一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法，步骤如下：取南极磷虾，将组织捣碎，加入二氯甲烷、甲醇和丙酮的混合溶剂，搅拌提取，得提取液；过滤，收集滤液，浓缩，即得高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂；所述混合溶剂中二氯甲烷、甲醇和丙酮的体积比为(0.8‑1.2)：(0.8‑1.2)：(1.8‑2.2)。本发明专利技术还公开了从南极磷虾油脂中分离制备虾青素一酯和虾青素二酯标准品的方法，以及南极磷虾油脂中虾青素及其酯的检测方法。本发明专利技术的南极磷虾油脂的提取工艺步骤简单，易于实现工业化生产，可以在工业化生产中可以将虾青素及其酯的提取效率发挥到更大程度。

【技术实现步骤摘要】
一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法
本专利技术涉及一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法，属于食品和化工

技术介绍
南极磷虾(Euphausiasuperba)又名大磷虾或南极大磷虾，隶属节肢动物门、甲壳纲、磷虾目，是南大洋生态系统食物链中的关键物种，是地球上数量最大、繁衍最成功的单种生物资源之一。南极磷虾生物蕴藏量最新估计为3.42～5.36亿吨，年可持续捕捞量将近1亿吨，相当于目前全世界鱼类和其他水产捕获量的总和，世界各国都将南极磷虾作为重要的战略生物资源。南极磷虾油脂是大自然馈赠给人类的天然健康食品，含有其他食品不能替代的功效。临床证实，南极磷虾油脂具有降血脂、降血糖、降血压、穿越血脑屏障营养及活化脑部细胞和神经的作用，能够预防和治疗脑血管疾病，还可以起到抗菌消炎，预防癌症的发生发展，延缓衰老，调节内分泌等多重功效，因此，南极磷虾油脂在保健品和化妆品制造业都具有广阔的开发与利用前景。目前对于南极磷虾油脂提取的研究报道主要有：中国专利“从南极磷虾中提取高磷脂含量的南极磷虾油的方法”(CN102041166B)，其公开的提取方法为：先将南极磷虾在55～75℃条件下干燥制成含水8～10％的干虾，然后在25～55℃条件下用非极性有机溶剂反复萃取干虾中的油脂。但该提取方法需要在提取油脂前对南极磷虾进行干燥除水，不仅消耗大量的能量，而且加热过程中容易引起磷虾自溶，降低了油脂质量。中国专利“提取南极磷虾油脂及分离生物活性物质的方法”(CN102676291A)对于南极磷虾油脂的提取采用的是低温混合溶剂提取，将疏水性有机溶剂和亲水性有机溶剂按比例混合后直接加入到南极磷虾中进行搅拌提取。该方法的油脂得率和提取率比较高，但是，大量的(超过40％)虾青素仍存留在提取南极磷虾油脂的残渣中，需要再通过多相盐析萃取对留存的虾青素进行进一步的提取分离。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术的目的是提供一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法。本专利技术采用不同极性的混合有机溶剂从南极磷虾中提取得到油脂，油脂的提取率高，油脂中虾青素及其酯的含量也得到极大的提高。为实现上述目的，本专利技术采用下述技术方案：本专利技术第一方面，提供一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法，步骤如下：取南极磷虾，将组织捣碎，加入二氯甲烷、甲醇和丙酮的混合溶剂，搅拌提取，得提取液；过滤，收集滤液，浓缩，即得高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂。上述提取方法中，所用到的南极磷虾为新捕捞的南极磷虾或经冷冻处理的南极磷虾。所述冷冻处理的温度为-45℃～-80℃；将南极磷虾在-45℃～-80℃条件下冷冻处理可以极大的减少南极磷虾虾青素被氧化的速度，进而提高提取得到的南极磷虾油脂中虾青素及其酯的含量。上述提取方法中，南极磷虾的组织捣碎处理，一方面可以增加样品的比表面积；另一方面有助于组织在搅拌下运动，增加溶剂与物料的接触机会，使样品与溶液充分混匀、充分提取。上述提取方法中，所述混合溶剂中二氯甲烷、甲醇和丙酮的体积比为(0.8-1.2)：(0.8-1.2)：(1.8-2.2)。优选的，混合溶液中，二氯甲烷、甲醇和丙酮的体积比为1：1：2。上述提取方法中，混合溶剂与南极磷虾加入量的比为(8-12)ml：1g；优选为：10ml：1g。混合溶剂的加入量会直接影响南极磷虾油脂的提取效果，若混合溶剂的加入量过少，则会导致油脂溶解不完全，降低了南极磷虾油脂的提取率；若混合溶剂的加入量过多，则会造成提取溶剂的浪费，以及增加后续浓缩处理的时间，进而增加了南极磷虾油脂提取的成本。上述提取方法中，搅拌提取的温度为20-30℃，每次搅拌提取的时间为1-2h，重复提取2-4次；优选的，每次搅拌提取的时间为1h，重复提取2-3次。本专利技术对搅拌提取的次数和搅拌提取时混合溶剂的加入量进行了优化考察，结果发现，采用本专利技术的搅拌提取条件可以将南极磷虾中的油脂最大限度的提取出来，同时提取溶剂的使用量得到控制，降低了处理成本。上述提取方法中，浓缩处理的条件为：40-50℃下旋转蒸发至干。本专利技术第二方面，提供从上述南极磷虾油脂中分离制备虾青素一酯和虾青素二酯标准品的方法，其中，虾青素一酯标准品的制备步骤如下：(1)按上述方法提取南极磷虾油脂；(2)向南极磷虾油脂中加入丙酮，搅拌提取至滤渣无色，收集滤液合并，将溶液进行浓缩，得到深红色虾油；(3)将步骤(2)得到的虾油采用硅胶柱层析进行分离纯化，先用石油醚淋洗，然后改用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，逐渐从乙酸乙酯:石油醚＝10:1，9:1，8:1，7:1……，顺梯度淋洗直到1:1；将1:1梯度时接下来的粉红色条带进行浓缩，即得到虾青素一酯的标准品。虾青素二酯标准品的制备步骤如下：(a)按上述方法提取南极磷虾油脂；(b)向南极磷虾油脂中加入无水乙醇，搅拌提取至滤渣无色，收集滤液合并，将溶液进行浓缩，得到深红色虾油；(c)将步骤(b)得到的虾油采用硅胶柱层析进行分离纯化，先用石油醚淋洗，然后改用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，逐渐从乙酸乙酯:石油醚＝1:10，9:1，顺梯度淋洗直到1:1；将7:1梯度时接下来的粉红色条带进行浓缩，即得到虾青素二酯的标准品。步骤(2)中，南极磷虾油脂与丙酮加入量的比为1g：4-6ml；优选为1g：5ml。步骤(3)中，淋洗用石油醚的量与虾油的体积比为120-180：1；步骤(3)中，每个梯度的乙酸乙酯-石油醚淋洗液的用量与虾油的体积比为480-520：1；优选为500：1。洗脱流速为1.2-1.4ml/min，优选为1.3ml/min。步骤(b)中，南极磷虾油脂与无水乙醇加入量的比为1g：7-9ml；优选为1g：8ml。步骤(c)中，淋洗用石油醚的量与虾油的体积比为120-180：1；每个梯度的乙酸乙酯-石油醚淋洗液的用量与虾油的体积比为480-520：1；优选为500：1。洗脱流速为1.2-1.4ml/min，优选为1.3ml/min。本专利技术第三方面，提供上述南极磷虾油脂中虾青素及其酯的检测方法，步骤如下：(1)按上述方法提取南极磷虾油脂；(2)将南极磷虾油脂用三氯甲烷溶解，制成样品溶液，将虾青素标准品和虾青素酯(虾青素一酯和虾青素二酯)标准品用三氯甲烷溶解，制成标准品溶液，以体积比为7：3的正己烷-丙酮混合溶液作为展开剂，进行高效薄层层析，并薄层扫描计算南极磷虾油脂中虾青素及其至酯的含量。步骤(2)中，薄层扫描的条件为：D2&W下扫描波长476nm，扫描狭缝6.00*0.90nm2,扫描速度40mm·s-1，分辨率100μm·step-1。本专利技术的有益效果：(1)本专利技术的提取对象为南极磷虾鲜虾(即新捕捞的南极磷虾)或经冷冻处理的南极磷虾，未经干燥处理，样品中含水量较多，若单采用疏水性溶剂或整体极性偏小的混合溶剂进行油脂提取时，容易出现乳化现象；若为避免出现乳化现象，而简单的增加混合溶剂中亲水性溶剂的比例，则可能会引入大量的水溶性杂质。因此，由于提取对象的特殊性，直接从南极磷虾鲜虾或经冷冻处理的南极磷虾中提取高虾青素及其酯含量的油脂，其对提取溶剂的要求更为严苛。本专利技术综合考虑虾青素及其酯的理化性能和结构特点，设计了多组不同溶剂组成的混合提取溶剂，结果发现不同组成的提取溶剂其提取效果差别较大，采本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法，其特征在于，步骤如下：取南极磷虾，将组织捣碎，加入二氯甲烷、甲醇和丙酮的混合溶剂，搅拌提取，得提取液；过滤，收集滤液，浓缩，即得高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂。

