一种HT-29细胞炎症模型的建立方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体涉及一种HT‑29细胞炎症模型的建立方法及应用。本发明专利技术包括两个步骤，细胞处理和结果检测；所述细胞处理步骤为：将HT‑29细胞接种于24孔板，过夜培养，待细胞贴壁生长后，更换培养基，并加入人源TNF‑α，终浓度为20mg/ml，共培养12小时后，在培养基中加入LPS，终度为1μg/ml，培养15小时；所述结果检测包括对处理后的HT‑29细胞的TLR4、NF‑κB、TNF‑α和IL‑1β的mRNA和蛋白质的表达量检测。本发明专利技术建立了HT‑29细胞炎症模型，提供了对溃疡性结肠炎有治疗或症状缓解的药物细胞水平的筛选方法，为对动物溃疡性结肠炎模型有治疗效果的药物的治疗机制研究提供方法步骤。

【技术实现步骤摘要】
一种HT-29细胞炎症模型的建立方法及应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种HT-29细胞炎症模型的建立方法及应用。
技术介绍
溃疡性结肠炎(Ulcerativecolitis，UC)，是一种慢性非特异性结肠炎症，属于炎症性肠病(Inflammatoryboweldisease，IBD)的一种，主要表现为腹痛、腹泻、便血等。病变多自结肠远段向近段发展，严重者可累及全结肠和回肠末段。溃疡性结肠炎目前尚无法完全治愈，结肠炎症的反复发作严重影响了患者的生活质量，它可以进一步发展成结肠癌。UC的病因及发病机制不清楚，它涉及至少三个相互作用的元素：包括遗传易感性、免疫调节异常和肠道微生物改变等。此外,环境、饮食、心理健康等因素也是重要诱因。随着UC发病率的升高，寻找治疗或者缓解UC的药物成为研究热点，以筛选有效药物和研究药物作用机制为目的的细胞炎症模型急需建立。消化道上皮细胞，是抵御致病菌、有毒化学物质、过敏原等外来有害物质侵袭的第一道防线，肠粘膜屏障功能受损可加速炎症性肠病的进展。当肠道受到外界刺激时，肠道黏膜会发生炎症反应，这是一种正常的防御性反应，对维持肠黏膜的屏障功能至关重要。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HT‑29细胞炎症模型的建立方法，其特征为：包括细胞处理和结果检测；所述细胞处理步骤为：将HT‑29细胞接种于24孔板，过夜培养，待细胞贴壁生长后，更换培养基，并加入人源TNF‑α，终浓度为20mg/ml，共培养12小时后，在培养基中加入LPS，终度为1μg/ml，培养15小时；所述结果检测为对处理后的HT‑29细胞的TLR4、NF‑κB、TNF‑α和IL‑1β的mRNA和蛋白质的表达量检测。

【技术特征摘要】
1.一种HT-29细胞炎症模型的建立方法，其特征为：包括细胞处理和结果检测；所述细胞处理步骤为：将HT-29细胞接种于24孔板，过夜培养，待细胞贴壁生长后，更换培养基，并加入人源TNF-α，终浓度为20mg/ml，共培养12小时后，在培养基中加入LPS，终度为1μg/ml，培养15小时；所述结果检测为对处理后的HT-29细胞的TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白质的表达量检测。2.根据权利要求1所述的一种HT-29细胞炎症模型的建立方法，其特征为：所述细胞处理过程中所用的HT-29细胞的培养基配制方法为：无菌配制，DMEM高糖培养基中加入10％FBS。3.根据权利要求1所述的一种HT-29细胞炎症模型的建立方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜艳，郭翀，晋臻，何增品，段勇，
申请(专利权)人：昆明医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：云南,53