高密度长期培养表达抗VEGF人源化单克隆抗体重组CHO细胞的方法技术

本发明专利技术公开了高密度长期培养表达抗VEGF人源化单克隆抗体重组CHO细胞的方法，涉及高密度长期培养CHO细胞生产抗VEGF人源化单克隆抗体的方法。步骤：(一)准备工作；(二)接种细胞；(三)细胞截留换液操作：第一阶段：细胞增殖阶段，该阶段的目的是促进细胞的快速增殖，在达到所需的细胞浓度时进入第二阶段。第二阶段：抗VEGF人源化单克隆抗体表达阶段在该阶段。本发明专利技术有效实现在长期高密度培养CHO细胞过程中可以在线进行中空纤维柱的清洗，有效降低堵塞的发生，达到长期培养的目的。

【技术实现步骤摘要】
高密度长期培养表达抗VEGF人源化单克隆抗体重组CHO细胞的方法
本专利技术涉及一种新型利用摇动式一次性袋式激流反应器及细胞截留装置进行高密度长期培养CHO细胞生产抗VEGF人源化单克隆抗体的方法。
技术介绍
近年来，随着对以哺乳动物细胞为载体所生产的如蛋白质类、生长因子、疫苗和单抗等重组生物制品的需求量不断加大，人们逐渐将目光集中于大规模动物细胞培养上，并且，随着对哺乳动物细胞了解的不断深入以及新技术的应用，细胞培养的水平在逐步的提高，从最初的几升到如今的几千升甚至上万升，蛋白表达量也由最初的几毫克每升到如今的几克甚至是几十克每升。但由于细胞体外培养的特性，重组生物制品结构的复杂性及对产品要求的一致性使得动物细胞培养技术很难被完全掌握，全球各大生物技术公司也在不断的探索如何提高重组生物制品的产量及质量，并取得了很大的进展。在上世纪六十年代，灌注培养技术的出现为动物细胞大规模培养开辟了广阔的前景。在随后的研究中，灌注培养技术得到了迅速发展，已成为动物细胞大规模培养的重要方法。灌注培养的主要优点是连续灌注的培养基可以提供充分的营养成分，并带走代谢副产物，而细胞保留在反应器系统中，由于细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.高密度长期培养表达抗VEGF人源化单克隆抗体重组CHO细胞的方法，其特征在于：按照如下工艺步骤：(一)准备工作：将反应器内注入无菌验证培养液，并将细胞节流装置内同时注满该培养液并进行模拟细胞截留的操作，验证管路连接的完整性；将反应器模拟细胞培养条件运行1‑2天进行无菌验证工作，验证通过后将验证用培养液弃掉即可；(二)接种细胞：将经过悬浮驯化的可适应无血清悬浮培养基的表达抗VEGF人源化单克隆抗体的CHO细胞在从液氮罐中复苏后进行培养，在摇瓶中传2‑3代后细胞处于对数生长期时进行逐级扩增培养，当细胞数量达到接种要求时进行接种，接种后细胞密度一般为0.5×10

【技术特征摘要】
1.高密度长期培养表达抗VEGF人源化单克隆抗体重组CHO细胞的方法，其特征在于：按照如下工艺步骤：(一)准备工作：将反应器内注入无菌验证培养液，并将细胞节流装置内同时注满该培养液并进行模拟细胞截留的操作，验证管路连接的完整性；将反应器模拟细胞培养条件运行1-2天进行无菌验证工作，验证通过后将验证用培养液弃掉即可；(二)接种细胞：将经过悬浮驯化的可适应无血清悬浮培养基的表达抗VEGF人源化单克隆抗体的CHO细胞在从液氮罐中复苏后进行培养，在摇瓶中传2-3代后细胞处于对数生长期时进行逐级扩增培养，当细胞数量达到接种要求时进行接种，接种后细胞密度一般为0.5×106-2×106个/mL，接种体积可以是反应器的最小培养体积，然后继续进行扩增培养至工作体积；接种后的细胞活率应该在90％以上，待细胞密度达到5×106-10×106个/mL时进行细胞截留换液操作；在进行细胞截留换液操作以前的细胞培养阶段可以视为种子细胞扩增期，控制培养参数为PH：6.8-7.2,之间；DO在30％-80％空气饱和度；温度为34℃-37℃；(三)细胞截留换液操作：该过程可分为两个阶段进行：第一阶段：细胞增殖阶段，该阶段的目的是促进细胞的快速增殖，在达到所需的细胞浓度时进入第二阶段；在第一阶段细胞培养期间，进行细胞培养液置换速率应根据细胞的生长速度、营养物质的消耗情况进行，一般起始置换体积为20％-50％培养体积/天，然后缓慢增加，待细胞达到所需密度或增殖停止时换液速率稳定，一般培养液置换体积为...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕中华，杨新春，张道旭，张雪亭，孟庆勇，姜媛媛，张磊，高红梅，王冰，安小丽，梁秋波，汪霖，张译文，刘姗姗，徐轶尔，
申请(专利权)人：哈药集团技术中心，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23