一种真皮成纤维细胞皮片及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提出了一种自体真皮成纤维细胞皮片的构建方法，所述方法为：将体外扩增的真皮成纤维细胞接种到经过脱细胞、脱脂、脱核酸处理的羊膜组织进行细胞固化，构建真皮成纤维细胞‑羊膜组织的复合结构，在细胞培养条件下富集高纯度细胞，获得所述自体真皮成纤维细胞皮片。本发明专利技术还提出了由该方法构建得到的自体真皮成纤维细胞皮片。本发明专利技术自体真皮成纤维细胞皮片可用于烧伤创伤、大面积植皮、及其他急需大面积皮肤缺损的临床需求，具有低排异、可持续供应等优点，有广泛应用前景。

A dermal fibroblast skin graft and its construction method and Application

The invention provides a method for constructing an autologous dermal fibroblasts skin graft. The method comprises: inoculating the expanded dermal fibroblasts in vitro into the amniotic membrane tissue treated with acellular, degreasing and denucleic acid for cell solidification, constructing a composite structure of dermal fibroblasts and amniotic membrane tissue, enriching high purity cells under the condition of cell culture, and obtaining the autologous authenticity. Dermal fibroblast skin graft. The invention also proposes an autologous dermal fibroblast skin sheet constructed by the method. The autologous dermal fibroblast skin graft of the invention can be used for burn wounds, large area skin grafting, and other clinical needs of urgent need for large area skin defect. It has the advantages of low rejection, sustainable supply, etc., and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种真皮成纤维细胞皮片及其构建方法和应用
本专利技术涉及真皮成纤维细胞体外生产
，具体涉及一种真皮成纤维细胞皮片及其构建方法和应用。
技术介绍
自体真皮成纤维细胞体外生产技术：自体细胞的体外生产技术目前已经十分成熟。成人自体真皮的成纤维细胞体外增殖技术，已经达到了产业化要求，在国外已经有该产品注射剂上市，国内也出现类似产品。现在成人真皮成纤维细胞的规模化生产朝向高效、高纯度、高活性的方向发展；产品用途可直接制备注射剂，也可以作为其他制剂的主要原料成分。脱上皮层羊膜构建固体细胞技术：细胞固化技术发展至今，逐渐分成两类，一类是利用生物组织膜进行脱细胞-加细胞处理，另一类是利用生物凝胶材料融合细胞制成立体凝胶片。其中生物组织膜+细胞的产品中，已经在人工皮肤、人工角膜、其他人工组织膜中进行临床研究。人脱细胞羊膜作为组织工程支架具有容易获得、良好的生物相容性、可降解性及低免疫原性等优点，已经用于组织工程皮肤、组织工程角膜的制作。但其也存在一些不足，包括强度欠佳、植入后可能存在排异反应等。目前，国内治疗皮肤烧伤创伤的上市组织工程皮肤产品中，只有异体细胞“安体肤”，自体细胞“PELNAC”。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种真皮成纤维细胞皮片的构建方法，其特征在于，所述方法为：步骤(1)：将体外扩增的真皮成纤维细胞结合到经过脱细胞、脱脂、脱核酸处理的羊膜组织进行细胞固化，构建真皮成纤维细胞‑羊膜组织的复合结构；所述真皮成纤维细胞为FI表型成人真皮成纤维细胞；步骤(2)：在扩增培养基中培养，获得所述真皮成纤维细胞皮片。

【技术特征摘要】
1.一种真皮成纤维细胞皮片的构建方法，其特征在于，所述方法为：步骤(1)：将体外扩增的真皮成纤维细胞结合到经过脱细胞、脱脂、脱核酸处理的羊膜组织进行细胞固化，构建真皮成纤维细胞-羊膜组织的复合结构；所述真皮成纤维细胞为FI表型成人真皮成纤维细胞；步骤(2)：在扩增培养基中培养，获得所述真皮成纤维细胞皮片。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，真皮成纤维细胞的原代组织在原代培养基中进行培养；然后进行所述体外扩增，所述体外扩增的方法为消化-重悬-稀释接种；其中，所述消化的条件为：在胰蛋白酶-EDTA的作用下，37℃，消化2～3分钟；所述重悬的条件为：在含血清溶液中，37℃、机械吹打；所述稀释接种是指，在扩增培养基中，每1cm2培养面积接种104个细胞，进行传代培养。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述真皮成纤维细胞的原代组织在原代培养基中进行培养，所述原代培养基含有以下体积百分比的组分：70－86％DMEM高糖培养基、12－18％胎牛血清、0.5－1％非必需氨基酸、0.5－1％谷氨酰胺、和1－10％青链霉素。4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述真皮成纤维细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：方攀峰，陈爽，王志刚，
申请(专利权)人：江苏艾尔康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32