一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取及检测方法，该提取方法包括(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将氯仿层B蒸发除去溶剂，即得到南极磷虾非酚性弱碱性生物碱样品。本发明专利技术首次对南极磷虾生物碱进行提取检测，分离得到三种活性生物碱DTDP、Cyclo(Pro‑Leu)和Cyclo(Pro‑Phe)。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取及检测方法，属食品、药品和化工领域。
技术介绍
南极磷虾(Euphausia superba Dana)，隶属节肢动物门、甲壳纲、磷虾目，体型较小，一般体长约5.5～6.0cm，体重约2g左右。以浮游植物为食的南极磷虾是鲸、海豹、企鹅等肉食动物的主要食物，也是南极食物链中的基础。南极磷虾是地球上数量最大繁衍最成功的单种生物资源之一，其生物蕴藏量约为6.5×108～10×108吨，最新估算量为3.79×108吨。在粮食短缺，世界渔业资源萎缩，尤其是中国近海渔业开发过度的情况下，南极磷虾无疑是一种具有巨大开发潜力的境外渔业资源。南极磷虾营养丰富，富含活性物质。南极磷虾蛋白及酶类、虾青素、甲壳素等均已有研究报道。随着南极磷虾研究的深入，南极磷虾产品也由初级的饲料虾粉等向高端的保健、医药领域发展。加快南极磷虾研究进度有利于我国在南极磷虾产业方面占据优势地位。生物碱主要来自于植物，又称植物碱，具有镇痛、缓解痉挛、抗菌、消炎、降血压、平喘、抗肿瘤等功效。动物源的生物碱除了两栖类动物外，只在一些海洋生物，如海绵、珊瑚、海洋微生物以及口蛄虾中存在，其中口蛄虾生物碱的结构还未确定。海洋生物因其特殊的生存环境而有不同于陆生生物的代谢途径，一直是发现新药先导的的天然宝库。世界上有70％的药物来源于海洋。南极磷虾中生物活性物质丰富，与其生存的低温、低盐的特殊海洋生存环境不无关系。虽有推测南极磷虾中含有生物碱，但并未清楚生物碱的种类，而且目前关于南极磷虾中的生物碱还未有相关文献或专利报道。因此，研究南极磷虾生物碱的种类以及生物碱的提取及检测方法，对南极磷虾资源的开发利用具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取及检测方法。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：本专利技术的第一个目的是提供一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取方法，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，即得到南极磷虾非酚性弱碱性生物碱样品。步骤(1)中，南极磷虾在接触甲醇提取前先经过冷冻干燥处理。由于南极磷虾体内的酶具有很高的活性，南极磷虾被捕捞后，其体内的内源消化酶能高活性的降解蛋白质，使死亡后的组织快速分解，加速了南极磷虾的自溶、腐败和变质；通过对南极磷虾进行冷冻干燥预处理，能够防止南极磷虾自溶，有效的保持南极磷虾的品质。步骤(1)中，所述南极磷虾与甲醇加入量的比为1g:(6-10)mL，提取温度为75～85℃，优选80℃，甲醇提取的次数为7-9次，每次浸提的时间为1-2h，提取方式可以为回流提取或搅拌提取。甲醇回流提取的次数选为7-9次，能够尽可能多的分离提取出非酚性弱碱性生物碱。步骤(2)中，所述甲醇膏与乙醚加入量的比为1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次数为4-6次，每次浸提的时间为0.5-1h。乙醚的提取次数选为4-6次，不仅有效分离出南极磷虾中的非酚性弱碱性生物碱，还能尽量减少提取次数的增加所带来的能源浪费。步骤(3)中，不同条件所得乙醚浸膏量不同，乙醚复溶时加入乙醚的量可以根据实际情况进行调整。一般所述乙醚浸膏与乙醚的加入量比为1g：8～12mL(优选1g:10mL)，乙醚膏先用适量乙醚溶解，再与酸水萃取，可以增加与酸水的接触面积，保证碱性物质充分溶于酸水层。乙醚很容易旋蒸，即便全部整除，花费的时间也较短。其次实验发现，用旋蒸保留的乙醚不能使乙醚浸提物全部溶解。