提供治疗活性细胞产物制造技术

提供治疗活性细胞产物和用于从组织捐献制备它的离体方法。所述方法包括体外免疫耗尽造血干细胞和造血谱系细胞。通过所述方法获得的所述治疗活性细胞产物包含一部分非造血干细胞，其包含非造血祖[干]细胞、多效能干细胞和/或多潜能干细胞。其他方面包括用于治疗用途，特别是用于治疗自身免疫性疾病和/或神经系统疾病的细胞产物。

Providing therapeutic active cell products

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】提供治疗活性细胞产物
本专利技术涉及包含非造血干细胞和祖细胞的治疗活性细胞产物，并且其涉及提供细胞产物的方法。
技术介绍
人类和动物有机体的成体组织包含成体干细胞，已知其自我更新并分化成组织细胞，从而在生理上提供组织修复和组织再生。这使得成体干细胞的使用对临床应用具有吸引力。成体干细胞分离自多种组织来源，比如脐带、骨髓和脂肪组织。分离自骨髓的造血干细胞已用于治疗恶性血液病患者多年，并且现今成体干细胞手术程序的临床应用仍主要与造血干细胞相关。然而，骨髓不仅含有异质的造血干细胞群，而且含有非造血干细胞群。骨髓的非造血干细胞包括例如间充质干细胞、组织特异性祖干细胞和具有分化成各种不同组织能力的多效能或多潜能干细胞。对于一些间充质干细胞，已知其具有多效能分化潜能。同时，实施了数百项基于干细胞治疗的临床研究，以便测试和证实可行性和功效，如可例如源自互联网上的出版物，比如(http://www.clinicaltrial.gov/)或其他网站比如http://neuro.cellthera.org/for-specialists可得到的美国国立卫生研究院官方数据库。许多使用非造血干细胞的临床试验仍在进行中。使用非造血干细胞治疗或者特别是使用间充质干细胞建立常规临床应用的主要困难为由于难以获得[间充质]干细胞产物。仍然没有建立提供非造血干细胞的标准方法，这使得评估治疗效果和比较临床研究困难。必须克服关于提供用于移植的间充质干细胞的几个困难：首先，间充质干细胞罕见，例如在骨髓中其仅占细胞的0.001-0.05%部分。此外，缺乏一致表达的表面抗原用于基于阳性标记物鉴定和分离间充质干细胞，这例如对于造血干细胞是可能的。国际细胞治疗学会(ISCT)于2006年公开了一份用于建立MSC特征性最低标准的意见书，比如塑料粘附、体外多效能分化潜能和超过95%的细胞存在CD105、CD73和CD90和少于2%的细胞基本缺乏即CD45、CD34和CD14或CD11b或CD79α或CD19组合的表达。然而，这些标准存在缺点，比如CD105、CD73和CD90不仅在间充质干细胞MSC上表达而且在许多其他细胞类型上表达，并且在体外和体内观察到的间充质干细胞分化潜能不一定相同且可例如随着细胞来源或培养条件进一步变化。事实上，许多障碍，包括间充质干细胞通常不能通过其表面标记物(表面抗原)来定义，MSC由于体外培养而产生非同源细胞群，以及得自鼠间充质干细胞分离和培养的结果不能转移至人间充质干细胞，仍然阻碍提供包含间充质和其他干细胞的治疗活性细胞产物用于治疗疾病比如自身免疫性疾病和/或涉及组织变性的神经系统疾病。专利技术公开因此，本专利技术的一般目的为提供治疗活性非造血干细胞产物的方法。细胞产物和提供它的方法试图单独或以任何组合克服、减轻或消除上述不利条件。本专利技术的特别目的包括提供细胞产物的方法，细胞产物包含非造血器官特异性祖干细胞、多潜能干细胞和多效能干细胞，并且特别是间充质干细胞。本专利技术的目的进一步包括在由于各种原因(包括由于例如毒素、感染或创伤引起的自身免疫性和神经系统疾病或组织坏死)引起的组织损伤或组织缺失之后根据需要提供用于医疗用途的细胞产物。一个特别目的为提供细胞产物，其在其中迄今为止组织损伤的治疗处理不令人满意的情况下促进、改善或使组织再生。