本发明专利技术公开了一种本发明专利技术涉及细胞领域，尤其涉及冻存液及其在视网膜色素上皮细胞冻存中的应用。本发明专利技术提供的组合物，能够显著性的视网膜色素上皮细胞冻存条件下的活率稳定性，而以其制得的细胞制剂，具有良好的吞噬能力，阳性标志物RPE65等也都表达，从而起到治疗视网膜病变的效果。网膜病变的效果。网膜病变的效果。
【技术实现步骤摘要】
冻存液及其在RPE细胞冻存中的应用
[0001]本专利技术涉及细胞
，尤其涉及冻存液及其在视网膜色素上皮细胞(RPE)冻存中的应用。
技术介绍
[0002]视网膜色素上皮细胞(RPE)，由一层整齐排列的六边形细胞组成，位于神经视网膜和脉络膜之间，其主要功能有吞噬光感受器外节(POS)，向周围感光细胞供给营养，还形成了血管外屏障(BRB)，阻止脉络膜血管中的液体进入视网膜，在视觉功能中起着重要作用。包括年龄相关性黄斑变性(age
‑
related macular degeneration,AMD)、色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa,RP)等在内的多种视网膜相关疾病都与RPE细胞病变相关，因其不可再生性，造成相关疾病的难以治疗。年龄相关性黄斑病(AMD)，又称老年黄斑病，该病的特征是RPE功能失调并最终丧失。RPE细胞是维持视网膜功能的关键细胞类型，损伤后无法再生，其损伤和缺失会继发地引起光感受器细胞耗竭而形成视网膜退行性病变，并最终导致不可逆转的失明。AMD在临床上分为干性(萎缩性)AMD(即dAMD)和湿性(渗出性)AMD(即wAMD)，成因复杂，发病机制尚不完全清楚。针对湿性黄斑病变，常用的治疗方法包括使用抗新生血管药物、光动力疗法和热激光疗法。目前还没有针对干性AMD的有效治疗方法。细胞疗法被认为是治疗AMD的希望，近年来的研究发现，通过在病损的视网膜部位移植正常的RPE细胞，可延缓、终止甚至逆转视网膜病变，进而防止视力恶化，甚或改善视觉功能。RPE细胞替代治疗已显示出其安全性和其初步有效性，细胞移植治疗被认为是治疗AMD有效的治疗手段。
[0003]将优质的RPE细胞进行冻存，必要时进行复苏后直接制备成注射液使用，是细胞的临床应用必须程序。细胞的冷冻保存是一种通过防止和减少低温损伤来保持细胞结构和功能的技术。目前还不存在一种冻存液及冻存方式适用于所有细胞的冻存。RPE细胞最常见的经典冻存液DMSO和FBS的组合，但是因FBS存在的问题例如血源性疾病污染的风险和伦理问题，其并不适合临床用细胞的冻存。实际在进行GMP大规模培养RPE细胞时，同样发现RPE细胞冻存比较困难。如何提高RPE细胞的活率，以及如何提高RPE细胞冻存后的复苏能力，是目前亟待解决的问题。
技术实现思路
[0004]鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供冻存液及其在RPE细胞冻存中的应用。该冻存液能够维持RPE细胞在冻存期间活性。
[0005]本专利技术公开了一种冻存液，其由如下体积份的液体组成：
[0006]0‑
10份的DMSO溶液、
[0007]10
‑
30份的人血白蛋白溶液、
[0008]0‑
10份的葡萄糖溶液、
[0009]4‑
8份的羟乙基淀粉溶液、
[0010]10
‑
30份的复方右旋糖苷40溶液、
[0011]0‑
4份的维生素C溶液和
[0012]适量其他溶剂；上述所有溶液的总体积份数为100份；其中
[0013]所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量体积百分数为20％；
[0014]所述葡萄糖溶液中葡萄糖的质量体积百分数为50％；
[0015]所述羟乙基淀粉溶液中羟乙基淀粉的质量体积百分数为6％；
[0016]所述复方右旋糖苷40溶液中右旋糖苷40的质量体积百分数为10％；
[0017]所述维生素C溶液中维生素的质量体积百分数为25％；
[0018]所述其他溶剂选自生理盐水、培养基、无菌水、无菌缓冲液中的至少一种。
[0019]本专利技术公开了一种冻存液，其由如下体积份的液体组成：
[0020]0‑
10份的DMSO溶液、
[0021]10
‑
30份的人血白蛋白注射液、
[0022]0‑
10份的葡萄糖注射液、
[0023]4‑
8份的羟乙基淀粉注射液、
