CpG寡脱氧核苷酸、免疫组成物及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种CpG寡脱氧核苷酸(CpG‑ODN)，CpG‑ODN包含一个或多个重复的GTCGTT序列、一个或多个重复的GTT序列、以及一个或多个重复的TTTT序列，其中至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间。本发明专利技术还包含CpG‑ODN的免疫组成物及其在制备治疗或预防宿主疾病的免疫反应的药物用途。

【技术实现步骤摘要】
CpG寡脱氧核苷酸、免疫组成物及其用途
本专利技术涉及CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)、包含其的免疫组成物以及藉其诱发免疫反应的方法，具体而言，是涉及一种用于诱发TLR9-活化免疫反应和/或一种TLR-21-活化免疫反应且包含GTCGTT片段的CpG-ODN、包含其的免疫组成物以及藉其诱发该些免疫反应的方法。
技术介绍
CpG-寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)为已知具有潜力的免疫调控者，其诱发发炎性细胞介素及辅助型T细胞1(Th1)极化免疫反应，导致抗原呈现细胞中的共刺激分子的表现以及增加的B细胞、T细胞、自然杀手细胞、及其他免疫细胞的活化情况。通常，不同的CpG-ODN基于其组成及长度而具有种族特异性活性。举例而言，含有两重复的GACGTT片段且长度为20个核苷酸的CpG-1826(SEQIDNO:4)相较于含有三重复的GTCGTT片段且长度为22个核苷酸的CpG-2007(SEQIDNO:11)，对小鼠细胞的活化较为有力，而对人类细胞的活化效率较低。因此，已有设计并人工合成用于诱发特定物种中特定受体的免疫反应的不同种类的CpG-ODN。另一方面，通过CpG-PDN活化的目标受体的选择亦为降低成本及普及以CpG-ODN为基础之治疗的重点。许多研究者已发现，由于类铎受体(TLR)在先天免疫系统中所扮演的重要角色，利用其作为在宿主内通过CpG-ODN诱发的目标可为较佳的选择。举例而言，斑马鱼(Daniorerio)、河豚(Takifugurubripes)、以及鸡(Gallusgallus)中的TLR21显示出其可被CpG-ODN所活化(BrownlieR.etal.Molecularimmunology.2009；46(15):3163-70)。然而，不同的物种表现不同类型的TLR，其可在适用于对应物种之不同类型的CpG-ODN的开发上造成非必要的成本。因此，开发可诱发复数种类型的TLR的，亦即可诱发不同物种之免疫反应，且具有较佳活化效果的单一CpG-ODN为上述问题实质上的解决方法。
技术实现思路
在本专利技术中，表现TLR21及TLR9两者的石斑鱼细胞及表现TLR9的哺乳类细胞系用于本专利技术的CpG-ODN的活化效应测试中，以呈现该CpG-ODN为有力于通过活化不同类型的TLR以诱发不同物种中免疫反应。在本专利技术中，提供一种CpG寡脱氧核苷酸(CpG-ODN)，其是用于诱发宿主内TLR9-活化免疫反应、TLR21-活化免疫反应或其组合，包含：一个或多个重复的GTCGTT序列、一个或多个重复的GTT序列、以及一个或多个重复的TTTT序列，其中至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间。优选地，CpG-ODN包含如SEQIDNO:1所示的序列。优选地，CpG-ODN的长度为19个核苷酸。优选地，CpG-ODN包含如SEQIDNO:2所示的序列。优选地，CpG-ODN包含如SEQIDNO:3所示的序列。优选地，宿主是选自由人类、禽鸟类、啮齿类及鱼类所组成的群组中。本专利技术提供一种免疫组成物，其是用于诱发TLR9-活化免疫反应、TLR21-活化免疫反应或其组合，包含：一种CpG-ODN，其包含：一个或多个重复的GTCGTT序列；一个或多个重复的GTT序列；以及一个或多个重复的TTTT序列，其中至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间；以及载体、赋形剂或其组合。优选地，免疫组成物进一步包含选自由病毒、细菌、原生动物及肿瘤所组成的群组中的抗原。此外，本专利技术更提供一种免疫组成物在制备用于诱发免疫反应的药物的用途，该免疫反应是用于治疗或预防宿主之疾病，该用途包含：制备用于诱发TLR9-活化免疫反应、TLR21-活化免疫反应或其组合的且包含有效剂量的CpG-ODN的免疫组成物，其中该CpG-ODN包含：一个或多个重复的GTCGTT序列；一个或多个重复的GTT序列；以及一个或多个重复的TTTT序列，其中至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间；以及施予免疫组成物至宿主。优选地，宿主是选自由人类、禽鸟类、啮齿类及鱼类所组成的群组中。优选地，有效剂量为0.01mg/kg体重至20mg/kg体重。优选地，上述疾病是选自由以下所组成的群组中：乳癌、前列腺癌、黑色素瘤、淋巴瘤、非小细胞肺癌、基底细胞癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、以及由B型肝炎病毒、炭疽芽孢杆菌、疟疾、肺炎链球菌、单纯疱疹病毒、流感病毒或其组合引起的传染性疾病。优选地，施予包含从口腔施予或通过注射手段施予。