The present invention relates to a method for constructing a high-fat model of HepG2 cells. HepG2 cells are inoculated on 6-well plates, incubated for 20 to 30 hours, then taken out and set up a control group and a model group; the control group is added with a high-sugar DMEM medium containing 8 to 10 v% FBS, and the model group is added with an 8 to 10 v% FBS high-sugar DMEM medium containing 2.5 mmmol/L oleic acid; the six-well plates are placed in a incubator with 37 C and 5 v% CO 2 to remove the culture medium. The cell lysate was centrifuged and the supernatant was taken to determine the content of TG and LDL_C. When the content of TG and LDL_C in the model group was higher than that in the control group, the high-fat model of HepG2 cells was successfully constructed. The invention can effectively simulate the situation of human hyperlipidemia by constructing a HepG2 cell hyperlipidemia model, and can be more convenient, fast and effective to determine whether food or medicine can effectively reduce lipids.
【技术实现步骤摘要】
一种HepG2细胞高脂模型的构建方法及应用
本专利技术属于生物医药
,涉及一种HepG2细胞高脂模型的构建方法。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种遗传-环境-代谢应激相关性疾病,包括单纯性脂肪性肝病、脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化等多种类型。随着生活水平的提高,NAFLD的患病率逐年上升,成为慢性肝病的首要原因。NAFLD本身会向肝硬化、甚至是肝癌进展,同时也会加速慢性肝炎等其他肝病向肝硬化、肝癌进展;NAFLD还可通过加剧机体代谢紊乱促进糖尿病、冠心病的发展,导致代谢综合征相关肿瘤及心血管事件的高发。此外,NAFLD患者的肝脏对很多药物和毒物的敏感性增加,这增加了临床用药风险。因此,加强NAFLD的相关研究有着重要的意义。目前,非酒精性脂肪性肝病的发病机制尚未完全明确,只知道NAFLD的发病与胰岛素抵抗、线粒体功能障碍、氧化应激和肥胖等因素密切相关,且线粒体损伤引起的能量代谢障碍在NAFLD发病机制中起关键作用。建立合适的动物模型,对于研究非酒精性脂肪性肝病的发病机制及治疗方法均有着重要的意义。目前大鼠、小鼠等动物模型是研究NAFLD发病的重要实验载体,但存在实验周期长、个体差异大、影响因素众多和实验条件不易控制等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术中动物实验耗时长、个体差异大、实验条件不易控制等的问题,提供一种HepG2细胞高脂模型的构建方法。该体外脂肪变性细胞模型具有培养环境相对稳定、影响因素较少、实验条件易于控制和实验周期较短等优点。技术方案一种HepG2细胞高脂模型的构建方法,包括如下步骤:(1)将HepG2细胞接 ...
【技术保护点】
1.一种HepG2细胞高脂模型的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将HepG2细胞接种于6孔板,孵育20‑30h后取出,设置对照组和模型组;其中,对照组加含8‑10v%FBS的高糖DMEM培养基,模型组加含终浓度2.5mmol/L油酸的8‑10v%FBS高糖DMEM培养基;(2)将6孔板置于37℃、5v%CO2的培养箱孵育20‑30h后去除培养液,接着用PBS清洗,然后进行消化,消化后离心,弃去上清液,往沉淀中再次加入PBS清洗,然后离心,弃去上清液,得到细胞沉淀,充分裂解细胞,得到细胞裂解液;(3)将细胞裂解液离心,取上清液,测定TG和LDL‑C含量,当模型组细胞比对照组细胞的TG和LDL‑C的含量高时,模型组细胞即为HepG2细胞高脂模型。
【技术特征摘要】
1.一种HepG2细胞高脂模型的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将HepG2细胞接种于6孔板,孵育20-30h后取出,设置对照组和模型组;其中,对照组加含8-10v%FBS的高糖DMEM培养基,模型组加含终浓度2.5mmol/L油酸的8-10v%FBS高糖DMEM培养基;(2)将6孔板置于37℃、5v%CO2的培养箱孵育20-30h后去除培养液,接着用PBS清洗,然后进行消化,消化后离心,弃去上清液,往沉淀中再次加入PBS清洗,然后离心,弃去上清液,得到细胞沉淀,充分裂解细胞,得到细胞裂解液;(3)将细胞裂解液离心,取上清液,测定TG和LDL-C含量,当模型组细胞比对照组细胞的TG和LDL-C的含量高时,模型组细胞即为HepG2细胞高脂模型。2.如权利要求1所述HepG2细胞高脂模型的构建方法,其特征在于,步骤(1)中,含终浓度2.5mmol/L油酸的8-10v%FBS高糖DMEM培养基的制备方法:70℃振荡水浴下将油酸溶于0.1...
【专利技术属性】
技术研发人员:王立峰,李枝芳,姚轶俊,王博,
申请(专利权)人:南京财经大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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