步骤(3)中，所述酸水溶液为硫酸水溶液或者酒石酸水溶液，优选的为硫酸水溶液；所述乙醚浸膏液与酸水溶液加入量的体积比为1:(10-30)。所述硫酸水溶液的体积分数为1～3％，优选的，所述硫酸水溶液的体积分数为2％，选择该浓度的硫酸水溶液既能保证足够的酸性以去除酸性杂质，又防止硫酸浓度过高引起目的物的氧化分解。步骤(4)中，所述酸水相和氯仿的体积比为1～2：1，优选的，所述酸水层和氯仿的体积比为1：1。氯仿与酸水相的搅拌萃取次数为6-8次，每次搅拌时间为1～1.5h(优选搅拌时间为1h)，充分混匀，尽可能使目标物质溶于氯仿层。本专利技术的萃取工序的萃取溶剂为氯仿时，不仅在萃取效率、分液性方面而且在萃取溶剂的易获得性方面，特别优选。步骤(5)中，所述氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1～2：1，优选的，所述氯仿层A和氢氧化钠水溶液的体积比为1：1。所述氢氧化钠水溶液的体积分数为1～3％。加入氯仿与氢氧化钠水溶液的搅拌萃取次数为6-8次，每次搅拌时间为1～1.5h(优选为1h)，充分混匀，尽可能除去弱酸性杂质。本专利技术中的搅拌方式为机械搅拌或磁力搅拌。本专利技术中采用分液漏斗进行静置分液的方式进行萃取。本专利技术的第二个目的是提供采用上述提取方法制备得到的南极磷虾非酚性弱碱性生物碱样品，其中，所述样品包含三种非酚性弱碱性生物碱，分别是5,10-二甲氧基-2,3,7,8-四氢-1H,6H-吡咯并[1,2-a；1’,2’-d]吡嗪(5,10-diethoxy-2,3,7,8-tetrahydro-1H,6H-dipyrrolo[1,2-a；1′,2′-d]pyrazine,简称DTDP)、吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮,六氢-3-(2-甲基丙基){Cyclo(Pro-Leu)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取方法，其特征是，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，即得到南极磷虾非酚性弱碱性生物碱样品。

【技术特征摘要】
1.一种南极磷虾非酚性弱碱性生物碱的提取方法，其特征是，步骤如下：(1)将南极磷虾与甲醇接触而进行提取，过滤，得滤液；滤液蒸发浓缩得到甲醇膏；(2)将步骤(1)中的甲醇膏与乙醚接触而进行浸提，过滤，得乙醚液；乙醚液蒸发后得到乙醚浸膏；(3)将步骤(2)中的乙醚浸膏与乙醚接触而进行溶解，得乙醚浸膏液，使其与酸水溶液接触而进行萃取，萃取得到酸水相；(4)将步骤(3)中的酸水相与氯仿接触而进行萃取，分离得到氯仿层A；(5)将步骤(4)中的氯仿层A与氢氧化钠水溶液接触而进行萃取，分离得到碱水层和氯仿层B；(6)将步骤(5)中的氯仿层B蒸发除去溶剂，即得到南极磷虾非酚性弱碱性生物碱样品。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(1)中，南极磷虾在接触甲醇提取前先经过冷冻干燥处理。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(1)中，所述南极磷虾与甲醇加入量的比为1g:(6-10)mL，提取温度为75～85℃，甲醇提取的次数为7-9次，每次浸提的时间为1-2h，提取方式为回流提取或搅拌提取。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(2)中，所述甲醇膏与乙醚加入量的比为1g:(4-6)mL，加入乙醚浸提的次数为4-6次，每次浸提的时间为0.5-1h。5.如权利要求1所述的提取方法，其特征是：步骤(3)中，所述乙醚浸膏液与酸水溶液加入量的体积比为1:(10-30)；优选的，所述酸水溶液为硫酸水溶液或酒石酸水溶液，进一步优选的，所述硫酸水溶液的体积分数为1～3％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翩翩，刘代成，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37