【技术实现步骤摘要】
一种细胞胞体来源胞内功能生理活性肽库的构建方法
本专利技术涉及生物学
，尤其涉及一种细胞胞体来源胞内功能生理活性肽库的构建方法。
技术介绍
肽是一类分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物，是生命体内发挥各种生理功能不可或缺的物质，其中对人体生命活动有益的生理作用的肽类又称功能肽（functionalbiopeptide）。从物质组成结构，肽由氨基酸组成，由不同的氨基酸的种类排序加上一些可能的二级甚至三级结构，具有显著的生理活性。在肽的提取上，目前已经从动，植物和微生物中分离出多种多样的生物活性肽。现有研究表明，生物活性肽在调节生物体内酶，抑菌，调节机体免疫功能，抗血栓，抗氧化清除机体自由基，改善机体的物质吸收和运输机能等各方面都发挥重要的生理作用。近几年，因生物活性肽在抗衰领域的研究越来越充分，生物活性肽在护肤应用于护肤品市场也受到青睐。德国鲍威尔﹒克鲁德博士说：“找到了一个新的抗衰老药物——肽。肽能使人变的年轻、健康，肽使化妆品世界发生了巨大变化。”美国皮肤老化国际研究会主席尼古拉斯﹒佩里扎医学博士“肽、神经肽——这类强大的化学物具有活化皮肤和头发，促...
【技术保护点】
1.一种细胞胞体来源胞内功能生理活性肽库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：a、细胞胞体培养：将脐带剪成小段并放入含2%双抗的PBS洗液中洗涤2～3次，之后放入培养皿中并剪碎至糊状，加入培养基并搅拌均匀，之后移入培养瓶中并加入培养基，将培养瓶放入CO2培养箱，5～9天后往培养瓶中加入培养基，之后在显微镜下观察到培养瓶局部出现细胞融合度达到90%以上时，用胰酶消化传代并收集；b、将分离得到的间充质干细胞进行鉴定：对胰酶消化后的细胞使用细胞染色缓冲液或PBS洗涤液进行洗涤，之后1000～2000rpm离心细胞悬液5～10min，弃掉上清液后加染色缓冲液制成细胞悬液,将细胞悬液...
【技术特征摘要】
1.一种细胞胞体来源胞内功能生理活性肽库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：a、细胞胞体培养：将脐带剪成小段并放入含2%双抗的PBS洗液中洗涤2～3次，之后放入培养皿中并剪碎至糊状，加入培养基并搅拌均匀，之后移入培养瓶中并加入培养基，将培养瓶放入CO2培养箱，5～9天后往培养瓶中加入培养基，之后在显微镜下观察到培养瓶局部出现细胞融合度达到90%以上时，用胰酶消化传代并收集；b、将分离得到的间充质干细胞进行鉴定：对胰酶消化后的细胞使用细胞染色缓冲液或PBS洗涤液进行洗涤，之后1000～2000rpm离心细胞悬液5～10min，弃掉上清液后加染色缓冲液制成细胞悬液,将细胞悬液加入流式细胞管中备用，之后对细胞悬液进行封闭Fc受体，并对细胞悬液中加入荧光标记的抗体，混匀后置于冰上，避光孵育30～40min，加入FACs缓冲液或PBS洗涤液重悬细胞，1000～2000rpm离心细胞悬液5～10min，弃掉上清液后加入FACs缓冲液或PBS洗涤液重悬细胞，之后用流式细胞仪碱性检测和分析；c、复苏扩增细胞：将细胞冻存后取出放入37℃水浴锅中，使其全部融化，在放有培养基的离心管内放入解冻的细胞悬液，之后1000～2000rpm离心5～10min并倒去上清液，向离心管中加入培养基吹打均匀，离心洗涤并倒去上清液，加入培养基重悬细胞，转移至培养瓶后放入CO2培养箱培养24～48h，之后吸出培养基加入PBS洗涤液进行洗涤，洗涤完成后吸出洗涤液并加入胰酶，直至肉眼可见贴壁细胞层有大量细胞掉落后加入培养基终止消化，吹打细胞层并吸取细胞悬液于离心管内1000～2000rpm离心5～10min，倒去上清液，再加入培养基重悬、离心洗涤，倒去上清液，加入培养基重悬，转移至培养瓶后放入CO2培养箱培养；d、收集清洗细胞体用于细胞胞内活性肽的提取：观察到培养瓶内的细胞融合度达到85～90%后吸出培养基，加入PBS洗涤液洗涤，洗涤完成后吸出洗涤液并加入胰酶，直至肉眼可见贴壁细胞层有大量细胞掉落后加入培养基终止消化，吹打细胞层并吸取细胞悬液于离心管内1000～2000rpm离心5～10min，倒去上清液，再加入PBS洗涤液重悬、离心洗涤收集细胞；e、液氮反复冻融法破碎细胞收集细胞胞内活性肽：将收集的细胞进行繁殖培养，收集培养到P10代且呈细小梭型的细胞，胰酶消化后离心收集细胞体后三次梯度离心洗涤收集沉淀物，沉淀物加去离子水，依次进行液氮反复冻融法和低速离心，离心后取上清液进行离心超滤，将超滤后的滤液进行固相萃取，洗脱液由甲醇、水以及甲酸混合组成，得到的...
【专利技术属性】
技术研发人员：周碧柳，李钧翔，陆益，董云加，范元亮，俞剑峰，沈丽霞，
申请(专利权)人：启迪汉洱康嘉兴生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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