用于结核病的预防或治疗的合成免疫原制造技术

本发明专利技术涉及用于结核病的预防或治疗的合成免疫原。公开了包含编码TB esat‑6蛋白的核酸分子的组合物。公开了诱导个体的针对TB的免疫应答的方法。公开了治疗已被诊断患有TB的个体的方法。公开了预防个体的TB感染的方法。

Synthetic immunogen for the prevention or treatment of tuberculosis

【技术实现步骤摘要】
用于结核病的预防或治疗的合成免疫原本申请是申请日为2014年3月17日的题为“用于结核病的预防或治疗的合成免疫原”的中国专利申请第201480012495.8号的分案申请。
本专利技术涉及编码结核病(TB)免疫原(编码免疫原性TB抗原)的多价构建体。每一种构建体编码多个免疫原性TB抗原并且具有被设计用于高水平表达的的编码序列。提供了预防性和治疗性疫苗，以及制造和使用所述疫苗来诱导免疫应答、从而预防TB感染和治疗感染TB病毒的个体的方法。
技术介绍
结核病(TB)是在全球具有显著发病率和死亡率的重大传染病。目前唯一得到许可的针对TB的疫苗是卡介苗(BacillusCalmette-Guerin)(BCG)疫苗。不幸的是，该疫苗赋予弱的抗成人肺TB的保护作用，并且已与不利事件相关联。因此，迫切需要开始诱导抗TB的长效保护作用的新型有效的疫苗。然而，由于多种因素，迄今只研究了少数已被确定为诱导针对TB的T细胞免疫的只有几个抗原。这些抗原包括Ag85A、Ag85B、ESAT6、TB10.4和Mtb39a。一个问题是，存在许多从其选择的TB抗原并且目前用于递送TB抗原的技术是有限的和昂贵的。仍然存在对可诱导针对免疫原性TB抗原的免疫应答的、保护以免受TB感染和为被TB感染的个体提供有效治疗的经济有效的TB疫苗和方法的需要。还存在对使得能够进行大规模抗TB疫苗接种的具有成本效益的递送系统的需要。
技术实现思路
提供了包含编码选自以下的氨基酸序列的核酸分子的组合物：SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、其具有至少90％的全长的片段、具有至少95％的同源性的同源序列以及具有至少95％同源性的同源序列的片段，具有至少95％的同源性的同源序列的所述片段具有至少90％的全长。提供了包含选自SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25和SEQIDNO:27的核酸分子的组合物。提供了SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25以及SEQIDNO:27SEQIDNO:1、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5、SEQIDNO:7、SEQIDNO:9、SEQIDNO:11、SEQIDNO:13、SEQIDNO:15、SEQIDNO:17、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21、SEQIDNO:23、SEQIDNO:25和SEQIDNO:27。提供了包含含有SEQIDNO:19的质粒、含有SEQIDNO:21的质粒、含有SEQIDNO:23的质粒、含有SEQIDNO:25的质粒和含有SEQIDNO:27的质粒的组合物。提供了包含含有V-S-W构建体的质粒、含有D-Q-E构建体的质粒、含有H-A-T构建体的质粒、含有B-C-U构建体的质粒和含有O-R-F构建体的质粒的组合物。提供了在个体中诱导抗TB的免疫应答的方法。提供了治疗已被诊断患有TB的个体的方法。提供了预防个体的TB感染的方法。附图说明图1A描绘多价esx疫苗质粒的构建和三价表达载体的体外表达。图1B提供显示5个esx构建体的抗原表达的数据。图2A和图2B显示多价TB疫苗构建体的经修饰的氨基酸插入序列。图3显示响应多价疫苗施用的体液免疫应答。图4A-图4C提供显示对多价疫苗的细胞免疫应答的柱形图。图5A和5B描绘pVSW、pBCU、pDQE、pHAT和pORF(pVSW.2、pBCU.2、pDQE.2、pHAT.2和pORF.2)插入物和质粒的新形式的构建并且包括显示所述插入物在用所述质粒转染的哺乳动物细胞中表达的实验结果。图6A-图6F显示实验设计和来自比较针对质粒的5种新形式(pVSW、pBCU、pDQE、pHAT和pORF的新形式(pVSW.2、pBCU.2、pDQE.2、pHAT.2和pORF.2))的每一种中包含的3种特定esx抗原的每一种诱导的免疫应答的实验的结果。图6A描述实验设计。图6B显示利用质粒pDQE的新形式接种的小鼠中的针对esxD、esxQ和esxE的免疫应答的实验结果。图6C显示利用质粒pVSW的新形式接种的小鼠中的针对esxV、esxS和esxW的免疫应答的实验结果。图6D显示利用质粒pBCU的新形式接种的小鼠中的针对esxB、esxC和esxU的免疫应答的实验结果。