一种EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体构建及腺病毒包装方法技术

本发明专利技术提供了一种EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体构建及腺病毒包装方法，属于基因工程技术领域。一种EP153R基因与EP402R基因过表达腺病毒载体pAD‑Shuttle‑CMV‑CTLA4‑EP153R‑EP402R，以pShuttle‑CMV真核表达载体为基础，在多克隆位点处引入CTLA4、EP153R、EP402R基因。本发明专利技术还提供了共表达EP153R、EP402R基因的重组腺病毒，利用构建得到的pAD‑Shuttle‑CMV‑CTLA4‑EP153R‑EP402R载体实现腺病毒包装过程，得到能够直接感染动物或真核细胞的腺病毒，从而实现了EP153R与EP402R基因在真核细胞中共表达的目的，为研究实现EP153R与EP402R基因共表达的腺病毒疫苗奠定了基础。

Construction of recombinant adenovirus vector co-expressing EP153R and EP402R gene and packaging method of adenovirus

The invention provides a method for constructing recombinant adenovirus vector co-expressing EP153R and EP402R genes and packaging adenovirus, belonging to the field of genetic engineering technology. An adenovirus vector pAD Shuttle CMV CTLA4 EP153R EP402R was overexpressed with EP153R gene and EP402R gene. Based on pShuttle CMV eukaryotic expression vector, CTLA4, EP153R and EP402R genes were introduced at multiple cloning sites. The present invention also provides recombinant adenoviruses co-expressing EP153R and EP402R genes, realizes the packaging process of adenoviruses by using the constructed pAD Shuttle CMV CTLA4 EP153R EP402R vector, and obtains adenoviruses that can directly infect animals or eukaryotic cells, thus realizes the co-expression of EP153R and EP402R genes in eukaryotic cells, and realizes the co-expression of EP153R and EP402R genes in eukaryotic cells. The expressed adenovirus vaccine laid the foundation.

【技术实现步骤摘要】
一种EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体构建及腺病毒包装方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉一种非洲猪瘟病毒EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体、构建方法及腺病毒包装方法。
技术介绍
非洲猪瘟(africanswinefever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病。其特征为病程短、病死率高、临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟，表现高热、皮肤充血、流产、水肿及脏器出血。ASFV是一种直径为200nm的正二十面体病毒，病毒含有直径70～100nmDNA核心，外周是直径172～191nm二十面体的衣壳和含类脂的囊膜。ASFV基因组为末端共价闭合的单分子线状双链DNA，大小170～190kb(随毒株的不同而有差异)，末端交互连接，有末端倒置重复序列。基因组可以编码150～200种蛋白质，编码这些蛋白质的许多基因已被克隆和表达。CTLA4(cytotoxicT-lymphocyteassociatedprotein4)基因(NC_010457.5)即细胞毒性T细胞相关抗原-4：属于免疫球蛋白超家族,主要在活化的C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种非洲猪瘟病毒EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体，其特征在于，以pShuttle‑CMV真核表达载体为基础，在多克隆位点处引入CTLA4、EP153R、EP402R基因以构建重组腺病毒载体pAD‑Shuttle‑CMV‑CTLA4‑EP153R‑EP402R；所述CTLA4基因、EP153R基因、EP402R基因分别具有如序列表中Seq ID No.1、Seq ID No.2 、Seq ID No.3所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种非洲猪瘟病毒EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体，其特征在于，以pShuttle-CMV真核表达载体为基础，在多克隆位点处引入CTLA4、EP153R、EP402R基因以构建重组腺病毒载体pAD-Shuttle-CMV-CTLA4-EP153R-EP402R；所述CTLA4基因、EP153R基因、EP402R基因分别具有如序列表中SeqIDNo.1、SeqIDNo.2、SeqIDNo.3所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的非洲猪瘟病毒EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体，其特征在于，所述多克隆位点为KpnI和HindIII的酶切位点。3.一种非洲猪瘟病毒EP153R与EP402R基因共表达重组腺病毒载体的构建方法，包括以下步骤：1)针对EP153R基因、EP402R基因，通过人工合成，获取优化后的基因片段，并分别在EP153R基因、EP402R基因序列两端添加相应的酶切位点与同源区；CTLA4基因序列两端添加相应的酶切位点与同源区；2）用限制性内切酶KpnI和HindIII对pShuttle-CMV载体进行双酶切，得到线性化pShuttle-CMV载体；3）将所述步骤2）得到的线性化pShuttle-CMV载体与CTLA4-EP153R、EP402R进行同源重组，得到pShuttle-CMV-CTLA4...

【专利技术属性】
技术研发人员：张泉，朱立麒，谢灵志，郭晓宇，朱鸿飞，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32