这种目的包括提供改进的细胞产物，用于治疗自身免疫性疾病和/或神经系统疾病，比如多发性硬化和伴有一些细胞和组织类型进行性缺失的其他疾病。这种目的通过提供独立权利要求以及从属权利要求的其他实施方案的细胞产物和制备它的方法得到解决。为了实现本专利技术的这些和更进一步目的(其随着描述的进行将变得更加明显)，本专利技术的以下方面显示如下所述。本专利技术的第一方面涉及提供治疗活性细胞产物的方法，细胞产物由组织捐献离体制备，形成原始细胞群。可从原始群制备洗涤和/或挑选的细胞悬浮液。方法包括体外免疫耗尽造血干细胞和造血谱系细胞。免疫耗尽包括表达一组所选表面抗原的至少一种所选表面抗原的细胞耗尽。所选表面抗原组包括CD45表面抗原家族的至少一个成员(特别是CD45)和至少3种选自CD14、CD19、CD34、CD45表面抗原家族的其他成员和ICAM-1的表面抗原。通过该方法获得的治疗活性细胞产物包含一部分非造血干细胞，其包含非造血祖[干]细胞、多效能干细胞和/或多潜能干细胞。用于捐献的组织可为包含非造血干细胞的任何组织。优选的组织为骨髓。免疫耗尽包括其中表达一种或多种所选表面抗原的细胞用特异性抗体标记的免疫标记程序和用于从原始细胞群去除免疫标记的细胞比如特别是造血细胞的分离程序。根据本专利技术的方法，细胞产物从自体或异源供体组织比如骨髓或另一组织离体制备。用于从人类或动物个体获得供体组织比如用于从脐带、脂肪组织(比如腹部脂肪或皮肤或沃顿氏胶)获得例如骨髓、外周或月经血或组织探针的医学方法被很好地建立并且不是本专利技术方法的主题。类似地，将细胞产物给予人或动物的身体行为不是提供本专利技术细胞产物的方法部分。用于制备细胞产物的供体组织中含有的细胞称为原始细胞群。原始细胞群可悬浮产生原始细胞悬浮液。在一些实施方案中，得自捐献组织的原始细胞群可在免疫耗尽之前分级或部分纯化。这种先前步骤可有效去除作为组织部分的特定细胞类型，例如来自高度供血组织(比如骨髓)的一些血细胞。例如，洗涤和过滤步骤可例如去除红细胞、大于滤器所选孔径的细胞、细胞碎片和与组织探针一起获得的其他组分。过滤步骤也可用于挑选组织探针的细胞和去除组织块。术语“细胞悬浮液”适用于体外方法步骤序列期间的任何细胞悬浮液，如从上下文显而易见的那样。因此，除原始细胞悬浮液的细胞组成以外，所有后续细胞悬浮液的组成都不同于原始细胞群的细胞组成。术语造血细胞是指造血系统的细胞，包括造血干细胞和分化期间各阶段的造血谱系细胞，包括例如淋巴或髓系祖细胞、成红血细胞和完全分化的造血细胞，比如红细胞、血小板、巨噬细胞、粒细胞或淋巴细胞比如B细胞和T细胞。出人意外地，已发现本专利技术方法的细胞产物具有治疗活性。其包含非造血干细胞和由于去除造血细胞而富含一些非造血干细胞，特别是表达间充质干细胞特征性表面抗原的一些细胞类型。依一些实施方案的细胞用途而定，可能期望从原始细胞群完全或基本上完全去除某些细胞类型，因此耗尽特定所选细胞类型的例如超过90%，或者特别是超过95%或99%。在一些实施方案中，这可以追求，例如对于造血细胞的子集(例如淋巴细胞(特别是B细胞和T细胞)以及分化成介导适应性免疫系统的细胞的相应祖干细胞)，或对于已知引起或助于由于自身免疫活性造成的组织损伤或用于从细胞产物去除癌症或癌前细胞的任何细胞类型。然而，细胞产物的治疗活性通常不需要完全或基本上完全耗尽表达一种或多种所选表面抗原的所有细胞，或者特别是所有造血细胞。事实上，表达至少一种所选表面抗原的细胞或简称“所选细胞”的耗尽可依特定所选表面抗原和包括原始组织捐献来源在内的其他因素而定变化。在一些实施方案中，对各种所选细胞类型耗尽可在例如从原始悬浮液去除约15%或20%或30%或40%或50%或60%或70%或80%或90%至几乎所有所选细胞的范围内，因此耗尽可在低或显著去除所选细胞至基本上完全或完全耗尽所选细胞的范围内。