【技术实现步骤摘要】
一种高成骨分化能力人间充质干细胞及其制备方法
本专利技术涉及间充质干细胞
，尤其涉及一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法。
技术介绍
外伤、炎症、肿瘤切除以及先天性疾病造成的颌骨组织缺损是临床上常见的问题，目前主要通过骨修复方法进行治疗，包括自体骨、异体骨及异种骨移植，其中以自体骨移植为“金标准”。但目前常规的骨皮瓣修复、自体髂骨移植以及骨替代材料的修复方案都具有一定的缺陷，比如要增加额外的手术位点、自体骨骨量有限、异体骨免疫排斥反应以及修复材料在骨缺损中心处的低血管化，都不能较好地满足临床上的修复要求，且可能伴有各种并发症。研究表明，骨缺损的自行修复结果通常取决于缺损的范围以及缺损处的血供等情况，当缺损较大时，骨组织将不足以完全修复缺损，因此，对于大范围的颌骨组织缺损，骨修复往往无法达到预期疗效，需采用以纤维组织为主的修复方式。因此急需寻找新的治疗方法以达到更好的骨再生效果，解除常规骨修复失败给患者带来的痛苦。间充质干细胞是一类具有自我复制、不断更新和多向分化能力的细胞，在特定条件下可分化为骨、软骨、肌肉或肌腱，为临床治疗各种创伤提供细胞来源，用间充...
【技术保护点】
1.一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1.1）组织块法分离、培养原代人间充质干细胞；1.2）原代人间充质干细胞的传代培养；1.3）传代人间充质干细胞的质量控制与安全性评价体系检测；1.4）高成骨分化能力人间充质干细胞的诱导培养：将融合度为70‑80％的人间充质干细胞置于添加有小分子药物SB431542的成骨诱导培养基中培养至形成具有较强成骨分化能力的人间充质干细胞膜片。
【技术特征摘要】
1.一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1.1）组织块法分离、培养原代人间充质干细胞；1.2）原代人间充质干细胞的传代培养；1.3）传代人间充质干细胞的质量控制与安全性评价体系检测；1.4）高成骨分化能力人间充质干细胞的诱导培养：将融合度为70-80％的人间充质干细胞置于添加有小分子药物SB431542的成骨诱导培养基中培养至形成具有较强成骨分化能力的人间充质干细胞膜片。2.根据权利要求1所述的一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法，其特征在于：步骤1）中的人间充质干细胞为人牙龈间充质干细胞，组织块法分离、培养人牙龈间充质干细胞包括如下步骤：1.1）人牙龈间充质干细胞的获取：收集提取人牙龈组织，存储在无菌的50ml离心管中；1.2）人牙龈间充质干细胞的分离与原代培养，具体包括以下步骤：1.2.1）通过4℃医用保温箱将存储于50ml离心管中的牙龈组织转移至GMP级临床干细胞制备室，在生物安全柜中无菌取出牙龈组织；1.2.2）将牙龈组织用含2%青链霉素的DPBS缓冲液(+Ca2+，+Mg2+)洗涤3次，5min/次；1.2.3）使用显微剪将洗涤后的牙龈组织剪切为0.5cm×0.5cm的组织块，然后将组织块均匀接种于间充质干细胞完全培养基（DMEM+15%胎牛血清+1%青链霉素）中，并置于温度为37℃，体积分数为5%的CO2培养箱中培养，以获得人牙龈间充质干细胞，并记为P0代，P0代人牙龈间充质干细胞培养72h后，更换培养液，弃去未贴壁细胞，根据细胞生长情况，之后每2天或3天更换一次新鲜培养液，倒置显微镜下观察细胞融合度。3.根据权利要求1所述的一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法，其特征在于：步骤2）中人间充质干细胞的传代培养为：待步骤1.2.3）中的P0代人牙龈间充质干细胞长至融合度为80%-90%时，加入Tryple消化，用倒置相差显微镜观察细胞消化情况，终止消化后，按1:1～1:4的比例传代，记为P1、P2、P3等数代细胞。4.根据权利要求1所述的一种高成骨分化能力人间充质干细胞的制备方法，其特征在于：步骤3）中传代人间充质干细胞的质量控制与安全性评价体系检测包括以下五方面检测：3.1）人牙龈间充质干细胞形态的形态学观察：利用倒置显微镜观察P2或P3代人牙龈间充质干细胞的形态，筛选出细胞形态均一、均呈现成纤维形态，符合间充质干细胞形态特点的人牙龈间充质干细胞；3.2）人牙龈间充质干细胞表面标志物的鉴定：利用流式细胞仪检测鉴定步骤3.1）中的人牙龈间充质干细胞表面标志物，筛...
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