The invention relates to the technical field of molecular biology, in particular to gene knockout plasmids and cell lines, which can significantly inhibit the degradation of rRNA and promote the proliferation of PRV, and can be used for the study of antiviral effects.
【技术实现步骤摘要】
基因敲除质粒、细胞系及制备方法和应用
本专利技术属于分子生物学
，特别涉及一种基因敲除质粒，还涉及细胞系，还涉及此基因敲除质粒和细胞系的制备方法及应用。
技术介绍
RibonucleaseL(RNaseL)属于2-5腺苷酸系统，具有核酸内切酶活性，在干扰素的抗病毒过程中发挥着重要的作用，猪RNaseL基因全长14326bp，包含6个外显子，编码744个氨基酸，从结构和功能上可分为氨基端的锚定蛋白区（A区）、中间的激酶样区（K区）和羧基端的RNA酶活性区（N区）三个区域。其中，锚定蛋白区是核酸与蛋白结合的区域，RNA酶活性区是RNaseL蛋白中具有酶活性的区域。无活性RNaseL的RNA酶活性区和激酶样区形成发夹结构，同时锚定蛋白区与RNA酶活性区以共价键连接，阻止二聚体的形成，从而抑制RNaseL的核糖核酸酶活性。RNaseL作为一种核酸内切酶，在先天性免疫过程当中发挥着重要的作用。当病毒感染细胞后，病毒RNA或者DNA在复制和转录过程当中形成的双链RNA（dsRNA）能够激活2’-5’寡聚腺苷酸合成酶（OAS），进而催化ATP合成2’-5’寡聚腺苷酸（2-...
【技术保护点】
1.一种基因敲除质粒，其特征在于在Px459质粒的Hind III酶切位点以及距离Hind III酶切位点最远的BbsI酶切位点之间插入的核苷酸序列见序列表中序列1的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种基因敲除质粒，其特征在于在Px459质粒的HindIII酶切位点以及距离HindIII酶切位点最远的BbsI酶切位点之间插入的核苷酸序列见序列表中序列1的核苷酸序列。2.一种权利要求1中所述基因敲除质粒的制备方法，其特征在于是通过以下步骤得到的：（1）设计两对引物，核苷酸序列如下：sRNaseL-KO-3Fwd:5’-CACCTTCATGGAAGCCGCCGTGTA-3’，sRNaseL-KO-3Rev:5’-AAACTACACGGCGGCTTCCATGAA-3’，sRNaseL-KO-4Fwd:5’-CACCCAGCCGAGCCAACGATAACG-3’，sRNaseL-KO-4Rev:5’-AAACCGTTATCGTTGGCTCGGCTG-3’，将引物sRNaseL-KO-3Fwd和sRNaseL-KO-3Rev进行磷酸化和退火，得到sRNaseL-KO-3P，将引物sRNaseL-KO-4Fwd和sRNaseL-KO-4Rev进行磷酸化和退火，得到sRNaseL-KO-4P；（2）构建基因敲除质粒用BbsI双酶切质粒Px459M，胶回收得到载体片段1，用BbsI双酶切质粒EZ-Guide-XH，胶回收得到载体片段2，将sRNaseL-KO-3P和载体片段1相连，得到Px459M-sRNaseL-KO-3P，将sRNaseL-KO-4P和载体片段2相连，得到EZ...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜以军，齐静，隋超，吴香菊，
申请(专利权)人：杜以军，山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37
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