一种复合生长因子促修复凝胶及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种复合生长因子促修复凝胶及其制备方法与应用，其中，所述凝胶以羧甲基壳聚糖、羟乙基纤维素和透明质酸钠形成复合凝胶基体，然后在所述复合凝胶基体中负载有人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子，实现生长因子与凝胶基体的联用，仿生构建创面修复微环境以促进创面的愈合；所述制备方法是先制备复合凝胶基体，然后采用肝素钠和甘露醇作为蛋白保护剂，最后，将复合凝胶基体与活性成分混合，得到所述复合生长因子促修复凝胶。本发明专利技术所述复合生长因子促修复凝胶内复合有生长因子，仿生构建创面修复微环境，改善了创面区微环境，促进了伤口和创面的愈合，显著提高创面愈合率，缩短创面愈合时间。

Compound growth factor gel for promoting repair and preparation method and application thereof

The invention discloses a composite growth factor promoting repair gel and a preparation method and application thereof. Wherein, the gel forms a composite gel matrix with carboxymethyl chitosan, hydroxyethyl cellulose and sodium hyaluronate, and then carries the basic fibroblast growth factor and human acidic fibroblast growth factor in the composite gel matrix, and realizes the combination of growth factor and gel matrix. Biomimetic construction of wound repair microenvironment to promote wound healing; the preparation method is to prepare composite gel matrix, and then use heparin sodium and mannitol as protein protectant. Finally, the composite gel matrix and active ingredients are mixed to obtain the composite growth factor to promote repair gel. The compound growth factor is combined with growth factors in the gel of the composite growth factor. The biomimetic construction of the wound surface can repair the micro environment, improve the micro environment of the wound area, promote the healing of wounds and wounds, significantly improve the healing rate of wounds, and shorten the healing time of wounds.