[0024]10
‑
30份的复方右旋糖苷40注射液、
[0025]0‑
4份的维生素C注射液和
[0026]适量其他溶剂；上述所有溶液的总体积份数为100份；其中
[0027]所述DMSO溶液中DMSO的质量体积百分数大于99.9％，例如基本上是100％；
[0028]所述人血白蛋白注射液中人血白蛋白的质量体积百分数为20％；
[0029]所述葡萄糖注射液中葡萄糖的质量体积百分数为50％；
[0030]所述羟乙基淀粉注射液中羟乙基淀粉的质量体积百分数为6％，优选地，所述羟乙基淀粉注射液含有质量体积百分数为0.463％的醋酸钠、0.602％的氯化钠、0.03％的氯化钾、0.03％的氯化镁；
[0031]所述复方右旋糖苷40注射液中右旋糖苷40的质量体积百分数为10％，优先地，所述复方右旋糖苷40注射液含有质量体积百分数为0.02％的氯化钙、0.03％的氯化钾、0.6％的氯化钠和0.31％的乳酸钠；
[0032]所述维生素C注射液中维生素的质量体积百分数为25％，优选所述维生素C注射液含有碳酸氢钠、盐酸半胱氨酸、焦亚硫酸钠和依地酸二钠；
[0033]所述其他溶剂选自生理盐水、培养基、无菌水、无菌缓冲液中的至少一种。
[0034]在一个实施方式中，本专利技术所述的冻存液由如下体积份的液体组成：
[0035]5份的DMSO溶液、
[0036]20份的人血白蛋白溶液、
[0037]5份的葡萄糖溶液、
[0038]6份的羟乙基淀粉溶液、
[0039]20份的复方右旋糖苷40溶液、
[0040]2份的维生素C溶液和
[0041]42份的其他溶剂，所述其他溶剂选自生理盐水、培养基、无菌水、无菌缓冲液中的至少一种。
[0042]在一个实施方式中，本专利技术所述的冻存液由如下体积份的液体组成：
[0043]5份的DMSO溶液、
[0044]20份的人血白蛋白注射液、
[0045]5份的葡萄糖注射液、
[0046]6份的羟乙基淀粉注射液、
[0047]20份的复方右旋糖苷40注射液、
[0048]2份的维生素C注射液和
[0049]42份的生理盐水。
[0050]另一方面，本专利技术公开了如前所述的冻存液在视网膜色素上皮细胞冻存中的应用。
[0051]另一方面，本专利技术公开了一种视网膜色素上皮细胞冻存方法，其特征在于，以前所述的冻存液重悬视网膜色素上皮细胞。
[0052]本专利技术所述视网膜色素上皮细胞的密度为6.0
×
106个/mL。
[0053]另一方面，本专利技术公开了如前所述的冻存液在制备细胞制剂中的应用。
[0054]另一方面，本专利技术公开了一种细胞制剂，其包括：视网膜色素上皮细胞和如前所述的冻存液。在一个具体实施方案中，所述视网膜色素上皮本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种冻存液，其由如下体积份的液体组成：0
‑
10份的DMSO溶液、10
‑
30份的人血白蛋白溶液、0
‑
10份的葡萄糖溶液、4
‑
8份的羟乙基淀粉溶液、10
‑
30份的复方右旋糖苷40溶液、0
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4份的维生素C溶液和适量其他溶剂；上述所有溶液的总体积份数为100份；其中所述人血白蛋白溶液中人血白蛋白的质量体积百分数为20％；所述葡萄糖溶液中葡萄糖的质量体积百分数为50％；所述羟乙基淀粉溶液中羟乙基淀粉的质量体积百分数为6％；所述复方右旋糖苷40溶液中右旋糖苷40的质量体积百分数为10％；所述维生素C溶液中维生素的质量体积百分数为25％；所述其他溶剂选自生理盐水、培养基、无菌水、无菌缓冲液中的至少一种。2.如权利要求1所述的冻存液，其特征在于，由如下体积份的液体组成：5份的DMSO溶液、20份的人血白蛋白溶液、5份的葡萄糖溶液、6份的羟乙基淀粉溶液、20份的...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯丽，闫占海，冷晓燕，王云娟，王志刚，
申请(专利权)人：江苏艾尔康生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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