因此，在一些实施方案中，细胞产物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.提供治疗活性细胞产物的方法，其中所述细胞产物以原始细胞群悬浮液的形式从组织捐献离体制备，其中任选地所述原始细胞群的悬浮液在体外耗尽之前洗涤和重悬浮为洗涤和/或单细胞悬浮液，其中所述细胞产物包含一部分非造血干细胞，后者包含非造血祖[干]细胞、多效能干细胞和多潜能干细胞，其中所述方法包括造血干细胞和造血谱系细胞的体外免疫耗尽，其中所述免疫耗尽包括从原始细胞群的悬浮液或从单细胞和/或洗涤的细胞悬浮液耗尽表达所选表面抗原组的至少一种表面抗原的细胞，其中所选表面抗原组包含CD45表面抗原家族的至少一个成员，特别是CD45，和至少3种选自CD14、CD19、CD34、CD45抗原家族的其他成员和ICAM‑1的表面抗原。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.29 CH 1109/161.提供治疗活性细胞产物的方法，其中所述细胞产物以原始细胞群悬浮液的形式从组织捐献离体制备，其中任选地所述原始细胞群的悬浮液在体外耗尽之前洗涤和重悬浮为洗涤和/或单细胞悬浮液，其中所述细胞产物包含一部分非造血干细胞，后者包含非造血祖[干]细胞、多效能干细胞和多潜能干细胞，其中所述方法包括造血干细胞和造血谱系细胞的体外免疫耗尽，其中所述免疫耗尽包括从原始细胞群的悬浮液或从单细胞和/或洗涤的细胞悬浮液耗尽表达所选表面抗原组的至少一种表面抗原的细胞，其中所选表面抗原组包含CD45表面抗原家族的至少一个成员，特别是CD45，和至少3种选自CD14、CD19、CD34、CD45抗原家族的其他成员和ICAM-1的表面抗原。2.权利要求1的方法，其中所述免疫耗尽包括用包含标签的特异性抗体标记表达一种或多种所选表面抗原的细胞的免疫标记程序，其中在直接免疫标记程序中，所述标签可在所述抗体与所述表面抗原特异性结合之前与所述抗体缀合，和/或其中在间接免疫标记程序中，所述标签可在所述免疫标记程序期间，在所述抗体与所述表面抗原特异性结合之后与所述抗体缀合，其中所述标签特别是磁珠或荧光标签；和其中所述免疫耗尽包括以与所述标记程序分开的步骤或以组合的步骤，自所述悬浮液去除用包含标签的抗体标记的细胞的分离程序。3.权利要求1或2的方法，其中所述免疫标记为免疫磁性标记程序，和其中所述标签为磁性粒子和其中磁分离装置用于分离程序以耗尽所述免疫磁性标记的细胞。4.权利要求1-3中一项的方法，其包括至少一种直接免疫标记程序，其中所述细胞悬浮液与至少一种标签缀合的表面抗原特异性抗体，特别是至少一种与磁性粒子或与荧光标签缀合的抗体一起温育。5.权利要求1-4中一项的方法，其包括至少一种间接免疫标记程序，其中在所述方法的第一步，使所述细胞群与一种或多种表面抗原特异性一抗一起温育，其中在所述第一步之后，过量的所述一种或多种未结合一抗通过离心随后重悬浮所述细胞去除；其中在所述方法的第二步，使所述细胞群与至少一种标签缀合的二抗和/或与至少一种与一抗特异性结合的其他标签缀合的试剂一起温育，其中在所述第一步中特别是使用生物素化一抗和在所述第二步中使用链霉亲和素包被的标签或标签缀合的抗生物素抗体，和其中与二抗或与另一种试剂缀合的所述标签特别是磁性粒子或荧光标签，其中所述免疫标记程序任选地包括在所述第一和所述第二步之前和/或之后的另外步骤，和其中任选地所述至少一个第一和所述至少一个第二步中组合的温育次数包括所述细胞悬浮液与一抗和/或二抗一起温育总计最多3次或最多4次或最多5次。6.权利要求5的方法，其包括间接免疫标记，其中在所述免疫标记的第一步，使所述细胞群同时与针对至少3种不同所选表面抗原的一抗一起温育，其中任选地根据标准温育条件温育每种所述抗体，和其中特别是标准温育条件包括每种抗体的抗体浓度为0.1-2.5mg抗体/100ml+/-10ml温育体积，特别是0.25-0.75mg或0.5mg抗体/100ml+/-10ml温育体积，和其中任选地存在的所述细胞数量不超过1010个细胞或不超过5x109或3x109或2x109或1.5x109或1.2x109或1.0x109个细胞。