一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用技术

本发明专利技术公开了一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用，属于海洋生物高值化、深加工领域。本发明专利技术的南极磷虾活性寡肽的制备方法，包括脱脂磷虾粉原料的预处理；在适宜条件下加入蛋白酶酶解；酶解结束后灭酶；静置冷却过滤得上清液；加入活性炭进行脱色；将过滤后的脱色液进行干燥，得到南极磷虾活性寡肽。本发明专利技术制得的南极磷虾活性寡肽均一性高，颜色亮白，易溶于水且澄清透明。

A preparation method of active oligopeptide of Antarctic krill, the preparation method of active oligopeptide of Antarctic krill and its application

The invention discloses a preparation method of an Antarctic krill active oligopeptide, an Antarctic krill active oligopeptide prepared by the method and its application, which belongs to the field of high value and deep processing of marine organisms. The preparation method of the active oligopeptide of Antarctic krill includes pretreatment of raw material of defatted krill powder, enzymatic hydrolysis under suitable conditions, enzyme inactivation after enzymatic hydrolysis, static cooling and filtration to obtain supernatant, decolorization by adding activated carbon, and drying the filtered decolorizing solution to obtain the active oligopeptide of Antarctic krill. The prepared active oligopeptide of Antarctic krill has high homogeneity, bright white color, soluble in water and transparent.