图6E显示利用质粒pORF的新形式接种的小鼠中的针对esxO、esxR和esxF的免疫应答的实验结果。图7A-图7C显示评价利用pVSW、pBCU、pDQE、pHAT和pORF的新形式(pVSW.2、pBCU.2、pDQE.2、pHAT.2和pORF.2)的组合接种后的esx-特异性CD4和CD8T细胞应答的实验的实验结果。图7A显示用于分析对于IFN-和TNF-细胞因子都是阳性的CD4和CD8T细胞的频率的门控策略。图7B显示esx-特异性CD4T细胞免疫应答。图7C显示esx-特异性CD4T细胞免疫应答。图8A-图8C显示实验设计和来自将利用RSQ-15(每一种pVSW、pBCU、pDQE、pHAT和pORF的新形式(pVSW.2、pBCU.2、pDQE.2、pHAT.2和pORF.2)的混合物)免疫的动物的免疫应答与由TB疫苗BCG诱导的免疫应答相比较的实验的结果。图9A-图9C显示实验设计和来自比较利用BCG免疫并利用RSQ-15加强一次或两次或无加强的动物的esx-特异性免疫应答的初免加强实验的结果。图10A-图10C显示利用一种pORF、pHAT或pVSW的新形式(pORF.2、pHAT.2或pVSW.2)诱导的针对亚家族直系同源物成员的免疫应答的交叉反应性。具体实施方式提供了安全、有效和经济的TB疫苗，包括应用DNA疫苗技术的实施方案。所述TB疫苗可用于可诱导抗免疫原性TB抗原的免疫应答、抗TB感染的保护作用以及为被TB感染的个体提供有效治疗的方法。DNA疫苗技术可用于给广大的个体群体提供具有成本效益的TB疫苗的递送，从而使得能够进行大规模的预防性TB疫苗接种。所述疫苗的廉价生产、贮存、运输和施用使得它们对于以具有成本效益的方式用于接种的大群体是理想的。表1显示目前正被研究以用作疫苗的TB抗原。多价疫苗方法是有吸引力的，因为广泛的免疫应答可通过同时靶向多个抗原来产生。可明显有利的是一次靶向整个家族的基因可限制细菌逃避宿主免疫的能力。在这方面，本文中提供了靶向来自TB的整个家族的基因的第一多价扩展疫苗。所述多价疫苗集中于早期分泌抗原性靶6-kDa(esat-6)蛋白家族，其由23种蛋白质组成。这些蛋白是有吸引力的靶，因为它们是重要的致病因子，潜在地在不同的生理条件下表达；因此如果所有这些成员可被靶向，则它们可能提供针对细菌生命周期中的多个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种包含选自如下物质的组合物：a)包含esxV、esxS和esxW编码序列的核酸分子、包含esxD、esxQ和esxE编码序列的核酸分子、包含esxH、esxA和esxT编码序列的核酸分子、包含esxB、esxC和esxU编码序列的核酸分子和包含esxO、esxR和esxF编码序列的核酸分子的组合；b)包含SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:1的核酸分子、包含SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:3的核酸分子、包含SEQ ID NO:23或SEQ ID NO:5的核酸分子、包含SEQ ID NO:25或SEQ ID NO:7的核酸分子和包含SEQ ID NO:27或SEQ ID NO:9的核酸分子的组合；c)包含SEQ ID NO:19的核酸分子、包含SEQ ID NO:21的核酸分子、包含SEQ ID NO:23的核酸分子、包含SEQ ID NO:25的核酸分子和包含SEQ ID NO:27的核酸分子的组合；d)编码SEQ ID NO:20的核酸分子、编码SEQ ID NO:22的核酸分子、编码SEQ ID NO:24的核酸分子、编码SEQ ID NO:26的核酸分子和编码SEQ ID NO:28的核酸分子的组合；e)选自以下的一种或多种核酸分子：包含SEQ ID NO:1的核酸分子、包含SEQ ID NO:3的核酸分子、包含SEQ ID NO:5的核酸分子、包含SEQ ID NO:7的核酸分子、包含SEQ ID NO:9的核酸分子、包含SEQ ID NO:11的核酸分子、包含SEQ ID NO:13的核酸分子、包含SEQ ID NO:15的核酸分子、包含SEQ ID NO:17的核酸分子、包含SEQ ID NO:19的核酸分子、包含SEQ ID NO:21的核酸分子、包含SEQ ID NO:23的核酸分子、包含SEQ ID NO:25的核酸分子、包含SEQ ID NO:27的核酸分子、具有至少90％的全长的其片段、具有至少95％的同源性的同源序列以及具有至少95％的同源性的同源序列的片段，具有至少95％的同源性的同源序列的所述片段具有至少90％的全长；和f)编码选自以下的氨基酸序列的一种或多种核酸分子：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:28、具有至少90％的全长的其片段、具有至少95％的同源性的同源序列以及具有至少95％的同源性的同源序列的片段，具有至少95％的同源性的同源序列的所述片段具有至少90％的全长。...