优选地，本专利技术的CpG-ODN可活化宿主内的TLR21和/或TLR9两者，亦即，可诱发人类、禽鸟类、啮齿类、鱼类及其他比现TLR21和/或TLR9之物种的免疫反应。附图说明在附图的柱状图中，统计信息记载如下：数值代表平均值±标准偏差(n为3个独立实验)。*P<0.05、**P<0.01代表与控制组的比较。进一步地，附图中所标注的CpG-ODN序列是记载于表1中。图1A呈现计算机建模点带石斑鱼(orange-spottedgrouper)(osg,E.coioides)及鞍带石斑鱼(giantgrouper)(gg,E.lanceolatus)TLR21蛋白质胞外域结构。图1B到图1F呈现osgTLR21A、osgTLR21B及ggTLR21铎/介白素受体(TIR)结构域的蛋白质序列比对。图2A及图2B是参照GenBank数据库取得的信息显示ggTLR21及不同TLR间的蛋白质相似度。图3第(I)到(V)部分显示通过不同类型的CpG-ODN诱发的石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21，其中图3第(V)部分显示以β-肌动蛋白作为注入控制组(loadingcontrol)之石斑鱼TLR21活化情形的免疫墨点分析结果。图4第(I)到(III)部分呈现通过不同类型的CpG-ODN及其裁切后的衍生物诱发之石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21活化情形的柱状图。图5第(I)到(III)部分呈现通过第3图中具有较高活性之不同类型的CpG-ODN及其裁切后的衍生物诱发之石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21活化情形的柱状图。图6第(I)到(III)部分呈现通过图3中具有较高活性之不同类型的CpG-ODN裁切后的衍生物诱发之石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21活化情形的柱状图。图7第(I)到(III)部分呈现通过图3中具有较高活性之不同类型的CpG-ODN裁切后的衍生物诱发之石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21活化情形的柱状图。图8第(I)到(IV)部分呈现通过不同类型的CpG-ODN及其裁切后的衍生物诱发之石斑鱼(Epinephelusspp.)TLR21、人类TLR9及小鼠TLR9活化情形的柱状图。图9第(I)到(IV)部分显示通过不同类型的CpG-ODN及其裁切后的衍生物诱发点带石斑鱼(Epinepheluscoioides)头肾细胞(headkidneycell)中不同细胞介素表现的诱发情形的柱状图。图10第(I)到(IV)部分显示通过不同类型的CpG-ODN及其裁切后的衍生物诱发点带石斑鱼(Epinepheluscoioid本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，是用于诱发宿主内TLR9‑活化免疫反应、TLR21‑活化免疫反应或其组合，包含：一个或多个重复的GTCGTT序列；一个或多个重复的GTT序列；以及一个或多个重复的TTTT序列；其中，至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间。

【技术特征摘要】
2017.10.02 US 15/722,9491.一种CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，是用于诱发宿主内TLR9-活化免疫反应、TLR21-活化免疫反应或其组合，包含：一个或多个重复的GTCGTT序列；一个或多个重复的GTT序列；以及一个或多个重复的TTTT序列；其中，至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之间。2.如权利要求1所述的CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，包含如SEQIDNO:1所示的序列。3.如权利要求1所述的CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，长度为19个核苷酸。4.如权利要求1所述的CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，包含如SEQIDNO:2所示的序列。5.如权利要求1所述的CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，包含如SEQIDNO:3所示的序列。6.如权利要求1所述的CpG寡脱氧核苷酸，其特征在于，该宿主是选自由人类、禽鸟类、啮齿类及鱼类所组成的群组中。7.一种免疫组成物，其特征在于，是用于诱发TLR9-活化免疫反应、TLR21-活化免疫反应或其组合，包含：CpG寡脱氧核苷酸，其包含：一个或多个重复的GTCGTT序列；一个或多个重复的GTT序列；以及一个或多个重复的TTTT序列；其中，至少一个重复的GTCGTT序列是编码在GTT序列及TTTT序列之...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄宗显，叶大玮，赖朝阳，刘奕玲，吕志豪，
申请(专利权)人：财团法人卫生研究院，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71