复制型重组人41型腺病毒载体系统及其应用技术方案

提供一种复制型人41型腺病毒(HAdV‑41)载体系统及重组病毒构建方法。载体系统包括腺病毒质粒pKAd41P5A‑CG。该质粒含有人工改造的HAdV‑41基因组：E1区和E4区启动子由HAdV‑5对应序列替换；E3区由HAdV‑5的ADP基因替换；在E1B55K和pIX基因之间添加人巨细胞病毒启动子和绿色荧光蛋白编码区(pGFP)，pGFP两端各含有一个MluI酶切位点。设计引物，PCR扩增外源基因序列(pTransgene)，该片段两端含有MluI位点并且与pKAd41P5A‑CG MluI位点两侧存在约30bp重叠区。使用MluI酶切/连接，或通过Gibson组装方法，可将pKAd41P5A‑CG中pGFP替换为pTransgene，制备携带外源基因的腺病毒质粒；将PmeI线性化的质粒转染包装细胞，能够拯救复制型HAdV‑41重组病毒。预计本载体系统可以用于制备人或哺乳动物的口服载体疫苗。

Reproductive recombinant human adenovirus type 41 vector system and its application

A replicative human adenovirus type 41 (HAdV 41) vector system and a method for constructing recombinant virus are provided. The vector system includes adenovirus plasmid pKAd41P5A CG. The plasmid contains the artificially modified AdV 41 genome: the promoters of E1 and E4 regions are replaced by the corresponding sequence of HAdV 5; the promoters of E3 regions are replaced by the ADP gene of HAdV 5; and the promoters of human cytomegalovirus and the green fluorescent protein coding region (pGFP) are added between E1B55K and pIX genes. Each end of pGFP contains a MluI cleavage site. Designed primers and amplified the exogenous gene sequence (pTransgene) by PCR. The fragment contained MluI loci at both ends and had about 30 BP overlap with pKAd41P5A CG MluI loci. Using MluI digestion/ligation or Gibson assembly method, pGFP in pKAd41P5A CG can be replaced by pTransgene to prepare adenovirus plasmid carrying exogenous gene. Transfection of PmeI linearized plasmid into packaging cells can save replicated HAdV 41 recombinant virus. It is expected that this vector system can be used to prepare oral vector vaccine for human or mammals.

【技术实现步骤摘要】
复制型重组人41型腺病毒载体系统及其应用
本专利技术属于重组疫苗领域，具体而言，本专利技术涉及一种复制型重组腺病毒HAdV-41载体系统及其应用。
技术介绍
口服疫苗与传统的肌注疫苗相比具有多个优点。粘膜是多数病原体进入机体的第一道屏障，而口服疫苗引发的粘膜免疫能够将病原体阻止在入侵的第一步。口服免疫不需要注射器，接种时也基本不需医护人员具体操作，这在疾病爆发流行、医护人员紧缺时能够俭省大量的医疗资源；对于难以进行人工捕获的野生动物，口服疫苗可以做成饵料投放到野外对其进行免疫。另外，多数情况下口服疫苗并不需要严格的纯化，节约了成本[1-3]。虽然目前商业化的疫苗多是肌注疫苗，但口服疫苗代表着疫苗研究的重要方向。人腺病毒41型(HAdV-41)具有开发为口服疫苗载体的潜能。腺病毒载体具有基因转移效率高、生产纯化方便、安全性好等诸多优点，是基因治疗临床试验中使用最多的基因转移载体；在重组疫苗研究中也得到广泛应用。但常用的腺病毒载体是基于人腺病毒5型(HAdV-5)的基因组构建的，HAdV-5的靶器官是呼吸道，对胃肠道的基因转移效率低。人F组腺病毒包括2个成员HAdV-40、HAdV-41本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复制型重组腺病毒HAdV‑41载体系统，其包括腺病毒质粒pKAd41P5A‑CG。

【技术特征摘要】
1.一种复制型重组腺病毒HAdV-41载体系统，其包括腺病毒质粒pKAd41P5A-CG。2.根据权利要求1所述的复制型重组腺病毒HAdV-41载体系统，其特征在于：所述腺病毒质粒pKAd41P5A-CG含有人工改造的HAdV-41基因组；同时还含有在原核细胞中进行质粒复制所需的pBR322的复制起点、卡那霉素抗性基因。3.根据权利要求1或2所述的腺病毒质粒pKAd41P5A-CG含有的人工改造的HAdV-41基因组，其特征在于：HAdV-41的E1A启动子被替换为HAdV-5E1A的启动子；HAdV-41的E1B的启动子被替换为HAdV-5E1B的启动子；HAdV-41的E3区编码基因被删除，由HAdV-5ADP基因取代；HAdV-41的E4的启动子被替换为HAdV-5E4启动子。4.根据权利要求1或2所述的腺病毒质粒pKAd41P5A-CG，...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁茁壮，邹小辉，郭小娟，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京,11