一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法技术

本发明专利技术公开了一种新型翻译组Ribosome‑seq建库方法，包括如下步骤：步骤S1，利用分子排阻色谱法对待测样品进行RPF的分离和提取，获得RNA样品；步骤S2，对RNA样品去除RNA样品中的rRNA；步骤S3，对去除rRNA后的RNA样品进行5’磷酸化反应；步骤S4，利用磷酸化后的RNA样品构建RNA测序文库，通过本发明专利技术，能够准确检测出与核糖体结合的mRNA信息，研究精度更加精细。

【技术实现步骤摘要】
一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法
本专利技术涉及生命科学
，特别是涉及一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法。
技术介绍
蛋白质是生命活动的主要承担者。中心法则指出基因组上编码的基因信息是通过转录形成信使RNA(mRNA)，mRNA翻译形成蛋白质来行使机体的各项生理功能的。翻译过程主要包括核糖体聚集于mRNA(翻译起始)、核糖体在mRNA上移动形成肽链(翻译延伸)和肽链合成终止(翻译终止)三个步骤。研究表明，在翻译过程中存在翻译调控，翻译延伸中的调控将会对蛋白质合成的质量产生影响，而mRNA的丰度和蛋白质的丰度并不一致且相关性较低。因此，很有必要对细胞的翻译过程进行研究。目前，翻译组测序的相关技术主要有以下两种：一种是核糖体新生肽链复合物结合的mRNA测序(ribosomenascent-chaincomplex-boundmRNAssequencing)，简称RNC-seq，该方法通常是直接通过蔗糖密度梯度超速离心的方法，将与多个核糖体结合的全长mRNA进行富集并进行测序；另一种是核糖体印记测序(Ribosomefootprintsprofiling)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型翻译组Ribosome‑seq建库方法，包括如下步骤：步骤S1，利用分子排阻色谱法对待测样品进行RPF的分离和提取，获得RNA样品；步骤S2，对RNA样品去除RNA样品中的rRNA；步骤S3，对去除rRNA后的RNA样品进行5’磷酸化反应；步骤S4，利用磷酸化后的RNA样品构建RNA测序文库。

【技术特征摘要】
1.一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，包括如下步骤：步骤S1，利用分子排阻色谱法对待测样品进行RPF的分离和提取，获得RNA样品；步骤S2，对RNA样品去除RNA样品中的rRNA；步骤S3，对去除rRNA后的RNA样品进行5’磷酸化反应；步骤S4，利用磷酸化后的RNA样品构建RNA测序文库。2.如权利要求1所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：所述待测样品来源于植物、动物或微生物；和/或，所述待测样品为组织、细胞、组织裂解物或细胞裂解物。3.如权利要求2所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：于步骤S1之前，还包括对检测样本经细胞固定、细胞清洗、细胞收集以及细胞裂解得到细胞裂解物的步骤，所述待测样品为细胞裂解物。4.如权利要求3所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：于：于步骤S1中，于待测样品加入核糖核酸酶I和脱氧核糖核酸酶I，室温混匀孵育，然后加入SUPERase*InRNaseinhibitor，终止消化反应；接着进行分离纯化RPF；最后提取RNA，并进行质检。5.如权利要求4所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于，所述分离纯化RPF的步骤采用MicroSpinS-400Column层析柱进行分离纯化RPF。6.如权利要求4所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方法，其特征在于：所述提取RNA，并进行质检的步骤利用microRNA提取试剂盒，提取RNA，并利用核酸定量仪器检测RNA的浓度和质量，琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带。7.如权利要求6所述的一种新型翻译组Ribosome-seq建库方...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏昊强，周煌凯，高川，张羽，陶勇，罗玥，曾川川，
申请(专利权)人：广州基迪奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44