【技术实现步骤摘要】
一种复合生长因子促修复凝胶及其制备方法与应用
本专利技术属于凝胶领域，尤其涉及复合有生长因子的凝胶及其制备方法与应用。
技术介绍
创面愈合指的是因为外伤或其他伤病的病变造成组织缺损后，局部组织通过再生、修复、重建而进行修补的一系列病理生理过程。其是一个动态、复杂的过程，其涉及到细胞外基质、激酶、各类细胞和许多其他因素等。由于创面愈合过程中病理和生理过程的复杂性，因此，彻底实现组织再生是极其困难的。
技术实现思路
为了克服上述问题，本专利技术人进行了锐意研究，将人碱性成纤维生长因子(bFGF)和人酸性成纤维生长因子(aFGF)与水凝胶联用，仿生构建创面修复微环境以促进创面的愈合，从而完成本专利技术。本专利技术的一方面在于提供一种复合生长因子促修复凝胶，具体体现在以下几个方面：(1)一种复合生长因子促修复凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，其由包括以下重量配比的原料成分制成：(2)根据上述(1)所述的凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，所述人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子的用量分别为0.01～0.02重量份，优选为0.015重量份。(3)根据上述(1)或(2)所述的凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，所述羧甲基壳聚糖的用量为15～35重量份，羟乙基纤维素的用量为2～10重量份；优选地，所述羧甲基壳聚糖的用量为30重量份，羟乙基纤维素的用量为5重量份。(4)根据上述(1)至(3)之一所述的凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，所述透明质酸钠的用量为1～10重量份，优选为2～8重量份，例如5重量份。(5)根据上述(1)至(4)之一所述的凝胶，其中，所述凝胶还包含甘油和抑菌剂，优选地，所述抑菌剂包括尼泊金甲酯和任选的尼泊金丙酯。(6)根据上述(1)至(5)之一所述的凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，所述甘油的用量为10～50重量份，优选为20～50重量份，更优选为50重量份。(7)根据上述(1)至(6)之一所述的凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，任选地，所述尼泊金甲酯的用量为0.5～2重量份，尼泊金丙酯的用量为0.05～0.8重量份；优选地，所述尼泊金甲酯的用量为1～2重量份，任选地，尼泊金丙酯的用量为0.1～0.5重量份；更优选地，所述尼泊金甲酯的用量为1重量份，任选地，尼泊金丙酯的用量为0.2～0.4重量份。(8)根据上述(1)至(7)之一所述的凝胶，其中，所述凝胶还包含肝素钠和甘露醇，优选地，基于1000重量份的凝胶，所述肝素钠的用量为0.02～0.2重量份，甘露醇的用量为5～20重量份；和/或所述凝胶于2～6℃保存，例如4℃。本专利技术第二方面提供了一种上述(1)至(8)所述复合生长因子促修复凝胶的制备方法，其中，所述方法包括以下步骤：步骤1、将尼泊金甲酯和任选的尼泊金丙酯加入水中，得到抑菌剂水溶液；步骤2、将羧甲基壳聚糖、羟乙基纤维素、透明质酸钠和甘油加入步骤1得到的抑菌剂水溶液中，搅拌，然后进行灭菌处理，得到凝胶基体；步骤3、将人碱性成纤维生长因子、人酸性成纤维生长因子、肝素钠和甘露醇加入水中，然后过滤除菌，得到活性成分；步骤4、将步骤2得到的凝胶基体与步骤3得到的活性成分混合，搅拌，得到所述复合生长因子促修复凝胶。本专利技术第三方面提供了上述(1)至(8)所述复合生长因子促修复凝胶或第二方面所述方法得到的复合生长因子促修复凝胶用于创面修复的应用。附图说明图1示出实施例得到的凝胶的扫描电镜图；图2示出实施例1得到的凝胶中人碱性成纤维生长因子(bFGF)和人酸性成纤维生长因子(aFGF)的稳定性结果图；图3示出实施例1(b)和空白组(a)对金黄色葡萄球菌的抗菌性能检测结果；图4示出实施例1(b)和空白组(a)对大肠杆菌的抗菌性能检测结果；图5示出采用实施例所述凝胶以及对照组(生理盐水)分别对大鼠进行创面修复实验结果；图6示出采用实施例1所述凝胶以及对照组(生理盐水)进行大鼠创面修复时，创面修复面积与修复时间的关系结果图。具体实施方式下面通过实施例和实验例对本专利技术进一步详细说明。通过这些说明，本专利技术的特点和优点将变得更为清楚明确。本专利技术一方面提供了一种复合生长因子促修复凝胶，其中，基于1000重量份凝胶，其由包括以下重量配比的原料成分制成：其中，以人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子为活性成分，以羧甲基壳聚糖、羟乙基纤维素和透明质酸钠形成凝胶基质。其中，所述羧甲基壳聚糖和羟乙基纤维素之间可以通过氢键进行复合，形成可降解的水凝胶，用于承载生长因子。在本专利技术中，采用羧甲基壳聚糖为凝胶主体的原因在于：(1)其水溶性天然高分子，具有良好的生物相容性、生物可降解性，无毒副作用；(2)其具有一定的接触抑菌作用；(3)其具有止血作用，对血液中的红血球有凝聚作用，促进凝血，这是因为其所富含的正电荷与细胞表面带负电荷的胞壁酸相互吸引，引起血细胞的聚集，达到止血的目的；(4)其具有弱碱性，其表面的Zeta电势不是很高的正值，表明其不会对周围的组织产生强烈的刺激作用，故而可以止痛，还具有消炎作用；(5)其可以防止创面粘连；(6)可与生长因子协同促创面愈合。根据本专利技术一种优选的实施方式，基于1000重量份凝胶，所述人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子的用量分别为0.01～0.02重量份。在进一步优选的实施方式中，基于1000重量份凝胶，所述人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子的用量分别为0.015重量份。其中，人碱性成纤维生长因子可参与多种组织的创伤修复过程，是重要的创伤愈合因子之一，对烧伤、外伤及各种慢性难愈合创面具有显著的促修复作用，并且安全、有效、无不良反应；人酸性成纤维生长因子对深二度烧伤及削痂术后应用具有良好的促愈合作用，因此，在本专利技术中，选择修复用生长因子用以促进创面愈合。根据本专利技术一种优选的实施方式，基于1000重量份凝胶，人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子的总用量为0.03重量份。其中，生长因子总浓度应控制在30μg/g，与临床生长因子用药浓度接近，从而避免高浓度生长因子潜在的致癌性。根据本专利技术一种优选的实施方式，基于1000重量份凝胶，所述羧甲基壳聚糖的用量为15～35重量份，羟乙基纤维素的用量为2～10重量份。在进一步优选的实施方式中，基于1000重量份凝胶，所述羧甲基壳聚糖的用量为30重量份，羟乙基纤维素的用量为5重量份。其中，羧甲基壳聚糖和羟乙基纤维素的用量对凝胶的形成至关重要，尤其是羟乙基纤维素。具体地，若羟乙基纤维素的用量太少，体系粘度太小，不能形成凝胶；若羟乙基纤维素的用量太多，会导致体系中形成的氢键密度过大，体系的物理交联程度过大，这样，导致体系的粘度太大，涂抹困难，而且会导致凝胶中的活性生长因子不易释放。因此，在本专利技术中，严重控制羧甲基壳聚糖和羟乙基纤维素的用量。在本专利技术中，所述羧甲基壳聚糖粘均分子量为200000～300000Da，羟乙基纤维素在20℃下、2％水溶液中的黏度为1500～2500mpa·s，因为，在这个黏度以及适当添加比例条件下能使凝胶保持稳定的形态。其中，本专利技术中凝胶骨架主体为羧甲基壳聚糖，是通过引入羧甲基而破坏了壳聚糖的二次结构，故不具备很强的阳离子特征，其可与其他很多大分子进行复配，扩展了其使用范围。根据本专利技术一种优选的实施方式，基于1000重量份本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复合生长因子促修复凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，其由包括以下重量配比的原料成分制成：

【技术特征摘要】
1.一种复合生长因子促修复凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，其由包括以下重量配比的原料成分制成：2.根据权利要求1所述的凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，所述人碱性成纤维生长因子和人酸性成纤维生长因子的用量分别为0.01～0.02重量份，优选为0.015重量份。3.根据权利要求1或2所述的凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，所述羧甲基壳聚糖的用量为15～35重量份，羟乙基纤维素的用量为2～10重量份；优选地，所述羧甲基壳聚糖的用量为30重量份，羟乙基纤维素的用量为5重量份。4.根据权利要求1至3之一所述的凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，所述透明质酸钠的用量为1～10重量份，优选为2～8重量份，例如5重量份。5.根据权利要求1至4之一所述的凝胶，其特征在于，所述凝胶还包含甘油和抑菌剂，优选地，所述抑菌剂包括尼泊金甲酯和任选的尼泊金丙酯。6.根据权利要求1至5之一所述的凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，所述甘油的用量为10～50重量份，优选为20～50重量份，更优选为50重量份。7.根据权利要求1至6之一所述的凝胶，其特征在于，基于1000重量份凝胶，所述尼泊金甲酯的用量为0.5～2重量份，任选地，尼...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏宇，肖健，许可，孔晓霞，徐科滨，吴疆，赵应征，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33