【技术实现步骤摘要】
一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用
本专利技术属于海洋生物高值化、深加工领域，具体涉及一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用。
技术介绍
南极磷虾(Euphausiasuperba)是一种高等浮游甲壳动物，生物学分类为磷虾目(Euphausiacea)、磷虾科(Euphausiidae)、磷虾属(Euphausia)，主要生活在南纬50度以南浅层水域，体长约为4-6cm，全身较透明，用腮呼吸，靠身体两侧的附肢运动，在眼柄基部、头胸部第二至第七胸足两侧、腹片有球形发光器，每隔2-3秒能发出黄绿色的光，寿命为5-7年，捕食浮游植物和浮游动物。是目前世界上储藏量最丰富而又未大规模开发的生物资源，目前保守估计储存的生物量为6.5×108～10×108吨，其资源量具有压倒性优势。南极磷虾的资源开发始于上个世纪60年代末，到了70年代中期，逐渐实现了商业化捕捞。考虑到南极生态系统的脆弱性，南极海洋生物资源养护委员会(CCAMLR)认为，在不影响南极生态系统及南极磷虾资源再生的条件下，每年最大的建议捕捞量为4×106～6×106吨。中国对南极磷虾的研究起步较晚，从上个世纪90年代开始对南极磷虾资源进行调查和研究，2009年后正式开始商业化捕捞，目前中国南极磷虾年捕捞量为3×104～5×104吨。南极大磷虾被誉为“海洋蛋白资源库”，其水解产物中含有氨基酸多达18种，其中包括人体所必需的全部8种氨基酸(TAA)：甲硫氨酸、色氨酸、赖氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸，其含量占到南极大磷虾氨基酸总量的45.28％，其中，南极磷虾的赖氨酸含量高，比金枪鱼、虎纹虾及牛肉的都要高。其余10种为非必需氨基酸(NEAA)，完全符合FAO/WHO指出了的理想蛋白质的氨基酸组成模式：EAA:NEAA≥60％，EAA:TAA≈40％(南极磷虾的氨基酸组成，这两组的比值分别是45％、82％)。传统的脱脂南极磷虾粉是南极磷虾粉萃取油脂后得到的，蛋白质含量在65-70％之间。因为含有纤维素、甲壳素等一些多糖物质和灰分，多数作为水产饲料。磷虾蛋白粉的优势没有得到充分的发挥，产品售价不高。寡肽(Oligo-peptide)是由2-12个氨基酸组合而成的蛋白质前体，或者是将蛋白质降解到2-12个氨基酸组成的蛋白质体，也称之为小肽、短肽、低聚肽，分子量小于1000Da，是蛋白质消化产物的最终主要形式，具有多种生物活性和功能，如降血压，降血糖，抗氧化，抗肿瘤，提高免疫力等，已被广泛应用于医药、功能食品、化妆品等多个领域。目前磷虾肽制备采用的酶解法多易富集盐份灰分。国内专利CN106381322A以南极磷虾粉为原料制备南极磷虾活性肽，通过纳滤装置脱盐，国内专利CN104263787B采用离子交换柱为操作单位的移动床装置进行脱灰，虽其效果显著但成本高，操作相对复杂。
技术实现思路
针对现有技术的上述缺陷和问题，本专利技术的目的是提供一种活性南极磷虾寡肽的简单制备方法，是一种脱脂南极磷虾粉的高值化利用方法，该制备方法操作简便、工艺简单，适宜产业化生产，所得南极磷虾活性寡肽均一性高、灰分低、重金属含量低、盐含量低、且平均分子量≦400Da，其中分子量在1000Da以下的寡肽所占比例为80％以上，产率高达85％以上，脱脂磷虾粉的蛋白质提取率95％以上。为了达到上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种南极磷虾活性寡肽的制备方法，包括脱脂磷虾粉原料的预处理；在适宜条件下加入蛋白酶酶解；酶解结束后灭酶；静置冷却过滤得上清液；加入活性炭进行脱色；将过滤后的脱色液进行干燥，得到南极磷虾活性寡肽，具体步骤如下：(1)原料预处理：将脱脂磷虾粉与水按照1:10-1:100(w/w)比例混合均匀，洗涤后，收集固体；(2)酶解：将预处理后的脱脂磷虾粉(按干重计)与水1:2-1:50(w/w)的比例混合，向混合液中加入蛋白酶进行酶解；(3)灭酶：酶解后，80-100℃，灭酶5-30min；(4)过滤：待灭酶后的溶液冷却后进行过滤，分离固体残渣和滤液，所述的滤液为从脱脂磷虾粉中酶解得到的南极磷虾蛋白肽溶液，颜色为深棕；(5)脱色：在上述滤液添加0.2％-5％(w/w)的活性炭进行脱色处理；(6)过滤：过滤除去活性炭，得到脱色液，所得的滤饼为活性炭回收后可再利用，滤液为脱色后的南极磷虾蛋白肽溶液，略带黄色；(7)干燥：将上述脱色液干燥得到南极磷虾活性寡肽。在上述方案的基础上，步骤(1)中脱脂磷虾粉与水的用量比为1:50，分2～6次洗涤。在上述方案的基础上，步骤(2)中的蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、复合蛋白酶中的至少一种。在上述方案的基础上，步骤(2)中酶解为10-70℃，保温2-12h。在上述方案的基础上，步骤(4)中过滤方式为真空抽滤，真空度：0.08–-0.01MPa；抽滤时间为5-15min。在上述方案的基础上，步骤(5)中的脱色处理为30℃、40～50min。在上述方案的基础上，步骤(6)中过滤方式为真空抽滤，真空度：0.08–-0.01MPa；抽滤时间：10-20min。在上述方案的基础上，步骤(7)中的干燥为喷雾干燥或冷冻干燥。上述方法制备的南极磷虾活性寡肽。在上述方案的基础上，所述的南极磷虾活性寡肽在医药、功能食品、化妆品中的应用。本专利技术所述制备南极磷虾活性寡肽的方法中选用的碱性蛋白酶购自河南仰韶生化工程有限公司、南宁庞博生物工程有限公司、河北格贝达生物科技有限公司；酶解时间在2-12h效果最好，活性炭添加量为0.2％-5％，脱色效果最好。不需要在酶解前调节pH值等操作步骤，简化了操作程序，使操作工艺更加简单易行，耗时更短，避免了使用氢氧化钠调节酶解液的pH值而引入更多的钠盐，影响最终多肽产品的口味，同时原料的预处理有效的脱除了产品中的灰分和降低了产品盐含量，避免了磷虾肽精制时脱盐、脱灰等步骤以及减少脱色活性炭的用量，制备的脱脂南极磷虾粉水解多肽具有抗氧化、降血压等多种活性，分子量低、溶解效果好、易吸收、同时其具有钾钙含量高、钠含量低，营养元素高等特点，具有很高的实际应用价值。本专利技术所具有的有益效果(1)本专利技术中原料未经预处理的灰分为10-15％，经预处理后灰分含量≦5％，可脱除30-90％盐，使F-含量为30-80μg/g、Na+含量≦80mg/Kg、K+含量在150-200mg/Kg、Ca2+≥3500mg/Kg、Mg2+在3500-5000mg/Kg。(2)本专利技术制得的南极磷虾活性寡肽均一性高，颜色亮白，易溶于水且澄清透明。(3)本专利技术制得的南极磷虾活性寡肽产品回收率85％以上，脱脂磷虾粉蛋白提取率95％以上，分子量在1000Da以下的寡肽所占比例为80％以上，增加了脱脂南极磷虾粉的利用率，提高了南极磷虾产品的附加值。(4)本专利技术制得的南极磷虾活性寡肽产品品质高、得率高，且制备方法易操作、工艺简单易于实现产业化，经济效益和社会效益显著。附图说明图1：为本专利技术的工艺路线示意图。图2：本专利技术制备的磷虾肽的分子量分布图，其中分子量为12384Da、6512Da、1423Da、451Da和189Da的曲线分别为相应分子量标准品的色谱图。图3：为活性炭用量对脱色率和蛋白质损失率的影响，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种南极磷虾活性寡肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)原料预处理：将脱脂磷虾粉与水按照1:10‑1:100比例混合均匀，洗涤后，收集固体；(2)酶解：将预处理后的脱脂磷虾粉(按干重计)与水1:2‑1:50的比例混合，向混合液中加入蛋白酶进行酶解；(3)灭酶：酶解后，80‑100℃，灭酶5‑30min；(4)过滤：待灭酶后的溶液冷却后进行过滤，分离固体残渣和滤液；(5)脱色：在上述滤液添加0.2％‑5％的活性炭进行脱色处理；(6)过滤：过滤除去活性炭，得到脱色液；(7)干燥：将上述脱色液干燥得到南极磷虾活性寡肽。

【技术特征摘要】
1.一种南极磷虾活性寡肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)原料预处理：将脱脂磷虾粉与水按照1:10-1:100比例混合均匀，洗涤后，收集固体；(2)酶解：将预处理后的脱脂磷虾粉(按干重计)与水1:2-1:50的比例混合，向混合液中加入蛋白酶进行酶解；(3)灭酶：酶解后，80-100℃，灭酶5-30min；(4)过滤：待灭酶后的溶液冷却后进行过滤，分离固体残渣和滤液；(5)脱色：在上述滤液添加0.2％-5％的活性炭进行脱色处理；(6)过滤：过滤除去活性炭，得到脱色液；(7)干燥：将上述脱色液干燥得到南极磷虾活性寡肽。2.根据权利要求1所述南极磷虾活性寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)中脱脂磷虾粉与水的用量比为1:50，分2～6次洗涤。3.根据权利要求1所述南极磷虾活性寡肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)中的蛋白酶为碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、复合蛋白酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王艳美，李莉，毕学一，王尚龙，张曾亮，李八方，邹圣灿，
申请(专利权)人：青岛琛蓝医药科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37