7.权利要求2-6中一项的方法，其中所述免疫标记程序的一个或多个步骤和/或所述免疫耗尽的所述分离程序在限制条件下实施，其中所述限制条件有利于从所述原始细胞群耗尽细胞，所述细胞与具有每个细胞结合的较低数量的所选表面抗原特异性抗体的细胞相比较，具有每个细胞结合的较高数量的这种所选抗体，和其中应用以下条件之一或多于一种以下条件的组合：-其中在所述直接免疫标记程序中，限制性温育条件仅使得所述细胞上所选表面抗原的抗原结合位点被所述标签缀合的抗体部分饱和，和/或-其中在所述间接免疫标记程序的第一步，限制性温育条件仅使得所述细胞上所选表面抗原的抗原结合位点被所述一抗部分饱和，和/或-其中在所述间接免疫标记程序的第二步，限制性温育条件仅使得所述一抗的抗原结合位点被所述标签缀合的二抗部分饱和，和/或-其中在所述间接免疫标记的第一步，应用标准温育条件以使得所选表面抗原结合位点达最大饱和度，同时最小化所述一抗与所述细胞的非特异性结合，和其中在第二步，限制性温育条件仅使得所述一抗的抗原结合位点被所述标签缀合的二抗部分饱和，和/或-其中在所述间接免疫标记的第一步，调整限制性温育条件以仅使得所述细胞上的所选表面抗原结合位点部分饱和，而在第二步，标准温育条件使得所述一抗上的抗原结合位点达最大饱和度，和/或-其中在所述分离程序中调整条件使得从所述原始细胞群去除用两个或更多个标签，特别是用至少3或4个或多于4个标签标记的细胞，而包含较少标签的细胞保留在所述原始细胞群中，和其中所述标签特别是磁性粒子。8.权利要求2-7中一项的方法，其中调整所述免疫耗尽的一个或多个步骤的温育条件以仅使得至少一种所选表面抗原的抗原结合位点部分饱和，所述所选表面抗原包含CD14、CD19、CD34、CD45表面抗原家族、CD117和ICAM-1中的至少一种，优选地CD14和/或CD34和/或CD45表面抗原家族的至少一个成员中的至少一种。9.权利要求8的方法，其中所述抗原结合位点的所述部分饱和通过与标准温育条件相比较，降低抗体和抗原之间的接触效率或通过减少结合概率或通过降低抗体和抗原之间的结合强度，特别是通过选择一个或多个以下选项来实现，-通过降低抗体量与细胞数量的比率，和/或-通过将温育体积增加1.5-4，像1.5-3.5或2-3倍，和/或-通过减少温育时间，和/或-通过适应温育温度，和/或-通过适应运行条件像运行速度，其中标准温育条件下的所述结合概率或所述接触效率或所述结合强度针对特异性结合的抗体对所选表面抗原的相应抗原结合位点达最大饱和度进行优化，同时保持抗体与缺乏特定所选表面抗原的细胞以低于抗体与表达所述相应表面抗原的细胞的特异性结合水平的30%，特别是低于20%或10%或5%的水平非特异性结合和/或其中所述标准温育条件符合所述抗体制造商的规格要求。10.先前权利要求中一项的方法，其中所述体外免疫耗尽包括用于标记表达所选表面抗原组的至少一种表面抗原的细胞的免疫标记程序，其中所述免疫标记以至少两个阶段实施，其中在第一阶段，除针对CD34和/或CD133和/或CD117的抗体以外，用针对所选表面抗原的抗体标记细胞，和其中在所述第一阶段之后实施的第二阶段，用针对CD34和/或CD133和/或CD117表面抗原的抗体，和任选地用针对其他所选抗原的抗体标记细胞，和其中任选地所述第一和所述第二两个阶段包括一个或多个单独的温育步骤，每个步骤用于分别用针对一种选...

【专利技术属性】
技术研发人员：W奥劳斯基，
申请(专利权)人：PDI医药发展国际股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH