一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法技术

本发明专利技术公开了一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法，所述方法包含步骤：(a)将样本通过密度梯度离心处理样本，且样本取自癌症患者的体液，检测经处理样本，即候选样本，涉及生物检测技术领域。该在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法，利用两种能特异吸附的生物磁珠吸附出对端粒酶活性检测会产生影响的免疫细胞，使实验不会出现假阳性的结果，通过负向筛选保证其他细胞仍在样本中，使得实验不会出现假阴性的结果。

【技术实现步骤摘要】
一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法
本专利技术涉及生物检测
，具体为一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法。
技术介绍
癌细胞是由正常细胞恶性转化产生，具有不可控的增殖和转移能力。由于癌细胞具有高转移特征，在癌症患者尿液、血液等体液中含有脱落的癌细胞，可以作为癌症早期筛查和预后诊断的指标。已知在超过90％的癌细胞中均可以检测到端粒酶，而正常体细胞中是检测不到端粒酶的。因此对新鲜体液样本中细胞的端粒酶的检测，可以对癌症的早筛及预后起到参考作用。这作为一种无创检查手段，在肿瘤的早期诊断中有着重要意义，随着分子生物学的发展、高敏感性方法的应用及特异性指标的检测，提高了微转移检测的阳性率，阳性者是否一定发展为转移，需要具备肿瘤细胞有活性和有癌细胞适宜种植的场所这两个基本条件。患者的癌细胞表现出完全不同于正常细胞的生理特征。实际上，使用密度梯度离心的方法处理样本，获得的样本中除了所需的细胞，还含有大量其他的免疫细胞。在部分免疫细胞中有少量端粒酶的存在，会对端粒酶活性检测产生影响，从而出现假阳性等结果；使用流式细胞仪对样本进行处理的话，只能捕捉到已知表面抗原的癌细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法，所述方法包含步骤：(a)将样本通过密度梯度离心处理样本，且样本取自癌症患者的体液，检测经处理样本，即候选样本，其中密度梯度离心是通过下述步骤实现的：(i)将癌症患者的体液样本通过离心设备，离心参数为1500rpm/min，进行水平离心5min；(ii)将步骤(i)中离心后，所得样本去上清，并且加入5ml的1*PBS溶液，再加入2至3ml的淋巴细胞分离液，通过离心设备，离心参数为1600rpm/min，水平离心10min；(iii)将步骤(ii)中离心后，取所得样本的中间液面分界层液体3至4ml移至另离心管中，通过离心设备，离心参数为1500...

【技术特征摘要】
1.一种在液体活检中利用生物磁珠负向筛选癌细胞的方法，所述方法包含步骤：(a)将样本通过密度梯度离心处理样本，且样本取自癌症患者的体液，检测经处理样本，即候选样本，其中密度梯度离心是通过下述步骤实现的：(i)将癌症患者的体液样本通过离心设备，离心参数为1500rpm/min，进行水平离心5min；(ii)将步骤(i)中离心后，所得样本去上清，并且加入5ml的1*PBS溶液，再加入2至3ml的淋巴细胞分离液，通过离心设备，离心参数为1600rpm/min，水平离心10min；(iii)将步骤(ii)中离心后，取所得样本的中间液面分界层液体3至4ml移至另离心管中，通过离心设备，离心参数为1500rpm/min，水平离心5min，去掉上清液，得到候选样本；(b)取得候选样本加入500ul的分离缓冲液，再加入经预洗的磁珠，并放置在四维旋转仪上进行旋转孵育，旋转过后再将候选样本放置在磁力架上，取上清转入新离心管中，通过离心设备，离心参数为1500rpm/min，水平离心5min，去掉上清液，得到标准样本；(c)将标准样本通过磁珠PCR技术去除残留的蛋白质影响，最后进行T...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾凯强，葛远龙，李国庆，杨奇飞，黄洪斌，周君，
申请(专利权)人：江苏凯强医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32