨基酸的病毒衣壳蛋白。重组表达的PCV2ORF2蛋白形成病毒样颗粒，其作为亚单位疫苗非常有效。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在1987年首次报道，并在1990年代早期已广为流行。它是动脉炎病毒(Arterivirus)属的小的包膜RNA病毒，其含有单链正义RNA基因组。由于生殖障碍和生长迟缓，这种病毒在养猪业中造成重大损失。如同Mhyo，PRRSV在多因素PRDC中发挥重要作用。临床症状是流产和死胎或木乃伊胎儿，以及耳和外阴的紫绀。在新生猪中，病毒引起呼吸窘迫，以及对继发性呼吸道感染，例如格拉泽氏病(由副猪嗜血杆菌引起)的易感性增加。然而，亚临床感染也很常见。病毒非常易变：除了欧洲变种(1型)和北美变种(2型)之外，现在有第三种基因型：2000年在中国出现的高致病性变种，并且现在在亚洲引起猪中的严重疾病。存在针对这些病原体中的每一种的商业疫苗：针对Mhyo，存在各种商业疫苗，并且这些疫苗通常用于大多数商业猪养殖操作中。通常，这些疫苗包含非复制型免疫原，例如亚单位蛋白和/或菌苗(即，完整或不完整的灭活细菌)，其通常通过肠胃外注射施用。一些实例是：RespiSure™(Zoetis)、Ingelvac™M.hyo(BoehringerIngelheim)，和M+Pac™(MerckAnimalHealth)。针对劳森氏菌的疫苗是可商购的，例如Enterisol™Ileitis(BoehringerIngelheimVetmedica,USA)，其是减毒活疫苗，和Porcilis™Ileitis(MerckAnimalHealth,USA)，其是佐剂化的菌苗。针对PCV2感染的疫苗可以基于完全灭活的PCV2病毒，例如Circovac™(Merial)，或灭活的嵌合PCV1/PCV2病毒(Suvaxyn™PCV,Zoetis)。更常见的是重组表达的PCV2ORF2蛋白的亚单位疫苗，例如来自基于杆状病毒-昆虫细胞的表达系统。实例是：Porcilis™PCV(MSDAnimalHealth)和IngelvacCircoFlex™(BoehringerIngelheim)。已经描述了基于灭活病毒的针对PRRSV的疫苗，并且可商购获得。然而，基于减毒活病毒的疫苗被认为更有效。实例是：Porcilis™PRRS(MSDAnimalHealth)、IngelvacPRRS™MLV(BoehringerIngelheim)，和Fostera™PRRS(Zoetis)。为了限制对动物的压力以及护理者的成本和劳动力，已经将一些猪疫苗作为组合疫苗制备。实例是：Fostera™PCVMH(Zoetis)和PorcilisPCVMhyo(MSDAnimalHealth)，其组合来自PCV2和Mhyo的抗原。专利申请WO2013/152086(Zoetis)描述了用于猪的三价组合疫苗，其将来自PCV2和Mhyo的抗原与活PRRSV组合，然而，所述疫苗不可商购。因此，本领域对于针对相关的猪疾病的有效的猪用组合疫苗存在兴趣。包含非复制抗原的疫苗的重要组分是佐剂。这为非复制抗原提供免疫刺激，否则非复制抗原将不具有免疫原性。这将触发不同的免疫系统途径，基本机制尚未充分理解。在兽医疫苗中，可以使用多种化合物作为佐剂，例如：矿物油，例如Bayol™或Markol™，Montanide™或石蜡油；非矿物油，如角鲨烯，角鲨烷或植物油，如油酸乙酯；铝盐，例如氢氧化铝，或磷酸铝；肽，例如二甲基甘氨酸或吞噬刺激素(Tuftsin)；细菌细胞壁组分，如脂质A和胞壁酰二肽；(合成的)聚合物，如普朗尼克类(pluronics)，右旋糖酐(dextranes)，卡波姆(carbomeres)，吡喃或皂苷；细胞因子；和Toll样受体的刺激物，如含有非甲基化CpG基团的免疫刺激性寡脱氧核苷酸；等等。制备佐剂化组合疫苗中要克服的主要问题是防止各种疫苗组分之间的相互作用，所述相互作用会对免疫响应或疫苗的安全性或稳定性产生负面影响。这种相互作用可以例如在抗原本身之间发生，例如因为一些是相当粗糙的产物，例如Mhyo和劳森氏菌的菌苗。此外，佐剂可能干扰或甚至破坏疫苗抗原。当组合包含活微生物时，这种不利的相互作用是特别相关的。提供销售许可的登记机构本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合疫苗，其包含来自2型猪圆环病毒(PCV2)的非复制抗原和活的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，其特征在于所述疫苗是包含角鲨烷和维生素E‑乙酸酯的水包油乳液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.12.23 EP 16206789.6;2017.02.24 EP 17157828.91.一种组合疫苗，其包含来自2型猪圆环病毒(PCV2)的非复制抗原和活的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，其特征在于所述疫苗是包含角鲨烷和维生素E-乙酸酯的水包油乳液。2.根据权利要求1的组合疫苗，所述疫苗包含约1%至约9％w/v之间的量的角鲨烷。3.根据权利要求1或2的组合疫苗，所述疫苗包含约1%至约10％w/v之间的量的维生素E-乙酸酯。4.根据权利要求1-3中任一项的组合疫苗，其中所述水包油乳液是亚微米乳液。5.根据权利要求1-4中任一项的组合疫苗，所述疫苗还包含来自猪肺炎支原体(Mhyo)的非复制抗原。6.根据权利要求1-5中任一项的组合疫苗，所述疫苗还包含来自胞内劳森氏菌(劳森氏菌)的非复制抗原。7.一种试剂盒，其包括至少两个容器：一个容器包含在包含角鲨烷和维生素E-乙酸酯的水包油乳液中的来自PCV2的非复制抗原；且一个容器包含冷冻干燥形式的活PRRSV。8.用于制备根据权利要求1-6中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：T詹森，MH维弗烈，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰,NL