【技术特征摘要】
1.一种高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂的提取方法，其特征在于，步骤如下：取南极磷虾，将组织捣碎，加入二氯甲烷、甲醇和丙酮的混合溶剂，搅拌提取，得提取液；过滤，收集滤液，浓缩，即得高虾青素及其酯含量的南极磷虾油脂。2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所用到的南极磷虾为新捕捞的南极磷虾或经冷冻处理的南极磷虾；优选的，冷冻处理的温度为-45℃～-80℃。3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述混合溶剂中二氯甲烷、甲醇和丙酮的体积比为(0.8-1.2)：(0.8-1.2)：(1.8-2.2)；优选的，混合溶液中，二氯甲烷、甲醇和丙酮的体积比为1：1：2。4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，混合溶剂与南极磷虾加入量的比为(8-12)ml：1g；优选为：10ml：1g。5.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，搅拌提取的温度为20-30℃，每次搅拌提取的时间为1-2h，重复提取2-4次。6.如权利要求5所述的提取方法，其特征在于，每次搅拌提取的时间为1h，重复提取2-3次。7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于，浓缩处理的条件为：40-50℃下旋转蒸发至干。8.一种制备虾青素一酯和虾青素二酯标准品的方法，其特征在于，虾青素一酯标准品的制备步骤如下：(1)按权利要求1-7任一项所述的提取方法提取南极磷虾油脂；(2)向南极磷虾油脂中加入丙酮，搅拌提取至滤渣无色，收集滤液合并，将溶液进行浓缩，得到深红色虾油；(3)将步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹成文，刘代成，
申请(专利权)人：山东师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37