【技术特征摘要】
2013.03.15 US 61/800,3751.一种包含选自如下物质的组合物：a)包含esxV、esxS和esxW编码序列的核酸分子、包含esxD、esxQ和esxE编码序列的核酸分子、包含esxH、esxA和esxT编码序列的核酸分子、包含esxB、esxC和esxU编码序列的核酸分子和包含esxO、esxR和esxF编码序列的核酸分子的组合；b)包含SEQIDNO:19或SEQIDNO:1的核酸分子、包含SEQIDNO:21或SEQIDNO:3的核酸分子、包含SEQIDNO:23或SEQIDNO:5的核酸分子、包含SEQIDNO:25或SEQIDNO:7的核酸分子和包含SEQIDNO:27或SEQIDNO:9的核酸分子的组合；c)包含SEQIDNO:19的核酸分子、包含SEQIDNO:21的核酸分子、包含SEQIDNO:23的核酸分子、包含SEQIDNO:25的核酸分子和包含SEQIDNO:27的核酸分子的组合；d)编码SEQIDNO:20的核酸分子、编码SEQIDNO:22的核酸分子、编码SEQIDNO:24的核酸分子、编码SEQIDNO:26的核酸分子和编码SEQIDNO:28的核酸分子的组合；e)选自以下的一种或多种核酸分子：包含SEQIDNO:1的核酸分子、包含SEQIDNO:3的核酸分子、包含SEQIDNO:5的核酸分子、包含SEQIDNO:7的核酸分子、包含SEQIDNO:9的核酸分子、包含SEQIDNO:11的核酸分子、包含SEQIDNO:13的核酸分子、包含SEQIDNO:15的核酸分子、包含SEQIDNO:17的核酸分子、包含SEQIDNO:19的核酸分子、包含SEQIDNO:21的核酸分子、包含SEQIDNO:23的核酸分子、包含SEQIDNO:25的核酸分子、包含SEQIDNO:27的核酸分子、具有至少90％的全长的其片段、具有至少95％的同源性的同源序列以及具有至少95％的同源性的同源序列的片段，具有至少95％的同源性的同源序列的所述片段具有至少90％的全长；和f)编码选自以下的氨基酸序列的一种或多种核酸分子：SEQIDNO:2、SEQIDNO:4、SEQIDNO:6、SEQIDNO:8、SEQIDNO:10、SEQIDNO:12、SEQIDNO:14、SEQIDNO:16、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20、SEQIDNO:22、SEQIDNO:24、SEQIDNO:26、SEQIDNO:28、具有至少90％...

【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·B·韦纳，丹尼尔·维拉里尔，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国,US